完全性脊髓横断后排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠成模率的影响

doi:10.12307/2025.680

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (18): 3840-3847.doi: 10.12307/2025.680

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完全性脊髓横断后排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠成模率的影响

梁柔筠，展立芬，曾学究，丁强盛，罗小精，卓越，艾坤，邓石峰，许明，张泓

湖南中医药大学针灸推拿与康复学院，湖南省长沙市 410208

收稿日期:2024-06-11 接受日期:2024-07-26 出版日期:2025-06-28 发布日期:2024-11-28
通讯作者: 张泓，博士，教授，博士研究生导师，湖南中医药大学针灸推拿与康复学院，湖南省长沙市 410208 共同通讯作者：许明，硕士，讲师，湖南中医药大学针灸推拿与康复学院，湖南省长沙市 410208
作者简介:梁柔筠，女，2000年生，广西壮族自治区柳州市人，汉族，湖南中医药大学在读硕士，主要从事常见疾病针灸、康复治疗的机制与临床研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(822746668)，项目负责人：张泓；国家自然科学基金项目(82205255)，项目负责人：许明；湖南省自然科学基金项目(2022JJ40312)，项目负责人：许明；湖南中医药大学学科建设揭榜挂帅项目(22JBZ013)，项目负责人：张泓；湖南中医药大学研究生创新项目(2023CX13)，项目负责人：展立芬

Effect of the number of times to urinate on the modeling rate of neurogenic bladder model in rats after complete spinal cord transection

Liang Roujun, Zhan Lifen, Zeng Xuejiu, Ding Qiangsheng, Luo Xiaojing, Zhuo Yue, Ai Kun, Deng Shifeng, Xu Ming, Zhang Hong

College of Acupuncture, Massage and Rehabilitation, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China

Received:2024-06-11 Accepted:2024-07-26 Online:2025-06-28 Published:2024-11-28
Contact: Zhang Hong, MD, Professor, Doctoral supervisor, College of Acupuncture, Massage and Rehabilitation, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China Co-corresponding author: Xu Ming, MS, Lecturer, College of Acupuncture, Massage and Rehabilitation, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China
About author:Liang Roujun, Master candidate, College of Acupuncture, Massage and Rehabilitation, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, Hunan Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, Nos. 822746668 (to ZH) and 82205255 (to XM); Hunan Provincial Natural Science Foundation, No. 2022JJ40312 (to XM); Discipline Construction Project of Hunan University of Chinese Medicine, No. 22JBZ013 (to ZH); Graduate Innovation Project of Hunan University of Chinese Medicine, No. 2023CX13 (to ZLF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
神经源性膀胱：因脊髓等排尿控制中枢或周围神经病变导致膀胱逼尿肌和尿道括约肌功能障碍的疾病总称，是脊髓损伤后常见且严重的并发症之一。临床上骶上脊髓损伤患者常表现为逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱，出现尿频、尿急、尿失禁或尿潴留等症状，严重影响患者心理及其日常生活。
手法辅助排尿技术：通过手法按压下腹部，利用腹压帮助膀胱内尿液排出。在神经源性膀胱动物模型中，Crede法作为手法辅助排尿技术的一种，常用于动物模型的术后护理，辅助动物膀胱排空，减少因尿液反复残留引起的并发症。目前该方法在临床上已很少使用，仅在动物造模时应用。

背景：脊髓损伤常导致逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱，目前对其发病机制和治疗缺乏明确认识，建立稳定可靠的动物模型对揭示疾病的病理机制和探索治疗方法具有重要影响。
目的：探究完全性脊髓横断术后辅助排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠的影响，以提高神经源性膀胱模型大鼠术后生存率及成模率。
方法：从46只雌性SD大鼠中按随机数字表法抽取6只为假手术组，剩余40只大鼠完全性脊髓横断造模后随机分为每日排尿0，1，3，5次组，每组10只。术后19 d内每隔3 d测量残余尿量，术后第19天时观察存活及成模情况，进行尿流动力学检测及离体逼尿肌肌条收缩实验。
结果与结论：①存活率及成模率：每日排尿0次组存活率10%，成模率10%；每日排尿1次组存活率20%，成模率10%；每日排尿3，5次组存活率70%，成模率70%；②残余尿量：与假手术组相比，术后第3，6，9，12，15天，每日排尿3，5次组的残余尿量显著增加(P < 0.01)；术后第18天，每日排尿3，5次组的残余尿量增多(P < 0.05)；与每日排尿3次组相比，术后第6天，每日排尿5次组的残余尿量减少(P < 0.05)，术后第3，9，12，15，18天，每日排尿5次组的残余尿量无统计学差异；③尿流动力学：与假手术组相比，每日排尿3，5次组大鼠的漏尿点压差明显减小(P < 0.01)，膀胱最大容量显著增大(P < 0.01)；与每日排尿3次组相比，每日排尿5次组的漏尿点压差和膀胱最大容量均无统计学差异；④离体逼尿肌肌条收缩实验：与假手术组相比，每日排尿3，5次组逼尿肌肌条收缩幅度和频率显著减少(P < 0.01)；与每日排尿3次组相比，每日排尿5次组的逼尿肌肌条收缩幅度和频率均无统计学差异。结果表明：辅助排尿是成功构建逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱模型的影响因素之一，每日排尿3次或5次无明显差异，结合实际工作量和成模率，建议每日排尿频率至少3次及以上。

https://orcid.org/0009-0006-4184-6004(梁柔筠)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 神经源性膀胱, 逼尿肌反射亢进型, 脊髓损伤, 完全性脊髓横断术, 排尿次数, 手法辅助排尿技术, SD大鼠, 工程化动物模型

Abstract: BACKGROUND: Spinal cord injury often leads to neurogenic bladder with hyperreflexia of the forced urethral muscle, but there is a lack of clear understanding of its pathogenesis and treatment, and establishing a stable and reliable animal model has an important impact on revealing its pathomechanisms and exploring therapeutic approaches.
OBJECTIVE: To investigate the effect of the number of times to urinate on neurogenic model rats after complete spinal cord transection in order to improve the postoperative survival and modeling rate of neurogenic model rats.
METHODS: Out of 46 female Sprague-Dawley rats, 6 were selected as the sham-operated group using the random number table method, and the remaining 40 rats were randomly divided into 0, 1, 3, and 5 times daily urination groups after complete spinal cord transection modeling, with 10 rats in each group. The residual urine volume was measured every 3 days within 19 postoperative days, and the survival and modeling were observed on the 19th day after the operation, and urodynamics tests and contraction experiments of isolated forced urethra muscle strips were performed.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Survival and modeling rate: there was 10% survival rate and 10% modeling rate in the group of 0 times daily urination; 20% survival rate and 10% modeling rate in the group of 1 time daily urination; 70% survival rate and 70% modeling rate in the groups of 3 and 5 times daily urination. (2) Residual urine volume: compared with the sham-operated group, the residual urine volume of the groups of 3 and 5 times daily urination was significant increased on postoperative days 3, 6, 9, 12, and 15 (P < 0.01); the residual urine volume of the groups of 3 and 5 times daily urination was increased on the 18th day after surgery (P < 0.05). Compared with the 3 times daily urination group, the residual urine volume was decreased in the 5 times daily urination group on the 6th day after surgery (P < 0.05), while there was no significant difference in the residual urine volume between the 3 and 5 times daily urination groups on the 3rd, 9th, 12th, 15th, and 18th days after surgery. (3) Urodynamics: Compared with the sham-operated group, the differential pressure at the point of leakage was significantly reduced (P < 0.01) and the maximal volume was significantly increased (P < 0.01) in the 3 and 5 times daily urination groups. There was no statistical difference in the differential pressure at the point of leakage and the maximal volume between the 3 and 5 times daily urination groups. (4) Muscle-strip contraction test of isolated detrusor muscles: Compared with the sham-operated group, the contraction amplitude and frequency of detrusor muscle strips were significantly reduced in the 3 and 5 times daily urination groups (P < 0.01). There was no statistically significant difference in the contraction amplitude and frequency of detrusor muscle strips between the 3 and 5 times daily-urination groups. In conclusion, assisted urination is one of the keys to establish a successful neurogenic model of urethral reflexes, and there is no significant difference in the effects of urinating 3 or 5 times a day on the neurogenic model. It is recommended to urinate at least 3 times a day based on the actual workload and the modeling rate.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: neurogenic bladder model, hyperreflexia of the urethral muscle, spinal cord injury, complete spinal cord transection, number of urinations, manually assisted voiding techniques, SD rat, engineered animal model

中图分类号:

梁柔筠, 展立芬, 曾学究, 丁强盛, 罗小精, 卓越, 艾坤, 邓石峰, 许明, 张泓. 完全性脊髓横断后排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠成模率的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(18): 3840-3847.

Liang Roujun, Zhan Lifen, Zeng Xuejiu, Ding Qiangsheng, Luo Xiaojing, Zhuo Yue, Ai Kun, Deng Shifeng, Xu Ming, Zhang Hong. Effect of the number of times to urinate on the modeling rate of neurogenic bladder model in rats after complete spinal cord transection[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(18): 3840-3847.

图/表（结果） 8

2.1 各组大鼠一般情况假手术组大鼠活动自如，体质量增加，排尿排便正常，生命体征良好。造模成功的大鼠双下肢运动功能障碍，体质量减少，不可自主排尿，下腹部可触及到胀大的膀胱。造模后第19天观察，每日排尿0次组大鼠死亡9只，存活率10%，成模率10%；每日排尿1次组大鼠死亡8只，存活率20%，成模率10%；每日排尿3，5次组大鼠各死亡3只，存活率70%，成模率70%，见表1。每日排尿0，1次组大鼠死亡解剖发现膀胱破裂，膀胱内含大量白色沉淀物，表面附有细小砂状晶体，部分出现肾表面脓肿，见图1，2。

2.2 术后各组大鼠残余尿量比较结合各组大鼠各时间段内存活情况(表2)，每隔3 d早上8点测量各组大鼠的残余尿量：假手术组大鼠残余尿量呈稳定变化；每日排尿0，1，3次组大鼠残余尿量在造模术后第6天达收集量的最大值，随后开始逐渐降低；每日排尿5次组大鼠残余尿量整体呈持续下降趋势；每日排尿0，1次组比每日排尿3，5次组的残余尿量明显增多，见图3。

鉴于每日排尿0，1次组大鼠存活数量未达到统计学要求，后续各项实验检测数据仅进行假手术组与每日排尿3，5次组，每日排尿3，5次组之间的统计分析比较。
对造模术后各组大鼠残余尿量进行统计学分析：与假手术组相比，术后第3，6，9，12，15天，每日排尿3，5次组的残余尿量显著增多(P < 0.01)；术后第18天，每日排尿3，5次组的残余尿量增多(P < 0.05)；与每日排尿3次组相比，术后第6天，每日排尿5次组的残余尿量减少(P < 0.05)，术后第3，9，12，15，18天，每日排尿5次组的残余尿量无统计学差异，见图4。
2.3 各组大鼠尿流动力学比较假手术组大鼠膀胱内压呈现稳定规律的变化曲线，漏尿时间较短，排尿效率较高；

每日排尿3，5次组大鼠在漏尿点之前，膀胱持续出现周期短而快的压力变化曲线，漏尿时间延长，排尿效率降低，见图5。

假手术组、排尿3次组、排尿5次组的漏尿点压差分别为(4.86±0.21)，(2.97±0.17)，(3.22±0.09) kPa，膀胱最大容量分别为(1.49±0.55)，(3.15±0.64)，(3.01±0.50) mL。与假手术组相比，每日排尿3，5次组大鼠的漏尿点压差明显减小(P < 0.01)，膀胱最大容量明显增大(P < 0.01)；与每日排尿3次组相比，每日排尿5次组的漏尿点压差和膀胱最大容量均无统计学差异，见图6。

2.4 各组大鼠膀胱组织大体观比较假手术组膀胱呈粉红色梨形状，造模组膀胱体积较假手术组明显增大，与每日排尿0，1次组相比，每日排尿3，5次组膀胱体积减小，其中每日排尿0次组膀胱解剖后可见大量乳白色结晶石，见图7。

2.5 各组大鼠离体逼尿肌肌条收缩幅度与频率比较假手术组、每日排尿3次组、每日排尿5次组的逼尿肌肌条收缩幅度分别为(1.35±0.19)，(0.66±0.14)，(0.77±0.18) g，逼尿肌收缩频率分别为(5.10±0.58)，(2.50±0.39)，(2.66±0.49) 次/min。与假手术组相比，每日排尿3，5次组的逼尿肌肌条收缩幅度和频率显著减少(P < 0.01)；与每日排尿3次组相比，每日排尿5次组的逼尿肌肌条收缩幅度和频率均无统计学差异，见图8。

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引言

近年来，脊髓损伤后神经源性膀胱的发生率高达90%[1]。临床上，骶上脊髓损伤患者常因逼尿肌反射亢进表现出溢出性尿失禁、尿频、尿急或急迫性尿失禁等症状，严重降低患者的生活质量[2-4]。脊髓损伤后神经源性膀胱的具体病理机制尚不明确，故课题组致力于建立一个稳定可靠的逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱大鼠模型，用以深入研究脊髓损伤后逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱的发病机制及电针等干预措施的潜在作用机制。在实验动物的选择上，大鼠的解剖结构与人类高度相似，具备生命周期短、饲养成本低、易处理等优势[5-6]。同时，与雄性大鼠相比，雌性大鼠因尿道短、直，便于尿流动力学评估，能避免前列腺疾病对实验数据的潜在影响[7]，目前已成为脊髓损伤后神经源性膀胱模型的首选研究对象[8]。脊髓完全性横断术后大鼠易出现血尿、腹胀等并发症，严重降低大鼠的生存率及模型的稳定性。因此，如何有效提高脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠的存活率和成模率，是实验研究的关键，其中术后护理发挥着至关重要的作用[9]。
神经源性膀胱模型大鼠术后需要及时有效的辅助排尿，最常用的手法排尿方法为Crede法[10-11]。脊髓损伤早期大鼠膀胱逼尿肌呈无或低收缩，排尿功能完全丧失，若不及时进行有效的手法辅助排尿，膀胱内尿液易返流入肾脏，引发上尿路感染和肾功能损害[12]。目前，国内外基础研究中有关脊髓损伤后神经源性膀胱动物术后排尿护理方案尚无统一标准。该实验运用多种检测方法评估完全性脊髓横断术后不同辅助排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠的影响，旨在提高神经源性膀胱模型大鼠术后生存率及成模率，确保逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱模型的稳定性和可靠性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，计量资料组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法；不同时间点多次比较采用重复测量方差分析。
1.2 时间及地点实验于2023年11月在湖南中医药大学动物实验中心及科研楼完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物与分组健康SPF级雌性SD大鼠46只，10-12周龄，体质量200-220 g，由湖南中医药大学动物实验中心提供与饲养，许可证号：SCXK(湘)2019-0004。动物均在温度为24-26 ℃、湿度为50%-70%，通风良好的环境下分笼饲养，自由进食与饮水，适应性喂养至体质量为250-280 g后进行分组。首先，大鼠尾部编号1-46，按照随机数字表法抽取6只大鼠为假手术组，剩余40只大鼠为造模组进行完全性脊髓横断术。术后当天，造模组根据每日排尿次数随机分为排尿0，1，3，5次组，每组10只。该实验获得湖南中医药大学实验动物伦理委员会批准(伦理编号：LL2021091504)，所有实验动物的处置严格遵照《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.3.2 主要试剂与仪器异氟烷(批号：2023090502，山东安特牧业)；青霉素钠(兽药字150062659，山东聖旺药业)；乳酸钠林格注射液(兽药字101352979，江苏恒丰强生物)；0.9%氯化钠注射液(批号：C22040509，江西科伦药业)；葡萄糖粉剂(批号：230406，康美保宁)；苦苹果防舔防咬喷剂(美国Grannick)；石蜡棉球(河南新卫医疗)；40 g/L多聚甲醛(上海索莱宝)。MP160型多导生理记录仪(美国BIOPAC)；F3导尿管(上海上医康鸽)；WZ-50C6型微量注射泵(浙江史密斯)；离体组织浴槽系统(北京金工鸿泰)；恒温灌流器(北京金工鸿泰)。
1.4 实验方法
1.4.1 动物麻醉所有大鼠禁食不禁水24 h后，使用2%-2.5%的异氟烷进行麻醉诱导，待其肌肉松弛、角膜反射和夹尾反射均消失后，在鼠板上行俯卧位固定，随后调整异氟烷浓度为1.5%-1.8%以维持麻醉。
1.4.2 造模方法造模组大鼠采用前期研究改良的Hassan Shaker脊髓横断法[13-14]，制作T8椎体下完全性脊髓横断大鼠模型。具体如下：术前2 h给予抗感染处理；使用异氟烷麻醉大鼠并温和固定后备皮、消毒，定位T8椎体(约对应脊髓T10节段)[15]，逐层切开皮肤肌肉，充分暴露椎管内脊髓，用眼科剪快速横断后立即止血清创并逐层缝合；假手术组大鼠仅切开皮肤肌肉暴露相应节段的椎板和椎弓根后缝合。
1.4.3 术后护理

常规护理：(1)体温管理：缝合后立即将大鼠转移至铺有电热毯的低氧箱内，进行30 min复温，适当延缓大鼠苏醒时间，减少背部伤口因活动而大出血，造成皮下血肿，待其生命体征平稳后进行分笼饲养，3只/笼。(2)抗感染及营养管理：①手术当天，皮下注射乳酸钠林格注射液(20 mL/kg)以维持电解质及酸碱平衡，肌肉注射青霉素钠(20万U/只)以抗感染，予以5%葡萄糖注射液(5 mL/只)对口滴服或者注入大鼠饮用水中来减轻胃肠负担；②术后1-3 d，每日2次皮下注射乳酸钠林格注射液以及肌肉注射青霉素钠，逐渐进行少量饲料喂养；③术后4-7 d，每日1次肌肉注射青霉素钠，逐渐恢复正常饮食；④术后1-7 d，使用碘伏进行背部伤口及在辅助排尿前后

对尿道口消毒。(3)大便管理：每日2次采用顺时针手法轻轻按摩大鼠下腹部，注意避免按压到膀胱。在辅助排尿和排便时应避免提拉鼠尾造成脊髓二次损伤。(4)并发症处理：①自残、相互撕咬：每日在大鼠双下肢喷涂苦苹果喷雾；②腹胀：每日2次进行腹部按摩，严重者予以医用液体石蜡油灌肠处理。(5)环境管理：每日进行辅料更换，确保大鼠在干净整洁的鼠笼中生存。

排尿管理：从术后第1天开始，使用Crede法根据每日不同次数进行分组排尿，多次排尿间隔时间长分别为4，8，24 h，具体操作手法[16]：大鼠保持清醒状态，操作者双手拇指置于耻骨联合上方膀胱顶处，其余四指抵住膀胱底部，沿着耻骨方向逐渐施力向内下方挤压，挤压力度由轻到重缓慢增加。手法轻柔温和，避免用力挤压损伤膀胱，统一配合限时限量给水，每日给水20-25 mL/只[17]。
1.4.4 模型评价 ①脊髓休克期内后肢运动表现：使用BBB评分法进行评估[18]，模型大鼠BBB评分应为0分[19]，表现为后肢完全瘫痪，只在前肢活动时呈双下肢拖曳状态。②膀胱排尿情况：脊髓休克期内大鼠膀胱胀大明显，排尿功能完全丧失，表现为逼尿肌无反射型尿潴留。脊髓休克期后，大鼠膀胱胀大情况较前明显减轻，下腹部皮毛及笼内部分垫料保持潮湿。③尿流动力学检测：造模成功大鼠逼尿肌出现无抑制性收缩，膀胱漏尿点压差减少、最大容量增加。
1.5 主要观察指标
1.5.1 一般情况观察观察各组大鼠下肢运动、体质量、排尿、排便、术后存活及成模情况。
1.5.2 残余尿量测量造模组大鼠术后每隔3 d测量1次残余尿量，具体如下：使用异氟烷(麻醉方法及参数设置同造模)麻醉大鼠后行仰卧位固定，先用碘伏消毒尿道口和周围皮肤，用石蜡棉球充分润滑F3导尿管前端、尿道口及周围皮肤，经尿道插入膀胱后使用5 mL注射器抽出尿液，统一注入量筒内测量记录。
1.5.3 尿流动力学检测待大鼠模型稳定后(术后第19天[14])行尿流动力学检测。采用经尿道插入法，大鼠吸入异氟烷(麻醉方法及参数设置同造模)麻醉后，将其固定于鼠板上，用碘伏消毒尿道口及会阴部，石蜡棉球润滑导尿管及尿道口和周围皮肤，经尿道插入膀胱3个刻度线后将导尿管固定于大鼠尾巴，通过注射器将大鼠膀胱内尿液抽空，打开微量注射泵以0.2 mL/min的速度灌注常温生理盐水[20]，通过计算机记录并分析需要观测的指标。漏尿点压差=尿道口首次漏出液体时的压力值(kPa)-起始压力值(kPa)，膀胱最大容量=灌注时间(min)×灌注速度(0.2 mL/min)。
1.5.4 大鼠膀胱大体观大体观察对比各组大鼠膀胱体积及外观形态，进行摄像记录。
1.5.5 离体逼尿肌肌条收缩实验大鼠经异氟烷麻醉后，取下新鲜与完整的膀胱组织，迅速放入4 ℃ Krebs生理溶液(pH=7.2-7.4)中，在膀胱体部组织纵向切成10 mm×3 mm×3 mm大小的肌条。纵向肌条两端用缝合线结扎捆绑，一端连接张力传感器，另一端连接组织挂钩下端，保持肌条松弛。将肌条放入充满37 ℃的Krebs生理溶液，并通有体积分数95% O2和体积分数5% CO2混合气体的器官槽中，放置30 min，待肌条恢复活性。调节微量位移器，将张力调至2 g，放置30 min，通过计算机记录分析肌条自发性收缩幅度及频率。收缩幅度(g)=收缩波波峰平均值(g)-收缩波波谷平均值(g)；收缩频率(n/min)= N/30，以收缩状态稳定30 min时间段内的收缩波个数设为N。
1.6 统计学分析采用SPSS 25.0和GraphPad Prism 9软件进行数据分析和作图。数据分别用数量(n)、百分比(%)或x±s表示。计量资料符合正态分布且方差齐者，组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD法；不同时间点多次比较采用重复测量方差分析。以P ≤ 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已通过湖南中医药大学医学统计学专家审核。

讨论

脊髓损伤后，膀胱的储存和排空功能可能受到损害，若采取不当的膀胱管理措施，将显著增加泌尿系统感染的风险，可能导致尿路结石等并发症，进而影响患者的康复进程[21-22]。临床上，逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱患者较常见[23]，而清洁间歇导尿是神经源性膀胱尿路管理的金标准[24]，护理指南中推荐每日使用频率为4-6次[1]。
在动物实验中，相比于导尿法，Crede法作为一种人工辅助膀胱排空技术，因操作简单、成本低廉，能够减少对动物尿道的损伤和下尿路感染风险，利于尿流动力学的评估，同时能够较好地模拟临床上的清洁间歇导尿，在脊髓损伤模型大鼠的术后护理中广泛应用[25-26]。课题组在前期研究中多采用每日3次的辅助排尿频率[27]，结合护理指南的建议，考虑术后排尿次数可能对神经源性膀胱模型大鼠早期并发症的发生及其膀胱功能有影响，故该实验通过观察和对比每日不同排尿次数对脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠的影响，以确定适合逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱模型的每日最佳排尿次数，优化术后排尿次数方案。
膀胱的正常储排尿功能依赖于自主神经系统的平衡控制，包括交感神经和副交感神经的协调活动[28]。副交感神经主要由S2-S4骶神经根发出，支配膀胱逼尿肌的兴奋性收缩。交感神经支配主要来自胸腰段脊髓，调节尿道内括约肌的兴奋性收缩。该研究选择T8椎体下完全性脊髓横断，能够较精确地切断控制膀胱的交感和副交感神经通路，使副交感神经失去高级中枢的调控，导致膀胱逼尿肌反射不受控制，出现无抑制性收缩，可能表现为尿失禁或排尿困难等[29]。
该研究发现，每日排尿0，1次组大鼠存活率极低，且死亡解剖后发现膀胱内含大量白色结晶石和白色分泌物，肾表面脓肿坏死，推测出现严重的尿路感染，进一步分析可能存在的原因有：①解剖生理因素：实验动物选用雌性SD大鼠，其尿道较雄性短而直，易发生感染；②脊髓损伤术后功能障碍：脊髓休克期内，膀胱呈无或低收缩状态，尿液反复残留致膀胱过度扩张引起黏膜充血、水肿，膀胱壁等尿路组织血流减少，膀胱对细菌的抵抗力下降[30]；③膀胱管理：未给予合理的辅助排尿，尿液长时间储存于膀胱中无法排出，容易滋生细菌，加重感染；④操作手法问题：实验者给予大鼠Crede法辅助排尿时，可能出现排尿手法操作不当，用力过大，按压位置不准确等问题。
课题组早期研究发现，完全性骶上脊髓横断术后大鼠会先进入为期7 d左右的脊髓休克期[31]，实验观察到每日排尿0，1，3次组大鼠残余尿量在第6天达到尿量统计的最大值，可能是因为脊髓损伤模型大鼠在脊髓休克期内，膀胱逼尿肌无力收缩，残留的尿液持续增加，出现代偿性尿潴留，需要及时的手法辅助排尿来减轻膀胱的压力。而每日排尿5次组大鼠残余尿量呈持续下降趋势，可能是因为脊髓休克期内大鼠获得较多次的手法排尿，膀胱内残余的尿量相比于每日排尿3次组减少。脊髓休克期后，神经源性膀胱模型大鼠的膀胱功能逐渐开始恢复，故每日排尿3，5次组大鼠残余尿量在第6天后开始显著减少。团队早期研究亦发现脊髓损伤后神经源性膀胱模型大鼠成模的时间为术后第18天[31]，此时膀胱处于稳定状态，病理表现明显[32]，故残余尿量观察的时间截点为术后第18天。
尿流动力学检查是评估脊髓损伤后下尿路功能的常用方法[33]，与假手术组相比，每日排尿3，5次组大鼠膀胱内压力曲线变化异常，持续出现周期短而快的波动曲线，膀胱漏尿点压差明显减小，膀胱最大容量增大，提示骶上脊髓横断损伤后，支配膀胱的神经处于异常状态，膀胱在尿液不断充盈的压力刺激下，逼尿肌发生了反射亢进，导致膀胱出现持续且快速的无效性收缩，直至到达漏尿点，尿液才排出，同时由于膀胱逼尿肌持续进行无效收缩，尿液无法正常排出，造成漏尿时间延长，最大容量明显增大。结合膀胱大体观和膀胱逼尿肌离体肌条收缩实验结果得出，与假手术组相比，每日排尿3，5次组逼尿肌肌条收缩幅度和频率均显著减少，进一步证实了脊髓损伤后大鼠膀胱神经支配的异常，膀胱逼尿肌进行无效的过度收缩，致膀胱壁肌肉疲劳，逼尿肌代偿性肥厚增大，影响正常的排尿收缩功能。
研究发现，与每日排尿3次组相比，每日排尿5次组的各项实验结果基本无明显差异(除术后第6天的残余尿量)，表明在完全性骶上脊髓损伤术后的大鼠模型中，每日进行3次或5次的手法排尿，可以在维持大鼠生存的同时，建立逼尿肌反射亢进型的神经源性膀胱模型。此模型的特点是逼尿肌出现无抑制性收缩，膀胱持续进行过度无效收缩，导致膀胱壁肌肉劳损，代偿性增厚，膀胱容量增大，漏尿点压差减小。这些结果与课题组前期研究一致[27]，说明不同排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠膀胱功能有显著影响。
综上，该研究通过术后存活和成模情况、残余尿量、尿流动力学和离体肌条收缩实验结果分析得出，辅助排尿是模型成功的关键，考虑到排尿5次的工作量大，但成模率未见明显提高，因此每日至少实施3次的手法排尿，才能有效稳定逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱大鼠模型，为后续深入探究脊髓损伤后逼尿肌反射亢进型神经源性膀胱的分子机制以及电针等干预方法对此类疾病的疗效和作用机制研究提供重要的指导价值和研究意义。但此次实验亦存在局限性：①样本量偏小；②未设置更多排尿次数组别的对比；③未对其他可能影响膀胱护理的因素进行分别干预。针对上述问题，课题组将继续优化实验方案、增加更多排尿次数组别、对其他可能影响膀胱护理的因素进行干预研究，进一步完善神经源性膀胱模型大鼠的术后膀胱护理方案。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

完全性脊髓横断后排尿次数对神经源性膀胱模型大鼠成模率的影响

Effect of the number of times to urinate on the modeling rate of neurogenic bladder model in rats after complete spinal cord transection

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