推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响

doi:10.12307/2025.784

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (26): 5549-5555.doi: 10.12307/2025.784

• 肌肉肌腱韧带组织构建 tissue construction of the muscle, tendon and ligament • 上一篇下一篇

推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响

孙雅蕙1，2，王宇峰1，郭超2，姚俊杰1，纪媛媛2，李中旭2，娄惠娟2，江晶蕾2，孙一萍1，徐婧1，丛德毓1

1长春中医药大学，吉林省长春市 130117；2长春中医药大学附属医院，吉林省长春市 130021

收稿日期:2024-08-05 接受日期:2024-10-18 出版日期:2025-09-18 发布日期:2025-02-21
通讯作者: 丛德毓，主任医师，长春中医药大学附属医院推拿科，吉林省长春市 130021
作者简介:孙雅蕙，女，1994年生，吉林省长春市人，汉族，博士，主治医师，主要从事经穴推拿治疗脏腑病的研究。
基金资助:
吉林省自然科学基金项目(YDZJ202201ZYTS214)，项目负责人：丛德毓；国家自然科学基金项目(82274673)，项目负责人：丛德毓

Effect of massage on extracellular matrix collagen deposition in skeletal muscle of type 2 diabetic rats

Sun Yahui1, 2, Wang Yufeng1, Guo Chao2, Yao Junjie1, Ji Yuanyuan2, Li Zhongxu2, Lou Huijuan2, Jiang Jinglei2, Sun Yiping1, Xu Jing1, Cong Deyu1

1Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, Jilin Province, China; 2Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130021, Jilin Province, China

Received:2024-08-05 Accepted:2024-10-18 Online:2025-09-18 Published:2025-02-21
Contact: Cong Deyu, Chief physician, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, Jilin Province, China
About author:Sun Yahui, MD, Attending physician, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, Jilin Province, China; Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130021, Jilin Province, China
Supported by:
Natural Science Foundation of Jilin Province of China, No. YDZJ202201ZYTS214 (to CDY); National Natural Science Foundation of China, No. 82274673 (to CDY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
细胞外基质：由胶原、蛋白聚糖、氨基聚糖、弹性蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白等多种糖蛋白组成的非细胞三维大分子网络。在骨骼肌受到损伤后，细胞外基质在肌纤维的力量传递、保持结构完整性以及损伤修复过程中发挥重要作用。
胶原沉积：是组织修复和再生过程中的一个重要环节，胶原蛋白的合成和沉积对于新生组织的形成至关重要。胶原异常过度沉积是纤维化的显著特征，胶原合成与代谢失衡导致胶原蛋白在特定组织中异常积聚，形成硬化的纤维组织。

背景：研究发现，推拿能降低血糖、促进成肌因子的表达及提高骨骼肌含量。细胞外基质是骨骼肌的重要成分，推拿与细胞外基质的关联及作用机制尚不明确。
目的：探究推拿对2型糖尿病肌少症大鼠细胞外基质胶原沉积的影响。
方法：将24只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组和推拿组，采用高脂饲料结合链脲佐菌素方法建立2型糖尿病肌少症模型，造模成功后推拿组给予腹部结合后肢部推拿治疗。治疗8周后，检测大鼠空腹血糖、血清胰岛素水平，双能X射线检测骨骼肌质量，小动物跑步机检测力竭时间，斜板实验检测滑落角度，苏木精-伊红染色观察骨骼肌组织的病理改变，Masson染色观察骨骼肌胶原沉积情况，qPCR和Western blot检测骨骼肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达。
结果与结论：①与模型组比较，推拿组大鼠血糖(P < 0.05)、血清胰岛素(P < 0.01)降低；②与模型组比较，推拿组大鼠骨骼肌质量、跑步力竭时间、斜板实验角度均增加(P < 0.05)；③与模型组比较，推拿组大鼠骨骼肌排列整齐，肌萎缩改善，胶原纤维沉积减少；④与模型组比较，推拿组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达降低(P < 0.05)；⑤结果表明，推拿可以提高胰岛素敏感性，降低2型糖尿病大鼠血糖水平，改善骨骼肌质量、力量和功能，减少胶原沉积，可能是推拿发挥治疗作用的潜在靶点。
https://orcid.org/0009-0002-7478-9801(孙雅蕙)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 推拿, 2型糖尿病, 肌少症, 细胞外基质, 胶原沉积, Ⅰ型胶原, Ⅲ型胶原, 工程化组织构建

Abstract: BACKGROUND: Studies have found that massage can reduce blood sugar, promote myogenic factor expression, and increase skeletal muscle content. The extracellular matrix is an important component of skeletal muscle, and association between massage and extracellular matrix and their mechanism of action are still unclear.
OBJECTIVE: To explore the effect of massage on extracellular matrix collagen deposition in type 2 diabetic sarcopenia rats.
METHODS: Totally 24 Wistar male rats were randomly divided into blank group, model group, and massage group. High-fat diet combined with the streptozotocin method was used to establish a type 2 diabetes mellitus and sarcopenia model. After successful model establishment, the massage group used abdominal massage combined with hind limbs. After 8 weeks of treatment, the fasting blood glucose and serum insulin levels of the rats were measured. The skeletal muscle mass was detected by dual-energy X-ray. The exhaustion time was measured by small animal treadmill. The sliding angle was measured by inclined board test. The pathological changes of skeletal muscle tissue were observed by hematoxylin-eosin staining. The skeletal muscle collagen deposition was observed by Masson staining. The mRNA and protein expressions of type I and type III collagen in skeletal muscle were detected by qPCR and western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the model group, the blood glucose (P < 0.05) and serum insulin (P < 0.01) decreased in the massage group. (2) Compared with the model group, the skeletal muscle mass, running exhaustion time, and the angle of inclined plate experiment were increased in massage group (P < 0.05). (3) Compared with the model group, the skeletal muscles of the massage group were arranged neatly, muscle atrophy was improved, and collagen fiber deposition was reduced. (4) Compared with the model group, the expression levels of type I and type III collagen mRNA and protein in skeletal muscle were decreased in the massage group (P < 0.05). (5) The results suggest that massage can enhance insulin sensitivity, lower blood sugar, improve skeletal muscle mass, strength and function, and diminish collagen deposition in rats with type 2 diabetes, and may be a potential target for massage to exert its therapeutic effects.

Key words: massage, type 2 diabetes, sarcopenia, extracellular matrix, collagen deposition, type I collagen, type III collagen, engineered tissue construction

中图分类号:

孙雅蕙, 王宇峰, 郭超, 姚俊杰, 纪媛媛, 李中旭, 娄惠娟, 江晶蕾, 孙一萍, 徐婧, 丛德毓. 推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(26): 5549-5555.

Sun Yahui, Wang Yufeng, Guo Chao, Yao Junjie, Ji Yuanyuan, Li Zhongxu, Lou Huijuan, Jiang Jinglei, Sun Yiping, Xu Jing, Cong Deyu. Effect of massage on extracellular matrix collagen deposition in skeletal muscle of type 2 diabetic rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(26): 5549-5555.

图/表（结果） 5

2.1 实验动物数量分析实验共纳入24只大鼠，排除死亡和血糖不符合标准的大鼠，最终纳入18只大鼠进入最后结果分析，其中空白组6只、模型组6只和推拿组6只。
2.2 推拿对2型糖尿病大鼠血糖的影响见表3。治疗前，模型组、推拿组大鼠血糖较空白组明显升高(P < 0.001)；治疗后，推拿组的血糖值明显低于模型组(P < 0.05)，说明推拿治疗能明显改善2型糖尿病大鼠的血糖水平。

2.3 推拿对2型糖尿病大鼠血清胰岛素的影响见图2。治疗后，模型组大鼠血清胰岛素水平明显高于空白组(P < 0.001)；推拿组大鼠血清胰岛素水平明显低于模型组(P < 0.01)，说明推拿治疗能改善2型糖尿病大鼠血清胰岛素水平。
2.4 推拿对2型糖尿病大鼠肌肉力量的影响见表4。治疗前，模型组、推拿组大鼠的跑步力竭时间、斜板掉落角度明显小于空白组(P < 0.01)；治疗后，推拿组大鼠的跑步力竭时间、斜板掉落角度明显高于模型组(P < 0.05)，说明推拿治疗能改善2型糖尿病大鼠的四肢骨骼肌功能和骨骼肌力量。
2.5 推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌质量的影响见图3、表5。治疗前，模型组、推拿组大鼠的后肢骨骼肌质量明显小于空白组(P < 0.05)；治疗后，推拿组大鼠的后肢骨骼肌质量明显高于模型组(P < 0.05)，说明推拿治疗能改善2型糖尿病大鼠的骨骼肌质量。
2.6 推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌形态的影响见图4。治疗后，与空白组相比，模型组大鼠腓肠肌组织排列紊乱，肌萎缩；与模型组比较，推拿组大鼠腓肠肌排列整齐，肌萎缩明显改善。

2.7 推拿对大鼠骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响见图5。治疗后，与空白组比较，模型组大鼠腓肠肌胶原沉积增多；与模型组比较，推拿组大鼠腓肠肌胶原沉积减少，说明推拿可以减少骨骼肌细胞外基质胶原沉积。
2.8 推拿对大鼠腓肠肌细胞外基质胶原含量的影响见图6。Western blot结果显示，与空白组相比，模型组大鼠骨骼肌的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白水平升高(P < 0.05)；与模型组相比，推拿组大鼠骨骼肌的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白水平降低(P < 0.05)。qPCR结果显示，与空白组相比，模型组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA水平升高(P < 0.05)；与模型组相比，推拿组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA水平降低(P < 0.05)，说明推拿可以改善骨骼肌细胞外基质胶原沉积。

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引言

糖尿病是一种以胰岛素分泌减少、外周对胰岛素敏感性降低为特征的代谢性疾病。全球约有4.22亿人被诊断为糖尿病，预计到2030年，2型糖尿病的人数将达到全球人口的8%[1]。2型糖尿病通常伴有胰岛素抵抗、持续低度炎症、晚期糖基化终末产物积累和氧化应激等，这些机制会导致线粒体、血管功能障碍以及蛋白质代谢受损，不仅影响骨骼肌的葡萄糖代谢平衡，还可能导致骨骼肌结构改变，从而影响肌肉质量、力量和功能[2]。肌肉减少症由Irving Rosenberg于1988年首次提出[3]，是2型糖尿病的并发症之一，患病率从7%-29.3%不等[2]。2018年，亚洲肌少症工作组达成了诊断共识，将肌肉力量、肌肉数量/质量和身体功能作为诊断和评估肌少症严重程度的指标[4]。糖尿病和肌少症之间存在双向关系，糖尿病会诱发和加剧肌少症，肌少症也会加剧糖尿病的糖代谢异常，形成一个恶性循环。
骨骼肌是人体质量最大的组织，约占全身质量的40%，主要由肌纤维组成，为骨骼提供运动和支撑，是胰岛素刺激葡萄糖摄取的主要部位[5]。细胞外基质是骨骼肌支撑结构的主要成分，占骨骼肌质量的10%，是一种由多种蛋白质构成的复杂网状结构，它为细胞提供了必要的机械稳定性和结构框架，同时参与了组织修复和再生过程[6]。细胞外基质蛋白包括胶原蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖等。其中，胶原蛋白是含量最丰富的细胞外基质结构成分，对于细胞黏附、迁移、分化、伤口愈合和组织的机械支撑至关重要[7-8]。研究表明，2型糖尿病会导致骨骼肌细胞外基质胶原蛋白的沉积，同时促进细胞外基质重塑[9]。细胞外基质成分的改变是骨骼肌胰岛素抵抗的常见特征，其中胶原含量增加是骨骼肌胰岛素抵抗的标志[10]。
推拿疗法是中国传统外治法之一，研究发现推拿对于2型糖尿病和肌少症有明显的治疗作用。孔心甜等[11]发现推拿能够上调2型糖尿病大鼠胰腺胰高血糖素样肽的表达，减轻胰岛结构损伤，促进胰岛素的分泌，降低血糖水平；XIE等[12]研究表明腹部推拿能刺激腹部副交感神经，影响胃肠道反应，调节肠道微生物组成，改善葡萄糖和脂质代谢。推拿治疗通过手法直接对机体产生机械刺激，能改善肌肉微循环，提高血液供应给肌肉的营养水平，增加肌肉的质量和功能。课题组通过前期研究发现，推拿治疗能够改善2型糖尿病骨骼肌功能障碍，促进骨骼肌纤维类型的转换，提高生肌因子的表达，从而增加肌卫星细胞的成肌分化水平[13]。据报道，骨骼肌细胞外基质成分(如胶原蛋白和透明质酸)以及细胞外基质受体整合素和CD44的沉积会导致2型糖尿病相关的骨骼肌胰岛素抵抗[14]。在前期研究的基础上，该实验探讨2型糖尿病肌少症大鼠骨骼肌细胞外基质重塑的病因，研究推拿对骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，采用单因素方差分析进行组间比较。
1.2 时间及地点实验动物于2023年8-12月在长春中医药大学动物房饲养，取材后于2024年1-6月在长春中医药大学东北亚研究中心完成检测。
1.3 材料 SPF级8周龄Wistar雄性大鼠24只，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：SCXK (京)2019-0010。所有大鼠均在长春中医药大学动物房进行饲养和训练，每笼5只，自由饮食饮水，室温(23±1) ℃，相对湿度(50±5)%，明暗周期为12 h/12 h。实验方案已经通过长春中医药大学动物实验伦理委员会批准(批准号：NO.2022112)。
1.4 实验方法
1.4.1 造模及分组按随机数字表法，随机选取8只大鼠作为空白组，普通饲料喂养；其他16只大鼠高脂饲料喂养6周后，分批次称取链脲佐菌素粉末(北京索莱宝科技有限公司)溶解于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(福州飞净生物科技有限公司)中，配制成1%溶液，现配现用，避光冰浴，溶解后立即注射使用，在15 min内使用完毕。根据空腹体质量，按30 mg/kg注射链脲佐菌素溶液，空白组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸钠缓冲液。注射后72 h，7 d测随机血糖≥16.7 mmol/L，则2型糖尿病模型构建成功，继续高脂喂养4周，通过双能X射线动物用骨密度仪(韩国，OsteoSys Co Ltd.，型号：iNSiGHT)检测大鼠后肢骨骼肌质量，与空白组大鼠后肢骨骼肌质量进行比较，模型组明显小于空白组且有统计学意义，则说明2型糖尿病肌少症模型建立成功，将造模成功大鼠随机分为模型组8只、推拿组8只。
1.4.2 干预方案空白组和模型组不做干预，推拿组采用后肢部和腹部推拿进行治疗，见图1。先做后肢部推拿，再做腹部推拿，中间不休息。

后肢部推拿：通过小动物按摩器(AFY-10型，天津爱福依科技有限公司)进行推拿治疗。后肢部推拿采用点法，将按摩头分别置于大鼠双后肢穴位上，包括环跳、血海、足三里、丰隆、三阴交、承山穴，穴位参照《实验针灸学》[15]，具体定位见表1，调节压力为5 N，频率为60次/min，每个穴位2 min，共治疗24 min。

腹部推拿：采用振法，大鼠固定，将按摩头分别置于腹部穴位上，包括神阙、中脘、天枢、梁门、气海穴，调节压力为6 N，频率为120次/min，每个穴位
2 min，共10 min。
每天推拿治疗1次，6 d/周，共8周。
1.4.3 双能X射线检测推拿治疗前1 d和最后一次推拿后1 d进行检测，大鼠麻醉后平卧于检查床上，启动双能

X射线动物用骨密度仪(韩国，OsteoSys Co Ltd.，型号：iNSiGHT)，设置身体成分成像模式，对大鼠进行扫描，成像后进行数据分析，获取大鼠后肢骨骼肌质量。
1.4.4 跑步力竭实验推拿治疗前1 d和最后一次推拿后1 d进行检测，使用小动物跑步机(上海欣软信息科技有限公司，型号：XR-PT-10B)进行跑步力竭实验，实验前将大鼠放在跑步机上适应性训练10 min，休息15 min后进行正常测试，设置跑台速度为15 m/min，加速时间为10 s，刺激电流为5 A，小动物跑步机上记录电刺激次数，以连续5个电刺激定义为力竭，记录力竭时间。
1.4.5 斜板实验推拿治疗前1 d和最后一次推拿后1 d进行检测，将一个长平板的一端放在桌面上固定不动，另一端可以抬高使平板与桌面形成角度。将大鼠放置在垫有橡胶垫的斜板上，确保大鼠身体纵轴与斜板纵轴平行，大鼠头朝向斜板抬高侧。从0°开始，以每次抬高5°的角度观察大鼠能在斜板上停留的最大角度。每次调整角度后，观察大鼠是否能在斜板上保持5 s而不掉落。每只动物测量5次，记录大鼠能够保持位置的最大角度。取5次测量的平均值作为大鼠的斜板实验角度。
1.4.6 取材及样本制备在完成所有治疗和活体检测后进行抽血取材，各组大鼠禁食禁水12 h，给予异氟烷呼吸式麻醉维持，剥离腹主动脉，使用负压真空促凝采血管，从腹主动脉取血3-5 mL，室温静置2 h，4 ℃、3 000 r/min离心15 min，使用200 μL移液器及2 mL冻存管收集上清液，-20 ℃冰箱保存。采血后，迅速剥离双侧腓肠肌，取左侧腓肠肌置于环保型GD固定液(赛维尔生物科技有限公司)固定，用于苏木精-伊红染色、Masson染色；右侧腓肠肌组织置于锡箔纸上，分装至2 mL冻存管放置液氮中，存放在-80 ℃低温冰箱，用于PCR、Western blot检测。
1.5 主要观察指标
1.5.1 生化指标用血糖仪(罗氏血糖健康医护公司，国械注进20192220480)进行尾部采血法测量血糖；采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清胰岛素水平。
1.5.2 骨骼肌组织的病理改变将固定后的腓肠肌切成小块后，经不同体积分数(75%，85%，95%，100%，100%)的乙醇溶液进行逐级脱水，包埋在石蜡中，切成3 μm切片，烘片脱蜡，使用苏木精-伊红染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)染色。用PreciPoint M8扫片机进行扫描，观察各组骨骼肌组织的病理改变。
1.5.3 腓肠肌胶原沉积情况将包埋在石蜡中的骨骼肌切成3 μm切片，脱蜡，使用Masson三色染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)染色。用PreciPoint M8扫片机进行扫描，观察腓肠肌胶原沉积情况，采用Image J分析计算腓肠肌胶原纤维容积分数。
1.5.4 qPCR检测大鼠骨骼肌中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达用TransZol试剂盒提取骨骼肌中总RNA，在42 ℃ 15 min，95 ℃ 3 min进行反转录反应，并进行Real-Time PCR扩增，结束后用2-ΔΔCq法分析mRNA的相对表达量。引物序列见表2。

1.5.5 Western blot检测大鼠骨骼肌中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白的表达取20 mg腓肠肌放入已经加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的500 μL裂解液中，提取腓肠肌蛋白，配制10%的分离胶和5%的浓缩胶上样后，用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳、转膜到PVDF膜上，用5%脱脂奶粉封闭1 h，然后将PVDF膜与Ⅰ型胶原(稀释比例1∶3 000)、Ⅲ型胶原(稀释比例1∶1 000)和 β-actin一抗(稀释比例1∶10 000)在4 ℃孵育过夜，用TBST洗10 min×3次，与二抗(1∶3 000)孵育1 h，再用TBST洗10 min×3次，配置显影液，应用显影仪进行曝光显影并储存图像，采用Image J分析计算条带蛋白表达量。
1.6 统计学分析采用SPSS 24.0进行统计分析，GraphPad Prism 9.0(美国GraphPad Software公司)进行制图，实验变量用x±s表示，采用单因素方差分析进行组间比较，并采用Bonferroni进行校正。P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过长春中医药大学统计学专家审核。

讨论

骨骼肌是人体重要的代谢组织，能调节人体内葡萄糖稳态，通过葡萄糖转运蛋白4吸收和摄取大部分胰岛素介导的葡萄糖[16]，并以糖原的形式储存起来。骨骼肌细胞外基质在胰岛素抵抗的发展中起着重要作用，其结构和组成的改变会影响肌肉对胰岛素的响应。在胰岛素抵抗状态下，骨骼肌细胞外基质可能会发生重塑，例如胶原蛋白的沉积和透明质酸的增多，可能导致胰岛素敏感性下降[17]。胶原蛋白是骨骼肌细胞外基质中纤维蛋白的关键成分，为骨骼提供弹性和抗拉强度[5]，分为很多亚型，其中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白在骨骼肌中含量较多。Ⅰ型胶原普遍存在于骨骼肌细胞外基质的各个层面中，它以平行排列的纤维形式存在。Ⅲ型胶原主要分布在骨骼肌的基底层和肌周细胞周围，构建了一个小的纤维网络。细胞外基质的改变还能影响肌肉对葡萄糖等营养物质的代谢，影响肌肉功能和整体代谢[18]。2型糖尿病患者长期高脂饮食增加了细胞外基质的蛋白质合成[19]，并减少了细胞外基质蛋白降解，导致细胞外基质的沉积和重塑增加[20]。研究表明，细胞外基质中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达增加与2型糖尿病导致的体质量增加和胰岛素敏感性降低之间存在很强的关联 [21]，细胞外基质的胶原蛋白发生沉积时会导致胰岛素抵抗，而胰岛素抵抗也会加重骨骼肌中细胞外基质的紊乱[22]。
推拿能够调节2型糖尿病大鼠的血糖，当推拿手法作用于腹部时，能增加腹部副交感神经的功能，舒张血管，增加消化道的蠕动，加快了糖的代谢和利用；同时刺激胰岛素分泌，改善由于胰岛素分泌不足引起的高血糖。有研究表明，腹部推拿能增加双歧杆菌和乳酸杆菌等有益肠道菌群，减少致病菌群的数量，从而调节糖脂代谢[12]。此研究经过推拿治疗的大鼠血糖和血清胰岛素含量较模型组明显降低(P < 0.05)。糖尿病胰岛素抵抗和肌少症密切相关，肌肉线粒体功能障碍能够导致肌细胞内脂质代谢物积累升高，胰岛素缺乏导致蛋白质分解代谢，肌肉质量下降。双能X射线显示模型组大鼠体质量增加，后肢骨骼肌质量明显小于空白组，推拿治疗大鼠后肢骨骼肌质量增加。跑步力竭时间和斜板实验能够反映大鼠四肢骨骼肌力量和功能，推拿治疗大鼠跑步力竭时间和斜板实验角度较模型组均有不同程度的改善。当长期处于高胰岛素血症状态，血浆中胰岛素浓度持续偏高，会导致骨骼肌对胰岛素的敏感性降低。研究发现，推拿治疗能提高胰岛素敏感性，增加蛋白质合成，减少蛋白质降解，从而增加肌肉的质量，改变肌肉力量和功能[23]。
推拿疗法直接作用于后肢骨骼肌，推拿产生的机械压力刺激能够促进肌纤维的收缩活动，松解软组织之间的粘连，促进局部血液和淋巴液的循环，提高肌肉的营养供应，从而改善肌肉张力、弹力和耐受力。肌纤维横截面积减小、肌肉体积和肌肉蛋白质含量降低是骨骼肌病变的主要特征[24]。通过苏木精-伊红染色可以看到，2型糖尿病所导致的代谢异常会使骨骼肌组织排列紊乱，肌细胞萎缩、水肿，与模型组相比，推拿组骨骼肌组织排列整齐，可见局部小灶性肌细胞萎缩、肌细胞水肿，但程度轻、面积小。推拿作为一种物理治疗方法，对骨骼肌具有免疫调节作用，郭皓泽[25]发现，推拿能促进骨骼肌的蛋白质合成，上调胰岛素样生长因子/磷脂酰肌醇3-激酶信号通路，改善2型糖尿病骨骼肌病变。推拿能够对蛋白质和核糖体的合成与降解过程产生影响，调节合成代谢的信号传导机制，并可能改变肌卫星细胞的活性和数量，这些作用有助于改善肌肉功能，促进肌肉修复[26]。
细胞外基质中的胶原蛋白参与神经肌肉接头的发育，细胞外基质蛋白通过激活乙酰胆碱酯酶来影响突触的形成和功能，进而调节突触传递的效率和神经信号的强度[27]，同时细胞外基质参与骨骼肌中力的传递，当细胞外基质和肌肉细胞之间的结合不足时，力传递途径会被破坏，因此肌肉纤维会变形[28]。在糖尿病的病理环境中，胶原蛋白的含量和结构可能会发生变化，这些变化与多种因素相关，包括炎症反应的加剧、纤维化过程的激活、晚期糖基化终末产物的积累、基质金属蛋白酶的活性改变和脂质积累等，这些因素共同影响了肌肉对胰岛素的反应。在糖尿病环境下，细胞外基质组成和结构的变化导致促炎细胞因子如白细胞介素6和肿瘤坏死因子α下调，进而导致转化生长因子β和Ⅰ型胶原α1链等促进胶原蛋白沉积和纤维化的关键因子表达上调[29]。推拿能调节炎症因子水平，增强胰岛素敏感性，调控糖脂代谢及胰岛素分泌信号的转导[30]。晚期糖基化终末产物是由蛋白质、脂质和核酸的非酶糖基化形成的异质性大分子组，在肌肉纤维中过多的积累会使肌肉胶原蛋白交联，影响了肌肉纤维的弹性和结构完整性[31]。基质金属蛋白酶在骨骼肌的生长发育中发挥着关键作用，它们能够分解细胞外基质，为细胞迁移和组织重塑提供必要的条件，其中基质金属蛋白酶1，8，13等胶原酶能降解Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型间质胶原，这些基质金属蛋白酶的活性对于肌肉纤维的再生和修复至关重要[32]。研究发现，电针结合推拿可以通过调节转化生长因子β1信号通路来抑制肌成纤维细胞的分化，同时通过调整基质金属蛋白酶1/基质金属蛋白酶组织抑制因子1的平衡来减少细胞外基质的积累[33]。
脂质积累触发的胶原蛋白沉积和细胞外基质重塑使肌浆网的功能发生变化，导致纤维收缩力受损，结缔组织生长因子表达增加，促进细胞凋亡，骨骼肌纤维化[34]。还有研究发现腹部推拿能通过调节单磷酸腺苷激活的蛋白激酶/葡萄糖转运蛋白4信号链以及骨骼肌中核因子的基因转录和蛋白表达来缓解糖脂代谢紊乱[35]。此研究发现，模型组的胶原沉积明显增高，骨骼肌中的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原水平也升高，通过推拿治疗后，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的基因和蛋白表达水平明显降低。推拿治疗可能诱发多种机制，改善胶原蛋白的组织排列，刺激肌肉细胞增加胶原蛋白的合成，提高肌肉对胰岛素的反应，从而促进葡萄糖的摄取和利用。
该研究仍存在一些局限性：首先，课题组没有分析不同推拿方法的影响，例如单独腹部推拿和四肢推拿，有待进一步研究；其次，最终样本量较小，课题组在后期研究中会增加样本量继续研究；最后，该研究发现推拿对2型糖尿病肌少症胶原含量和胶原沉积的影响，但具体的干预途径和分子生物学机制需要进一步研究。
综上所述，推拿可以降低2型糖尿病大鼠血糖水平，改善骨骼肌质量、力量和功能，增加胶原蛋白的合成，提高胰岛素敏感性，进而增加骨骼肌含量。该研究发现骨骼肌的细胞外基质胶原沉积可能是骨骼肌胰岛素抵抗的一种新机制，这为未来2型糖尿病骨骼肌肌少症以及相关疾病的治疗提供了新的思路和方向。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

推拿对2型糖尿病大鼠骨骼肌细胞外基质胶原沉积的影响

Effect of massage on extracellular matrix collagen deposition in skeletal muscle of type 2 diabetic rats

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