臭氧治疗非酒精性脂肪肝：细胞因子水平的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.07.012

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (7): 1047-1051.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.07.012

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臭氧治疗非酒精性脂肪肝：细胞因子水平的变化

范晓棠，哈丽达•夏尔甫哈孜，陈新春，马海林，石绣江，何方平

新疆医科大学第一附属医院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054

出版日期:2015-02-12 发布日期:2015-02-12
通讯作者: 何方平，博士，主任医师，教授，博士生导师，新疆医科大学第一附属医院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
作者简介:范晓棠，女，1977年生，北京市人，汉族，博士，副主任医师，主要从事脂肪肝、肝硬化、肝癌的诊治研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81360138)

Ozone treatment of nonalcoholic fatty liver: variation of cytokine levels

Fan Xiao-tang, Halida Xiaerfuhazi, Chen Xin-chun, Ma Hai-lin, Shi Xiu-jiang, He Fang-ping

First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Online:2015-02-12 Published:2015-02-12
Contact: He Fang-ping, M.D., Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Fan Xiao-tang, M.D., Associate chief physician, First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81360138

摘要/Abstract

摘要：

背景：臭氧溶于血液治疗疾病目前已作为指南之外的补充治疗或者辅助治疗方法，但研究报告多为临床疗效描述性观察，臭氧治疗是否影响血清细胞因子尚不清楚。

目的：观察臭氧自体血回输治疗对非酒精性脂肪肝患者血清一氧化氮、前列腺素F-2a、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白、瘦素的影响。

方法：选取2013年10月至2014年6月于新疆医科大学第一附属医院肝病科住院治疗的非酒精性脂肪肝患者36例，按患者意愿分为臭氧治疗组和对照组，对照组单独护肝药物治疗，治疗组在护肝药物治疗基础上加用臭氧自体血回输治疗，所有伴有2型糖尿病和(或)血脂紊乱的入选者均接受专业的降糖和(或)降脂治疗，测定所有入选者治疗前后血清一氧化氮、前列腺素F-2a、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白、瘦素水平。

结果与结论：与对照组相比，治疗组患者治疗前血清中前列腺素F-2a和瘦素水平较高(P ≤ 0.05)，治疗前后两组患者瘦素差值水平差异无显著性意义(P > 0.05)，而前列腺素F-2a治疗前后差值水平差异仍具有显著性意义(P=0.02)。提示臭氧自体血回输治疗可降低非酒精性脂肪肝患者瘦素水平，改善非酒精性脂肪肝患者瘦素抵抗，对非酒精性脂肪性肝病患者远期预后可能有预防及治疗作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 组织工程, 非酒精性脂肪肝, 臭氧, 瘦素, 一氧化氮, 前列腺素F-2a, 白细胞介素6, 高敏C-反应蛋白, 氧化低密度脂蛋白, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Now, ozone autologous blood reinfusion treatment has been used as a supplementary treatment or auxiliary treatment besides guidelines. But the relevant reports often address the descriptive observation of clinical efficacy, and whether ozone treatment can influence the corresponding serum cytokines is unclear.

OBJECTIVE: To observe the effects of ozone autologous blood reinfusion treatment in nonalcoholic fatty liver patients by testing serum nitric oxide, prostaglandin F-2a, interleukin-6, high-sensitive C-reactive protein and oxidized low-density lipoprotein and leptin.

METHODS: Thirty-six hospitalized patients with non-alcoholic fatty liver disease were enrolled, and according to the wishes of the patients, they were divided into ozone treatment group and control group. The control group was only treated by the liver protective drug treatment, and the treatment group was treated with ozone autologous blood reinfusion treatment besides the liver protective drug treatment. All patients with type 2 diabetes and (or) dyslipidemia received professional hypoglycemic and (or) lipid-lowering therapy. Prostaglandin F-2a, interleukin-6, high-sensitive C-reactive protein, oxidized low-density lipoprotein and leptin levels were compared before and after treatment.

RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the control group, the serum levels of prostaglandin F-2a and leptin levels were significantly higher in the treatment group (P ≤ 0.05) at baseline, but after treatment, serum leptin levels had no significant difference between the two groups (P > 0.05), and serum prostaglandin F-2a levels were still statistically different between the two groups (P=0.02). These findings suggest that the ozone autologous blood reinfusion treatment can reduce the serum leptin levels and improve leptin resistance in patients with nonalcoholic fatty liver. Therefore, this treatment may have prevention and treatment effects on the long-term prognosis of nonalcoholic fatty liver disease patients.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Key words: Fatty Liver, Ozone, Leptin, Operative Blood Salvage

中图分类号:

R318

范晓棠，哈丽达•夏尔甫哈孜，陈新春，马海林，石绣江，何方平. 臭氧治疗非酒精性脂肪肝：细胞因子水平的变化[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(7): 1047-1051.

Fan Xiao-tang, Halida Xiaerfuhazi, Chen Xin-chun, Ma Hai-lin, Shi Xiu-jiang, He Fang-ping. Ozone treatment of nonalcoholic fatty liver: variation of cytokine levels[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(7): 1047-1051.

图/表（结果） 4

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引言

材料方法

设计：同期非随机对比观察。

时间及地点：试验于2013年10月至2014年6月在新疆医科大学第一附属医院肝病科完成。

对象：选取2013年10月至2014年6月于新疆医科大学第一附属医院肝病科住院治疗的脂肪肝患者。

诊断标准：参照中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2006年提出的非酒精性脂肪性肝病临床诊断标准^[18]。

纳入标准： ①患者行腹部B超明确为脂肪肝声像图者并符合非酒精性脂肪性肝病诊断。②肝功能检测基本正常，转氨酶≤ 200 U/L，无黄疸。③合并糖尿病和或高血压病，血糖和血压控制理想。④非高过敏体质。⑤无出血性疾病且血小板计数正常。⑥患者及家属均知情同意。

排除标准： ①病毒性肝病、酒精性肝病、药物性肝病等其他肝病所致脂肪肝者。②肝功能检测明显异常，转氨酶> 200 U/L和/或合并有黄疸者。③合并糖尿病和或高血压病，血糖和血压控制不稳定者。④合并精神系统疾病不能配合治疗者。⑤存在有严重的全身性疾病者。

入选病例符合上述标准者36例，其中男25例，女11例。按患者治疗意愿分为治疗组(n=19)和对照组(n=17)，签署知情同意书。2组在性别、年龄、民族构成比之间无显著性差异，具有良好可比性。

方法：

治疗方案：两组患者均接受内科护肝药物(多烯磷脂酰胆碱胶囊，赛诺菲北京制药有限公司、国药准字H20059010)治疗(456 mg/次，3次/d，口服)。治疗组患者在内科护肝治疗基础上加用臭氧自体血回输治疗(德国OZONLINE臭氧刀^TM)，操作流程为抽取肘正中静脉血200 mL，吸入容量为250 mL的负压真空瓶(内含抗凝剂)，将医嘱浓度的臭氧注入负压真空瓶中混合3-5 min，对血液进行臭氧化处理，最后将此臭氧化的血液回输入体内。接受臭氧治疗的患者臭氧初始剂量为20 mg/L，此后每次增加5 mg/L，直至目标剂量为40 mg/L，2次/周，10次为一个疗程。对照组患者不接受任何抗氧化治疗。所有合并糖尿病和(或)血脂紊乱的入选者均接受专业的降糖和(或)降脂治疗。

一般资料：患者身高(cm)、体质量(kg)要求受试者脱鞋、免冠、仅穿内衣测量，体质量指数=体质量(kg)/身高(m²)。

血清学指标的检测：血清一氧化氮、前列腺素F-2a、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白、瘦素水平测定，所有受试对象均隔夜禁食12 h后于次日清晨抽取肘正中静脉血，放入试管离心后取血清分装于EPT塑料管中，封口于-80 ℃冰箱保存批量待测；治疗组于高压臭氧满一疗程后(共10次，2次/周)、对照组于治疗组疗程结束后相同时间段再次隔夜禁食12 h后于次日清晨抽取肘正中静脉血，放入试管离心后取血清分装于EPT塑料管中，封口于-80 ℃冰箱保存，批量待测血清一氧化氮、前列腺素F-2a、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白、瘦素指标，上述6种血清学指标均通过ELISA法检测(试剂购自美国GBD试剂公司)，绘制标准曲线，计算样本浓度值。

主要观察指标：治疗前后患者血清一氧化氮、前列腺素F-2a、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白和瘦素因子水平。

统计学分析：使用SPSS 11.0统计软件包进行统计分析，计量资料以x(_)±s表示，结果如果数据方差齐性且呈正态分布，两组采用成组t检验，否则两组间比较采用Mann-Whitney U 检验，计数资料应用χ²检验，以P ≤ 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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讨论

臭氧又称为三氧或超氧，是自然物质，不稳定，在常温常压下半衰期约为40 min转化为氧气，具强氧化性。本研究所指的医用臭氧特指目前基于高压电将医用氧气转换为二价氧和三价氧混合物的机器所产生的臭氧，由计算机控制臭氧浓度和体积，并与患者血液在体外快速溶解 1 min，5 min左右全部回输患者体内的治疗模式，属于卫生部批准的医用临床治疗设备。

臭氧进入体内，刺激产生大量的一氧化氮、脂质过氧化产物等自由基，同时增加红细胞协氧能力，而一氧化氮分子可以作为信号分子改善内皮功能和微循环。臭氧有免疫调节作用^[19-22]，以及激活抗氧化酶和清除自由基的作用^[23]。研究表明，臭氧可以诱导出多种生物活性物质，包括细胞因子释放，激素样作用以及新陈代谢的活化，可以激发机体组织对氧的运输和传递，臭氧可以提高血小板和内皮细胞功能活性，使血管内皮细胞释放一氧化氮，能够诱导人体对慢性氧化应激的适应，这有助于逆转生物体某些慢性氧化应激失衡^[24]。臭氧治疗目前国外已经有百年以上的历史，方法仪器众多，德国、意大利、美国、北欧地区均广泛用于临床。目前每年累积百万人次以上的治疗病例，国际上建立有臭氧治疗联合会等学术组织。其治疗疾病包括：心血管疾病、肝脏疾病、感染性疾病、代谢综合症、疼痛、创伤修复等^[25]。臭氧溶于血液治疗疾病在中国处于起步阶段，较多见用于椎间盘突出症、骨关节病、宫颈炎、阴道炎、糖尿病足、下肢静脉血栓、脑栓塞、代谢综合征等^[26-53]，目前已作为指南之外的补充治疗或者辅助治疗方法，但研究报告多为临床疗效描述性观察。

研究表明细胞因子在非酒精性脂肪性肝病由脂肪肝向脂肪性肝炎及肝硬化的启动、发生和发展中起重要作用。本试验显示治疗组及对照组患者在治疗前血清一氧化氮、白细胞介素6、高敏C-反应蛋白、氧化低密度脂蛋白水平具有良好的均衡可比性，而血清前列腺素F-2a、瘦素存在差异，治疗组血清瘦素水平高于对照组，差异具有显著性意义，考虑与本次试验入选的非酒精性脂肪性肝病患者按意愿参与而非随机分配，由此可导致病情较重的患者进入治疗组的机会大于对照组，故而治疗组血清瘦素水平偏高，国内杨建锋等^[54-55]研究亦认为血清瘦素水平随非酒精性脂肪性肝病病情程度加重而升高。

新近国内外研究发现非酒精性脂肪肝存在瘦素抵抗，瘦素是近年发现的瘦素基因(ob基因)的表达产物，主要由脂肪细胞分泌的肽类激素，对控制摄食和能量消耗起着重要作用^[56]。瘦素与非酒精性脂肪性肝病的发生有密切关系，并且瘦素参与了非酒精性脂肪性肝病的发病^[57]，有研究发现在非酒精性脂肪肝患者发病机制中瘦素抵抗可促进胰岛素抵抗，从而共同参与其发病机制^[58-59]，试验结果提示臭氧自体血回输治疗可改善其瘦素抵抗，由此可推断臭氧自体血回输治疗可通过改善非酒精性脂肪性肝病患者瘦素抵抗而改善其胰岛素抵抗。

试验未能发现臭氧自体血回输治疗对其他血清学因子有何影响，考虑与本试验入选病例数较少，观察疗程较短等情况，这可能影响了对远期血清学指标变化的观察。非酒精性脂肪肝是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪性病变，近年来研究显示其发生危险因素聚集、动脉粥样硬化和糖尿病的概率显著高于对照人群，臭氧是氧气的同素异形体，具有独特性质，臭氧在机体不同系统表现出不同的作用，此与臭氧特殊的理化性质、代谢途径以及机体不同部位的抗氧化水平有关系^[50]，试验结果提示高压臭氧自体血回输治疗可明显改善非酒精性脂肪性肝病患者的瘦素抵抗状态，不仅可作为防治非酒精性脂肪性肝病的切入点，同时在与非酒精性脂肪性肝病密切相关的2型糖尿病预防和治疗中也可发挥一定的作用。臭氧自体血回输治疗对非酒精性脂肪性肝病预防治疗有远大前景，值得去实践探讨。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Ozone treatment of nonalcoholic fatty liver: variation of cytokine levels

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