牙髓干细胞

    雌激素刺激下人牙周膜干细胞成骨分化及通路间的交叉串扰
  • 图1|人牙周膜干细胞的形态及鉴定

    结果:倒置显微镜下观察,原代细胞在组织块贴壁培养约7 d后爬出,呈纺锤形或多角形,放射状生长。细胞数量逐渐增多,聚集成旋涡状,排列规律,形态均一,见图1A。纯化及传代培养后,人牙周膜干细胞呈聚集状生长,多层重叠,局部堆积成灶状,见图1B,C。流式细胞技术显示,表面抗原标志物CD90、CD29、CD146、STRO-1阳性率分别为99.25%,98.66%,79.45%,19.36%,而CD31、CD45阳性率为0.67%和0.23%,见图1D,证明细胞为间充质来源,不含淋巴系细胞或内皮细胞成分。成骨诱导培养21 d,茜素红染色观察到大量橘红色钙盐形成,见图1E。成脂诱导培养21 d,油红O染色可见细胞内脂滴数量明显增多,见图1F。


    图2|雌激素激活Wnt/Ca2+信号通路

    结果:成骨诱导培养7 d后,Fluo-4检测见图2A,与空白组相比,对照组细胞内Ca2+浓度显著升高(P < 0.01),雌激素组进一步上升(P < 0.01)。成骨诱导7 d后,对照组CaMKII和NLK基因表达水平较空白组显著升高,雌激素组进一步上升,差异有显著性意义,见图2B。CaMKII的蛋白表达水平与基因表达水平变化一致,见图2C。


    图5|Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+信号通路间交叉串扰

    结果:与雌激素组相比,L-690,330组细胞内Ca2+浓度降低(P < 0.05),XAV939组细胞内Ca2+浓度升高(P < 0.05),L-690,330+XAV939组细胞内Ca2+降低(P < 0.01),见图5A。qRT-PCR结果显示:L-690,330组CaMKII、NLK基因表达量明显低于雌激素组(P < 0.001),但β-catenin基因表达量较高(P < 0.001)。XAV939组CaMKII和NLK基因表达量高于雌激素组(P < 0.01),而β-catenin基因表达量低于雌激素组(P < 0.01)。L-690,330+ XAV939组与雌激素组相比,这3个基因的表达水平均较低(P < 0.001),见图5B。


    点击此处查看全文

  • 发布日期: 2022-01-30  浏览: 471