中国组织工程研究 ›› 2010, Vol. 14 ›› Issue (11): 1948-1950.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.012
• 组织构建实验造模 experimental modeling in tissue construction • 上一篇 下一篇
昝玉玺,王 俐,张俊河,王天云
Zan Yu-xi, Wang Li, Zhang Jun-he, Wang Tian-yun
摘要:
背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列。大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等。 目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响。 方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体。TaqDNA聚合酶、T4 DNA连接酶、DNA Marker、限制性内切酶BamHⅠ、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连 TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B 核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。 结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931 bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamHⅠ酶切后显示5.9 kb和931 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B 核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中。提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体。
中图分类号: