光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.49.014

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (49): 7951-7957.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.49.014

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光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型

马浚宁^1，2，高俊玮^1，2，侯博儒¹，任海军^1，2，刘吉星¹，陈四化¹，严贵忠¹

¹兰州大学第二临床医院神经外科，甘肃省兰州市 730000；
²兰州大学生命科学院，甘肃省兰州市 730000

收稿日期:2015-09-03 出版日期:2015-11-30 发布日期:2015-11-30
通讯作者: 任海军，教授，硕士生导师，主任医师，兰州大学第二临床医院神经外科，甘肃省兰州市 730000 并列通讯作者：高俊玮，博士，副主任医师，兰州大学第二临床医院神经外科，甘肃省兰州市 730000
作者简介:马浚宁，男，1990生，青海省西宁市人，回族，兰州大学第二临床医学院在读硕士，主要从事神经干细胞移植治疗神经系统疾病的研究。
基金资助:
甘肃省自然科学基金(145RJZA146，1208RJZA184)

Establishing an animal model of ischemic stroke with photothrombosis method

Ma Jun-ning^{1, 2}, Gao Jun-wei^{1, 2}, Hou Bo-ru¹, Ren Hai-jun^{1, 2}, Liu Ji-xing¹, Chen Si-hua¹, Yan Gui-zhong¹

¹Department of Neurosurgery, Lanzhou University Second Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; ²Lanzhou University School of Life Sciences, Lanzhou 730000, Gansu Province, China

Received:2015-09-03 Online:2015-11-30 Published:2015-11-30
Contact: Ren Hai-jun, Professor, Master’s supervisor, Chief physician, Department of Neurosurgery, Lanzhou University Second Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Lanzhou University School of Life Sciences, Lanzhou 730000, Gansu Province, China. Corresponding author: Gao Jun-wei, M.D., Associate chief physician, Department of Neurosurgery, Lanzhou University Second Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Lanzhou University School of Life Sciences, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
About author:Ma Jun-ning, Studying for master’s degree, Department of Neurosurgery, Lanzhou University Second Hospital, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Lanzhou University School of Life Sciences, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Gansu Province, No. 145RJZA146, 1208RJZA184

摘要/Abstract

摘要：

背景：实验性缺血性脑卒中动物模型是研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具，光化学栓塞法制作缺血性脑卒中动物模型操作简便，稳定性好，重复性高，可有针对性的控制梗死灶的位置以及大小，是研究缺血性脑卒中病理机制的良好选择。
目的：建立光化学栓塞法缺血性脑卒中动物模型，对比不同性别小鼠缺血性脑卒中后梗死体积以及行为学表现的异同。
方法：62只昆明小鼠依据检测内容分为病理学检测6只、梗死体积测试16只和行为学测试40只。其中病理学检测小鼠分为假手术组和模型组，各3只；梗死体积测试小鼠分为雌性模型组和雄性模型组，各8只；行为学测试小鼠分为雌性模型组、雌性假手术组、雄性模型组和雄性假手术组，各10只。模型组(含雌性模型组和雄性模型组)小鼠采用光化学栓塞法制备局部缺血性卒中模型，假手术组(含雌性假手术组和雄性假手术组)小鼠不注射孟加拉玫瑰红染料。
结果与结论：尼氏染色显示模型组小鼠梗死中心出现神经元变性坏死，空泡样病理改变，Fluoro-Jade C染色可见模型组小鼠梗死中心中出现变性神经元，且雌性小鼠脑梗死体积显著小于雄性小鼠，模型组小鼠行为运动功能受损程度显著大于假手术组小鼠，其中雌性小鼠运动功能受损程度小于雄性小鼠。表明光化学栓塞法可以成功建立缺血性脑卒中动物模型，且相同条件下缺血性脑卒中对于雄性造成的神经功能损伤更为严重。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

Abstract:

BACKGROUND: Animal model of experimental cerebral ischemia stroke is an indispensable tool in the research of stroke pathology and the development of novel treatment. The animal model of cerebral ischemia stroke established with the photothrombosis method has simple operation, good stability and high repeatability, it can control the position and size of infarction loci, and therefore it is the preferred choice for studying the pathological mechanism of cerebral ischemic stroke.
OBJECTIVE: To establish animal models of cerebral ischemic stroke with the photothrombosis model, and compare the infarct volume and behaviors of difference genders of mice after ischemic stroke.
METHODS: Totally 62 Kunming mice were included in this study, 6 of them were used for the pathology detection, 16 of them for the measurement of infarction volume, and 40 for behavioral test. In the pathology detection, 6 mice were equally divided into sham group and model group; in the measurement of infarction volume, 16 mice were equally divided into female model group and male model group; in the behavioral test, 40 mice were equally divided into female model group, female sham group, male model group and male sham group. In the model groups (female model group and male model group), focal cerebral ischemic stroke model was established
with the photothrombosis method; in the sham groups (female sham group and male sham group), mice were not injected with rose Bengal dye.
RESULTS AND CONCLUSION: Nissl staining found neuronal degeneration, necrosis, and vacuolar pathology at the center of infarction loci in the model groups. Fluoro-Jade C staining shown neuronal degeneration at the center of infarction loci in the model groups. Infarct volume in female group was significantly smaller than that in male group. The motor function impairment in the model group was significantly greater than that in sham group, and female group showed less impairment of motor function than male group. These results suggest that the animal model of ischemic stroke can be successfully established with the phtothrombosis method. Male animals suffer more neurological damage from ischemic stroke than female under the same condition.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

马浚宁，高俊玮，侯博儒，任海军，刘吉星，陈四化，严贵忠. 光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(49): 7951-7957.

Ma Jun-ning, Gao Jun-wei, Hou Bo-ru, Ren Hai-jun, Liu Ji-xing, Chen Si-hua, Yan Gui-zhong. Establishing an animal model of ischemic stroke with photothrombosis method[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(49): 7951-7957.

图/表（结果） 6

2.1 实验动物数量分析实验除行为学测试中雄性模型组死亡1只，予以排除，其余小鼠均进入结果分析。见图1。

2.2 定点光栓建模的验证绿色激发光定点照射后可见照射处小鼠大脑皮质血管血流量明显减少，血管阻塞，使用红色激发光定照射可见透明发光的血栓逐渐形成(图2)，证实模型成功建立。

2.3 病理学变化建模1周后灌流取材，尼氏染色结果显示，小鼠海马形态受损，梗死区域神经细胞排列紊乱，组织结构松散，梗死边界区域细胞深染，梗死中心神经细胞液化坏死，形成空洞(图3A)。高倍镜下可见梗死中心区域神经元变性、坏死，神经元明显缺失，梗死边界区域留存的神经细胞萎缩，核固缩，深染，且有神经元丢失后空泡样病理改变(图3B)。假手术组小鼠低倍视野下可见细胞排列整齐，海马形态完整(图3C)，高倍镜下可见神经元形态正常，胞质内尼氏体明显，细胞核轮廓圆润，核仁清晰，染色质疏松(图3D)。

2.4 梗死体积造模1周后，尼氏染色显示，雌性小鼠梗死体积显著小于雄性(P < 0.01；图4)。

2.5 Fluoro-Jade C染色结果建模1周后，FJC染色显示，模型组小鼠梗死中心内出现大量密集且排列不规则呈绿色荧光的Fluoro-Jade C阳性细胞，梗死灶边界清楚(图5A)，绿染的三角形或多角形的变性神经元，并可见到神经细胞的突触(图5C)。假手术组小鼠未见Fluoro-Jade C阳性细胞(图5B，D)。

2.6 行为学测试结果
2.6.1 疲劳转棒测试假手术组和模型组小鼠造模后转棒滞留的时间均受到了不同程度的影响，第1天最为明显，第两三天回升较块，5-7 d趋于稳定。说明建模后，不存在外来干预的前提下，小鼠自身运动功能存在着一定程度的恢复能力。不论雌雄，模型组小鼠运动功能较假手术组受损较严重(P < 0.01)，说明光化学栓塞法模型建立成功。与雌性模型组相比，建模后1 d时雄性模型组小鼠的运动功能受损程度更为明显(P < 0.05；图6A)。
2.6.2 前肢抓力测试假手术组和模型组小鼠前肢抓力受到了影响，造模后第1天最为明显，随后各组小鼠前肢抓力均有所恢复。建模后第1天，雄性模型组小鼠前肢抓力显著低于雌性模型组(P < 0.01；图6B)。说明光化学栓塞法建模后，对雄性小鼠前肢抓力的影响较大。

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引言

神经系统疾病在全球范围内发病非常普遍，脑卒中发病率约占神经系统疾病的55%，被认为是造成躯体和精神残疾的首要原因，高脂血症、高血压、糖尿病、吸烟、酗酒等是诱发脑卒中的主要危险因素^[1]。缺血性脑卒中系指由血栓或栓子阻塞一个或多个脑血管所致的短暂性或永久性的脑血流供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性坏死，而出现相应神经功能缺损包括偏瘫、失语、认知和学习能力受损等一系列临床综合征^[2]。在过去几十年中，其发病率和死亡率持续性增加，尤其在发展中国家给患者和家属带来了严重的精神和经济负担^[3]。
实验性缺血性脑卒中动物模型作为研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具，被广泛应用于脑卒中领域的研究当中。在近10年的研究里，实验性缺血性脑卒中动物模型提供了大量关于缺血性脑卒中病理生理学机制的证据，并且模型建立的方法也呈现出多样化^[4-6]。最初由Watson等[7]于1985年所报道的光化学栓塞法制作缺血性脑卒中动物模型，迄今已有多年历史。其制作原理是通过给动物循环系统内注射一种光敏染料孟加拉玫瑰红，然后使用荧光照射动物脑组织表面激活光敏染料孟加拉玫瑰红，此过程会释放活性氧自由基，导致血管内皮过氧化损伤以及血栓形成，造成荧光照射区域局灶性缺血性损伤[8]。相较于其他缺血性脑卒中模型，这类模型操作简便，侵入性小，稳定性好，重复性高，而且其最大的优势在于研究人员可以针对性的控制梗死灶的位置以及大小，俗称定点卒中，是研究缺血性脑卒中病理机制的良好选择。
实验通过光化学栓塞法制备缺血性脑卒中模型，尼氏染色、Fluoro-Jade C染色观察了建模后1周脑组织病理变化，并对比分析不同性别小鼠建模1周后梗死体积以及运动行为学方面的差异。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

1.1 设计构建动物模型试验。
1.2 时间及地点实验于2014年8至11月在兰州大学生命科学学院实验室完成。
1.3 材料
实验动物：成年SPF级别昆明小鼠62只，鼠龄3.0-4.0个月，体质量25 g左右，雌雄各半，由兰州大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK(甘)2013-0002，实验过程严格遵守动物伦理学准则。

1.4 方法
1.4.1 实验动物分组 62只昆明小鼠依据检测内容分为病理学检测6只、梗死体积测试16只和行为学测试40只。其中病理学检测小鼠分为假手术组和模型组，各3只；梗死体积测试小鼠分为雌性模型组和雄性模型组，各8只；行为学测试小鼠分为雌性模型组、雌性假手术组、雄性模型组和雄性假手术组，各10只。
1.4.2 预训练造模前，所有小鼠在疲劳转棒上进行3 d的预训练，目的是为了挑选在行为测试期间，在同样条件下能够适应这种运动的小鼠。首先将小鼠放在静止的转棒上180 s进行环境的适应，然后在300 s内将转速从5 r/min加速到40 r/min，持续至390 s。在训练过程中掉落的小鼠放回转棒上直至训练结束。训练3次/d，每次间隔300 s。经过3 d的训练，绝大部分小鼠掉落时间都在390 s以上，因此在转棒上坚持390 s的动物被挑选进行前肢抓力测试。使用高精密的张力传感器结合用来测试和记录前肢抓力。当小鼠前肢抓住三脚架的抓杆后，轻轻缓慢的向后牵拉鼠尾，在小鼠前肢松开的瞬间抓力达到最大，最大值被生物机能软件系统记录，每只小鼠被连续测试5次，计算平均值。经预训练检测达标的小鼠，进入实验分析。
1.4.3 光化学栓塞法制备局部缺血性卒中模型定点缺血性脑卒中模型的建立采用修改的光化学栓塞法[9]。腹腔注射氯胺酮-噻拉嗪溶液至小鼠完全麻醉，从眼间至颈部剔除头顶部被毛，用碘伏消毒头顶部皮肤。矢正中纵向剪开头顶皮肤暴露颅骨，剥离颅骨表面结缔组织膜并用不锈钢刮刀休整。以bregma点为基准原点，于矢状缝左侧2.0 mm、冠状缝后2.0 mm处为卒中模型窗口，将双面刀片黏合于颅骨上。将刀片固定于定制的不锈钢台架上，使卒中模型窗口暴露于双面刀片中心空洞处，在解剖镜下用高速颅骨钻打磨暴露的颅骨至50 μm左右厚度，保持硬膜完整。用无菌压缩空气吹去打磨的骨粉，用不锈钢刮刀轻柔修整打磨面，直到滴加PBS可见清晰大脑浅表血管为止。尾静脉注射40 μL孟加拉玫瑰红染料溶液，立即将小鼠置于落射荧光显微镜下，使用绿色激发光定点照射磨薄颅骨处，控制照射面积为1 mm2照射时间2 min以激发染料反应，使用红色激发光定照射，建模成功。缝合小鼠头部皮肤，置于加热板上恒温保温至完全清醒后放回鼠笼，与未做手术的小鼠隔离饲养。假手术组小鼠不注射孟加拉玫瑰红染料。
1.4.4 疲劳转棒测试将动物放在静止的转棒上180 s，然后300 s内将转速从5 r/min加速到40 r/min，持续直至390 s，从转棒上第1次掉落的时间被记录，2次被动旋转，即抱着转棒而不是在转棒上走，被认为是掉落，每只动物每次测试3次，间隔5 min，取平均值。
1.4.5 前肢抓力测试利用自制的抓力装置连接高精度张力传感器进行前肢抓力测试，每只小鼠被连续测试5次，取平均值。
1.4.6 组织学取材建模后7 d灌注固定取脑：过量的0.12%氨基乙酸乙酯腹腔麻醉小鼠以后，固定小鼠，作胸腹正中切口，提出剑突，向两侧后上方剪开膈肌及胸壁，暴露心脏，剪破右心耳，自左心室先后注入PBS 20 mL及40 g/L多聚甲醛溶液20 mL进行灌注固定，取脑组织置于 40 g/L多聚甲醛溶液中，4 ℃后固定72 h后可进行切片。取包含所需部位的脑组织置于振动切片机切成30 μm的冠状切片。
1.4.7 尼氏染色梗死面积测定建模后7 d，梗死体积组小鼠麻醉后，心室灌流固定取脑，体积分数4%多聚甲醛固定 72 h，振动切片机切成30 μm的冠状切片，每120 μm取1片，空气干燥5-15 min，体积分数95%乙醇15 min，体积分数70%乙醇1 min，体积分数50%乙醇1 min，双蒸水 1 min，双蒸水1 min，甲酚紫溶液10 min，双蒸水1 min，体积分数50%乙醇1 min，体积分数70%乙醇2 min，体积分数95%乙醇2 min，体积分数100%乙醇2 min，体积分数100%乙醇2 min，二甲苯10 min，中性树胶封固，光镜观察尼氏染色结果，深蓝色为正常组织，淡蓝色为梗死区域。为减少水肿对梗死体积的影响，采用Loihl等[10]发现的公式计算梗死体积，梗死体积=对侧大脑的体积-同侧未损伤大脑的体积。
1.4.8 Fluoro-Jade C染色 1%NaOH- 80%乙醇混合液：5%的NaOH溶液20 mL+100%乙醇80 mL；0.06%高锰酸钾溶液：0.06 g高锰酸钾+100 mL 蒸馏水；0.1%的FJC染料储存液：0.001 g FJC粉剂用1 mL蒸馏水稀释成0.1%的染料储存液；0.000 1%FJC工作液：100 μL 0.1%的FJC染料储存液+100 mL 0.1%的醋酸液。切片自然晾干；切片首先浸入1%NaOH-80%乙醇混合液5 min，转入体积分数70%乙醇2 min，然后在蒸馏水中浸泡2 min；继而浸入0.06%高锰酸钾溶液10 min(室温)，后转入蒸馏水中洗 2 min；将0.000 1% Fluoro-Jade C染液(含0.1%的乙酸)均匀滴加到处理后的脑切片上，反应10 min(室温)，反应时应尽量避免强光照射；反应后的切片在蒸馏水中漂洗3次，每次1 min；晾干，透明(二甲苯1 min)，用中性树胶封固。荧光显微镜下采用蓝色滤色片(激发光波长为450-490 nm)观察并采集图像。
1.5 主要观察指标小鼠脑组织病理学及行为学变化。
1.6 统计学分析实验数据用x(_)±s表示。所得的实验数据使用SPSS 18.0进行分析。采用独立样本t 检验分析两组数据间的差异。多组间比较采用两因素方差分析。P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

讨论

脑卒中被认为是世界范围内致死和致残的首要原因，缺血性脑卒中指各种原因所致的大脑血流供应障碍，从而导致神经元、胶质细胞以及周围血管因局灶性脑缺血而受损的急性脑血管事件的一种类型^[11-12]。实验性缺血性脑卒中动物模型作为研究缺血性脑卒中病理机制以及研究开发新治疗方案必不可少的工具，被广泛应用于脑卒中领域的研究当中。目前主流的缺血性脑卒中模型有：栓塞模型、腔内缝合大脑中动脉近端模型、内皮素模型、大脑中动脉远端阻塞模型，其中每一种模型都有其自身的优势和劣势^[4，13-17]。栓塞模型主要包括两类，血栓阻塞模型和非血栓阻塞模型，其中血栓阻塞模型在发病机制及病理因素方面比其他模型更加接近于由血栓所致的缺血性脑卒中，非血栓阻塞模型则在其测试溶栓、抗凝等方面更具有优势^[5]。线栓法结扎大脑中动脉模型由于其侵入损伤小，且在制作短暂性缺血模型和永久性缺血模型方面易于控制。由Watson等创建的光化学栓塞法模型是通过小鼠尾静脉注射孟加拉玫瑰红溶液，牙科钻磨开小鼠骨窗，荧光显微镜下使用绿色荧光通道照射脑组织表面血管，激活血液中孟加拉玫瑰红，促使血栓形成，导致局灶性脑缺血。这类模型的制作相较于其他缺血性脑卒中模型，易于操作，侵入性小，稳定性好，重复性高，且可以通过改变荧光照射的部位，调整照射光圈大小以及照射时间来控制梗死区域以及梗死严重程度。虽然该模型制作技术受到诸多实验室的青睐，然而在国内文献却鲜有报道。本实验参考啮齿类动物脑图谱定位小鼠皮质运动区，采用光化学栓塞法建立皮质运动区卒中模型，观察了梗死1周后小鼠脑组织病理学变化，分析对比了小鼠皮质运动区受损后其在梗死灶大小以及对运动能力和前肢抓力造成损伤的性别差异。
尽管光化学栓塞法制作缺血性脑卒中模型操作简便，在模型制作过程中仍有诸多需要注意的事项。该模型对于梗死区域定位的要求较高，需严格参照啮齿类动物脑图谱，切开小鼠头皮后用刮刀将颅骨区域骨膜剔除，以bregma点为基准精确定位。牙科钻打磨颅骨时转速不宜过块，否则会因磨钻高速转动产热而造成梗死区域脑膜与脑组织粘连，导致取材困难。打磨颅骨时手持牙科钻需与颅骨表面保持水平位置，防止磨钻击穿颅骨，损伤脑组织，造成皮质浅表血管破裂出血，导致建模失败。模型制作完成后，小鼠麻醉复苏过程中需注意保暖，用纸巾包裹小鼠，将鼠笼置于温度设置为37.5 ℃加热垫有助于小鼠术后的复苏^[18]。
在缺血性脑卒中发生的过程中，缺血的程度和缺血时间是造成脑组织损伤严重程度的决定因素。在光栓模型中由于血供被阻断，梗死中心区域的缺血最为明显。实验中尼氏染色可见梗死中心处，大量神经元变性坏死，神经元丢失，呈空泡样病理改变。在梗死外围区域(缺血半影区)尚有残存的梗死动脉旁系分支为其提供部分血供。这部分区域仅在保持了结构上的完整性，而不具有生物学功能，如果缺血缺氧在数小时未能改善，缺血半影区则会演变为梗死中心的一部分^[19]。在梗死中心和缺血半影区，因缺血所致的神经细胞损伤的病理进程是存在差异的，一般来讲，神经细胞因缺血而死亡的病理生理方式可以归为坏死和凋亡^[20]。MacManus等[21]认为当缺血性脑卒中发生后，从梗死中心到缺血半影区，神经细胞的凋亡和坏死现像是各自独立却又交叉的两个极点，在梗死中心区域，坏死占主导地位。而远离梗死中心的缺血半影区则以神经细胞的凋亡为主。这与Fluoro-Jade C染色结果一致，课题组在观察过程中发现，Fluoro-Jade C染色阳性细胞主要表达于梗死边界区域，高倍视野下可以观察变性神经元的胞体及轴突。研究表明轻度的缺血会激活缺血区域炎性反应、氧自由基的释放、神经元兴奋性中毒、线粒体和DNA的损伤、细胞色素C的释放、诱导神经细胞变性进而致使其凋亡的发生^[22-24]。在缺血性脑卒中动物模型相关的研究中，梗死体积作为一项精确的参考指标，可以反映不同干预措施下梗死的严重程度以及评估相关治疗的有效程度^[3-4，25]。传统的组织学染色技术尼氏染色、TTC染色、苏木精-伊红染色等可以精确的区分局灶性脑缺血时正常组织和病变组织^[26-27]。值得注意的是在梗死体积的测量中需排除脑水肿对于结果的干扰，因此需要使用梗死体积校正公式^[10，28]。实验过程中，课题组将小鼠按不同性别分组，发现雌性小鼠梗死体积明显小于雄性小鼠。说明相同实验室参数下制备光栓模型，雌性组较雄性组受到的影响更小。对于这一现象，作者认为与雌雄鼠体内孕酮水平相关。大量研究表明孕酮可以延缓缺血性脑卒中、颅脑损伤时的病理反应，同时具有一定的治疗作用^[29-32]。
行为学测试可以评估中枢神经系统损伤以及不同干预措施下动物模型运动能力。课题组在建模后1周内分别进行了疲劳转棒测试和前肢抓力测试，发现造模后当天小鼠运动能力明显下降，这与麻醉手术以及皮质运动区的受损有关，然而术后小鼠运动能力存在一个自身恢复的过程。研究证实在病理条件下哺乳动物神经系统存在一种由内源性神经干细胞参与的自身恢复机制。神经干细胞是一种具有自我更新和分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞能力的细胞^[33]，主要位于成年哺乳动物中枢神经系统的特定区域如海马齿状回室管膜下区和侧脑室颗粒下区^[34]。当缺血性脑卒中发生时，室管膜下区神经干细胞被激活，梗死区域出现新生毛细血管。神经干细胞经新生血管和先前存在的血管迁移至梗死区域，少数神经干细胞存活并且分化成熟神经元，参与内源性神经再生过程^[35]。与梗死体积结果相一致，实验中发现建模后雌雄鼠之间在运动能力恢复程度上有所差异，建模后第1天雄鼠在运动能力以及抓力的下降较雌鼠明显，在缺血性脑卒中发生后，雌鼠的运动能力的恢复较雄鼠强。对于卒中后雌雄鼠间梗死体积以及行为学改变的差异，作者推测哺乳动物体内孕酮水平与内源性神经再生过程存在协同作用。孕酮在缺氧环境下对于神经细胞的受损存在缓冲和保护的作用，并且参与调控内源性神经干细胞的生物学性能。至于这种协同作用如何实验，以及孕酮对于神经干细胞生物学具体的影响，尚需进一步体内外对照研究证实。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

光化学栓塞法建立缺血性脑卒中动物模型

Establishing an animal model of ischemic stroke with photothrombosis method

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