镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.51.009

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (51): 8834-8840.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.51.009

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镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化

郭大伟¹，宋玲¹，张春艳¹，曹阳¹, 李菁文²，梁星²

¹青岛市市立医院口腔科，山东省青岛市 266071；²四川大学华西口腔医院修复科，四川省成都市 610041

出版日期:2013-12-17 发布日期:2013-12-17
通讯作者: 梁星，主任医师，教授，博士生导师，四川大学华西口腔医院修复科，四川省成都市 610041 xingliangdent@vip.163.com
作者简介:郭大伟☆，男，1974年生，山东省苍山县人，汉族，2010年四川大学毕业，博士，主治医师，副教授，硕士生导师，主要从事口腔修复学及种植学的临床和应用基础研究。 dawei_guo@163.com
基金资助:
青岛市科技计划基础研究项目(12-1-4-16-(8)-jch)*；青岛市卫生科技计划项目(2012-WSZD005)*；青岛市市立医院“总院长科研专项基金”项目(ZYZJJ-2013- W020-配)*

Variation in subgingival flora of abutments before and after removal of nickel-chromium alloy porcelain-fused-to-metal restoration

Guo Da-wei¹, Song Ling¹, Zhang Chun-yan¹, Cao Yang¹, Li Jing-wen², Liang Xing²

¹Department of Stomatology, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266071, Shandong Province, China; ²Department of Prosthodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Online:2013-12-17 Published:2013-12-17
Contact: Liang Xing, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Prosthodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China xingliangdent@vip.163.com
About author:Guo Da-wei,☆ M.D., Attending physician, Associate professor, Master’s supervisor, Department of Stomatology, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266071, Shandong Province, China dawei_guo@163.com
Supported by:
the Basic Research Program of Qingdao Scientific Plan, No. 12-1-4-16-(8)-jch*; the Health Scientific Plan of Qingdao City, No. 2012-WSZD005*; Dean’s Specific Fund of Qingdao Municipal Hospital, No. ZYZJJ-2013- W020-pei*

摘要/Abstract

摘要：

背景：目前有关镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群影响的研究还较少。
目的：探讨镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群构成比的影响。
方法：选择因怀疑镍铬合金烤瓷修复体影响健康而要求拆除原修复体的烤瓷牙患者9例(患牙12颗)，于镍铬合金烤瓷烤瓷修复体拆除前、拆除后1个月、拆除后3个月时，采用变性梯度凝胶电泳法检测镍铬合金烤瓷修复体基牙及对侧同名天然牙的龈下菌斑。
结果与结论：修复体拆除后1，3个月，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱与拆除前相比均发生了明显变化，而且拆后3个月与拆后1个月相比也发生了较明显变化；此外，选择在修复体拆除前龈下菌斑中经常出现而在拆除后消失或减弱的变性梯度凝胶电泳图像中一些特异性条带作16S rDNA片段的序列分析，结果显示这些特异条带的基因序列分别与啮蚀艾肯菌、直形弯曲菌和隐藏优杆菌有着较高的序列相似度。结果表明镍铬合金烤瓷修复体导致了修复基牙龈下菌群组成的变化，并且导致了部分牙周可疑致病菌构成比增加。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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关键词: 生物材料, 组织工程口腔材料, 变性梯度凝胶电泳, 镍铬合金, 金属烤瓷, 龈下菌群, 16S rRNA, 牙周可疑致病菌, 牙周炎, 镍离子, 铬离子, 牙周损伤

Abstract:

BACKGROUND: Currently, there are few reports on the effect of nickel-chromium (Ni-Cr) alloy porcelain-fused-to-metal (PFM) restoration on subgingival flora of abutment.
OBJECTIVE: To investigate the effect of the Ni-Cr alloy PFM restoration on subgingival flora ratio of abutment.
METHODS: Nine patients (12 teeth) who suspected that Ni-Cr alloy PFM could affect their health and therefore came to hospital to ask for removal of the prosthesis were selected in this study. Their subgingival plaques of abutment were obtained before and 1 month, 3 months after the Ni-Cr alloy PFM restorations were removed, respectively, and the changes of subgingival flora were observed and analyzed by the method of denaturing gradient gel electrophoresis.
RESULTS AND CONCLUSION: The images of denaturing gradient gel electrophoresis in subgingival bacteria of experimental group had significant changes at 1 and 3 months after Ni-Cr alloy PFM restorations removed, furthermore, there were significant differences in the images of denaturing gradient gel electrophoresis at 1 and 3 months. In addition, the specific bands were selected from denaturing gradient gel electrophoresis image that appeared before Ni-Cr alloy PFM restorations removed and weakened or disappeared after the removal of restorations, then 16S rDNA sequence in the specific bands were analyzed. The results showed that the gene sequences of these bands were closest related to Eikenella corrodens, Campylobacter rectus and Eubacterium saphenu. These findings indicated that the Ni-Cr alloy PFM restorations would result in the changes of the proportion of subgingival microflora and increases in the detection rates of some periodontal pathogens.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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Key words: biocompatible materials, chromium alloys, metal ceramic alloys, periodontitis

中图分类号:

R318

郭大伟，宋玲，张春艳，曹阳, 李菁文，梁星. 镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(51): 8834-8840.

Guo Da-wei, Song Ling, Zhang Chun-yan, Cao Yang, Li Jing-wen, Liang Xing. Variation in subgingival flora of abutments before and after removal of nickel-chromium alloy porcelain-fused-to-metal restoration[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(51): 8834-8840.

图/表（结果） 4

2.1 参与者数量分析 纳入符合试验标准的患者9例共12颗患牙，按意向性处理分析，全部进入结果分析。 2.2 修复体拆除前后患牙龈下菌群的变性梯度凝胶电泳图谱的变化 修复体拆除前后12颗患牙及对侧同名牙的龈下菌斑变性梯度凝胶电泳图谱，见图1-4。

通过Quantity One 4.3.0图像处理软件分析显示，虽然变性梯度凝胶电泳各泳道的条带总数无明显变化，见表1，但条带的强度和位置则出现了较明显变化。对变性梯度凝胶电泳各泳道图像的相似系数(Cs)进行比较分析结果显示，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像在镍铬合金烤瓷修复体拆除后发生了明显变化，而且其变性梯度凝胶电泳图像在修复体拆除前与对侧同名牙的差异较大，随着拆除后时间的推移其变性梯度凝胶电泳图像则越来越接近于对侧同名牙，见表2。

2.3 变性梯度凝胶中特异性16S rDNA片段的基因序列分析 虽然各组患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像在拆除原镍铬合金烤瓷修复体后出现的变化也各不相同，但有一些变化则是在多组出现且变化较明显。实验选择了在2，3，4号患牙的A泳道上均在同一位置出现，而在B、C、D泳道消失或减弱的条带，以及在5，6，8、9号患牙A泳道上均在同一位置明显出现，而在B、C、D泳道消失或减弱的条带作分析，分别选择其中2号A泳道上的条带(见图1黑色箭头所示)和位于8号A泳道的强度较高的那条条带(见图3黑色箭头所示)作切胶、克隆、16S rDNA片段的基因序列分析。分析结果显示，2号A泳道上的条带的16S rDNA基因序列与啮蚀艾肯菌的基因序列相似度为98%，8号A泳道条带的基因序列与直形弯曲菌基因序列相似度为96%。此外，本实验还对1号患牙A泳道上出现的一条带(见图1黑色箭头所示)进行了切胶、基因序列分析，该条带在1号患牙B、C、D泳道上均明显减弱，而且在其它患牙的变性梯度凝胶电泳图像上也基本没有出现或较弱，分析结果显示，该条带的基因序列与隐藏优杆菌有98%的基因序列相似度。

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引言

材料方法

设计：前后对照观察。

时间及地点：实验于2011年3月至2012年9月在青岛市常见病重点实验室完成。

对象：选择来青岛市立医院口腔科及四川大学华西口腔医院修复科就诊，因怀疑修复体镍铬元素影响健康而要求拆除原镍铬合金烤瓷修复体的9例患者(患牙12颗)作为研究对象，其中单颗烤瓷牙修复患者6例，2颗烤瓷牙修复患者3例；男性3例，女性6例；年龄26-60岁，平均(41.44±10.17)岁。

纳入标准： ①患者半年内未用对微量元素代谢有影响的药物，居住地区无明显环境污染，无镍铬金属职业接触史。②修复体所在的实验牙牙位限制在上颌一侧前牙和双尖牙区，要求为1个或2个单冠，修复体边缘深入龈下0.5-1.0 mm，无明显悬突，边缘密合度良好。③口腔卫生良好，无明显牙周疾病者。④咬合关系基本正常者。⑤实验牙的对侧同名牙为健康天然牙。⑥修复体拆除前半年内以及拆除后的实验期间未行牙周治疗者。⑦近3个月内未服用抗生素及免疫制剂者。⑧女性患者未妊娠。⑨无系统性疾病，依从性好者。

方法：采用自身前后对照及对侧同名天然牙对照的方法，于镍铬合金烤瓷烤瓷修复体拆除前、拆除后1个月、拆除后3个月取龈下菌斑，每次所取龈下菌斑予以编号，1-12为取样患牙编号，A、B、C和D则分别代表修复体拆除前、拆除后1个月、拆除后个3个月和对照组，修复体拆除前后所取所有样本同时采用变性梯度凝胶电泳法进行比较分析。

龈下菌斑的采集：选择烤瓷修复体基牙和对侧同名牙唇舌(腭)侧近远中轴面角处为取样区(4个位点/牙)，无菌纸尖放置20 s后取出，置于盛有1 mL PBS的无菌Eppendorf管中，在涡旋混合器上两次振荡30 s，然后将纸尖取出，置冰箱-70 ℃待检。

龈下菌斑DNA的提取：采用CTAB法提取龈下菌斑全细菌DNA^[8-9]。取出细菌标本，室温解冻，低温离心 5 min (4 ℃，12 000 r/min)，留沉淀物。将1.5 mL 2% CTAB裂解液加入到有细菌沉淀物的Eppendorf管中，振荡混匀，然后加入20 μL溶菌酶(100 g/L)和30 μL蛋白酶K(1 g/L)，37 ℃温度下，200 r/min振摇40 min，65 ℃水浴30 min。然后室温下冷却，加入等体积的氯仿-异戊醇(24∶1)，抽提2次，12 000 r/min离心15 min。收集上层清液到另一个新管中，加入0.1倍体积的3 mol/L醋酸钠和0.6倍体积的异丙醇，-20 ℃温度下放置 30 min，然后4 ℃温度下8 000 r/min离心10 min，弃去上清液。沉淀物用500 μL 体积分数70%乙醇清洗2次，最后一次离心(4 ℃，8 000 r/min) 10 min后，移去上清液，自然挥干，将DNA沉淀溶于50 μL去离子水中，置-20 ℃冰箱保存。

DNA纯度及浓度测定：紫外分光光度仪分别测量DNA在260 nm和280 nm处吸光率(A值)，样品DNA在260 nm和280 nm处的光吸收比值A₂₆₀/A₂₈₀在1.7-2.0的范围内，表示DNA纯度较好。

聚合酶链反应技术扩增龈下菌斑全细菌16S rDNA序列：采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)技术，引物设计含GC夹的16S rDNA通用引物扩增全细菌16S rDNA序列。正向引物(含一40 bp GC夹)：5’-CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GAA CGC GAA GAA CCT TAC -3’；反向引物：5’- CGG TGT GTA CAA GAC CC -3’。引物对应E.coli 16S rDNA序列上968-1401的核苷酸位置433 bp。采用TaKaRa公司的PCR扩增试剂盒，PCR扩增仪上进行扩增，扩增反应体系：DNA模板 2 μL，10×PCR buffer 2.5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL，2.5 U/μL Taq DNA聚合酶0.25 μL，20 μmol/L正向引物0.5 μL，20 μmol/L反向引物 0.5 μL，去离子水17.25 μL，合计25 μL。PCR反应条件：预变性94 ℃ 5 min，变性94 ℃ 30 s，退火65 ℃ 45 s，延伸72 ℃ 1 min，30个循环后，72 ℃充分延伸5 min。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶(0.5 mg/L溴化乙锭)进行电泳。

PCR产物的变性梯度凝胶电泳：采用Dcode通用突变检测仪对PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳。电泳采用80 g/L聚丙烯酰胺凝胶(丙烯酰胺/双丙烯酰胺=37.5∶1)，凝胶变性梯度为30%-70%(100%变性剂为7 mol/L尿素和体积分数40%甲酰胺)，变性剂浓度沿电泳方向由低到高。变性梯度胶完全凝固后，将胶板放入装有1×TAE电泳缓冲液的电泳槽中，取PCR产物15 μL加入加样孔中，在电压200 V和温度60 ℃的状况下电泳3 h。电泳后，凝胶用硝酸银染色，并拍摄照片。

变性梯度凝胶电泳图谱分析：变性梯度凝胶电泳图像采用Quantity One 4.3.0图像处理软件进行分析。分析方法采用Gillan等^[10]和Zijnge等^[11]建议的方法，以每个泳道的条带数来评价微生物多样性，用相似系数(coefficient of similarity，Cs)来比较两个微生物群的种群关系，计算公式如下：

变性梯度凝胶中特异性16S rDNA片段的基因序列分析：选择变性梯度凝胶电泳凝胶上特异性的DNA条带，用无菌手术刀片切下该条带，然后用1×PCR缓冲溶液40 μL洗涤2次，再用枪头捣碎，用1×PCR缓冲溶液40 μL浸泡，4 ℃过夜。取过夜浸泡液5 μL，以其中的DNA片段作模板按前面所述的方法进行PCR扩增，PCR扩增产物用DNA胶回收试剂盒纯化。纯化后的PCR扩增产物用pMD18-T载体试剂盒进行克隆，插入的DNA片段采用ABI PRISM^® BigDye^® 引物测序试剂盒以及自动DNA测序仪进行测序。测得的基因序列通过BLAST工具搜索基因库(GenBank)中的序列同源性。

主要观察指标：修复体拆除前、拆除后1个月、拆除后3个月患牙龈下菌群的构成比。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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讨论

3.1 16S rRNA序列分析和变性梯度凝胶电泳技术 近些年来国内外学者分别采用不同的分子生物学方法对细菌的16S rRNA进行了大量研究，并得到了广泛的细菌16S rRNA基因序列库^[12-15] 。该方法可以检测常规方法不能分离培养或生长缓慢的细菌^[16-18] 。16S rDNA是细菌染色体上编码16S rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌染色体基因中，是高度保守基因，其内部结构由保守区及可变区两部分组成。保守片段反应了生物物种间的亲缘关系，而变异片段则表明了物种间的差异，这些保守的或变异的特征性核苷酸序列是不同物种生物鉴定的分子基础^[19-22] 。基于16S rRNA基因的以上特性，可针对细菌变异区设计特异性引物进行PCR扩增，从而将细菌鉴别开；也可设计细菌保守区通用引物，PCR扩增所有细菌，用来比较微生物群落的多样性和监测微生物群体的动态^{[14,15, 22]} 。总之，利用编码16S rRNA基因的PCR技术可快速、灵敏地检测样本中是否存在某些细菌或致病菌，或进行细菌多样性分析，特别是无法人工培养的那些细菌，目前已逐渐成为细菌鉴别和分类的“金标准”。实验即以16S rRNA基因的PCR技术为基础，根据16S rRNA基因保守序列设计通用引物，扩增龈下菌斑中的全细菌，并结合变性梯度凝胶电泳技术来监测龈下菌群的变化。
变性梯度凝胶电泳技术最初由Fischer和Lerman提出，是用来检测DNA片段中单个碱基改变的点突变的一种电泳技术^[23] 。目前，变性梯度凝胶电泳已被引入到分子微生物生态学领域，现已广泛应用于环境微生物生态、人类和动物肠道微生物生态等的分析研究中^[24-25] 。该技术是利用梯度变性胶来分离DNA片段，其基本原理是设计5’端带有GC夹的通用引物，以提取的微生物样品的总DNA为模板，进行PCR扩增；DNA片段在变性梯度凝胶中泳动到一定浓度的变性剂时，双链DNA发生部分解链而呈分枝状，迁移速度逐渐减慢直至停止；由于不同的DNA片段的碱基组成有差异，使得其变性条件产生差异，即使仅有一二个碱基不同，其解链过程也不相同，因此在凝胶上形成不同的DNA条带，每一个DNA条带即代表一类细菌。变性梯度凝胶电泳技术结合相关统计软件，可以用来观察和监测微生物群落或单个菌群的组成变化^[26] 。大量研究表明，变性梯度凝胶电泳检测效率高、快速易行，且无需放射标记，特别适用于描述复杂的生物群体，此外，通过选择性的切胶、测序，还可以监测环境标本中特异微生物的存在^[24-27] 。实验将变性梯度凝胶电泳技术引入到镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群影响的研究中，通过龈下全细菌DNA图谱分析，摆脱了细菌培养、鉴定工作的繁琐，同时又能够更全面、动态的观察龈下菌群的组成和变化情况。
3.2 镍铬合金烤瓷修复体拆除前后龈下菌群变性梯度凝胶电泳图谱的变化 实验研究了9例患者共12颗患牙在镍铬合金烤瓷修复体拆除前后的龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱，通过变性梯度凝胶电泳图像分析表明，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱在修复体拆除后1，3个月相比拆除前均发生了明显变化，而且拆除后3个月相比拆除后1个月也发生了较明显变化；此外，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像在拆除镍铬烤瓷冠前与对侧同名牙的差异较大，而随着拆除后时间的推移其变性梯度凝胶电泳图像越来越接近对侧同名牙。这些结果表明镍铬合金烤瓷冠确实导致了修复基牙龈下菌群组成的变化，而在拆除镍铬合金烤瓷冠更换成金合金烤瓷冠或全瓷冠后，其龈下菌群的组成随着时间推移也逐渐发生变化，而且这种变化趋向于越来越接近正常对侧同名牙的龈下菌群构成。这个研究结果从另一角度论证了其他学者关于镍铬合金烤瓷修复体对牙周影响的一些相关研究。
许多研究表明，镍铬合金烤瓷修复体戴入口腔后会导致龈沟液成分的改变^{[3, 28-33]} 。赵彤等^[29]发现患者戴入镍铬合金烤瓷冠后，龈沟液中白细胞介素1β 及天门冬氨酸转氨酶水平明显增加。Li等^[30]对采用镍铬合金烤瓷冠修复的上颌切牙龈沟液中的C-反应蛋白和肿瘤坏死因子α进行了检测，也发现修复后龈沟液内C-反应蛋白、肿瘤坏死因子α明显增高。Barnes等^[32]检测到镍铬合金烤瓷冠修复后龈沟液中的NO浓度也随之增加。江泳等^[28]研究发现镍铬合金烤瓷冠修复后患者龈沟液量明显增加，而且龈沟液内的肿瘤坏死因子α和弹性蛋白酶的含量也明显升高。龈沟液是结缔组织内的液体不断通过龈沟内壁上皮和结合上皮进入龈沟内所形成的，Darany等^[33]认为龈沟液量的增加是牙龈炎症早期变化的敏感指标，其内各种炎症递质、酶和蛋白等成分与牙周组织疾病的发生发展都有着非常密切的关系。因此，推测镍铬合金烤瓷修复体导致龈沟液成分的变化，造成了修复体局部牙周微生态环境的改变，进而可能导致了龈下菌群构成的改变。
实验发现不同患者间的正常对照组龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像存在较大差异，而同一患者的两颗正常对照牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像则相似系数极高。这个结果说明即使是健康天然牙的龈下菌群构成在不同人群中也是有差异的，因而龈下菌群在一定范围内的组成变化并不一定会导致牙周疾病的发生。此外实验还发现，虽然各泳道的变性梯度凝胶电泳图像存在较多差异，但这些泳道的变性梯度凝胶电泳图像中都存在着一些共同的处于相同位置和强度的条带，还存在许多处于相同位置但强度不同的条带，而且变性梯度凝胶电泳各泳道的条带总数无明显变化。这说明各样本的龈下菌群的种类变化不明显，只是部分菌种的构成比例发生了变化。实验选择了一些特异性的条带作切胶、克隆、16S rDNA片段的序列分析，结果显示，在镍铬合金烤瓷冠拆除前的龈下菌斑中经常出现而在拆除后消失或减弱的变性梯度凝胶电泳图像中的条带其基因序列分别与啮蚀艾肯菌、直形弯曲菌和隐藏优杆菌有着较高的序列相似度，而这3个菌种目前认为可能与牙周疾病有密切关系^[34-37] ，但同时在健康牙周的龈下菌斑中也有较高的检出率^[38-39] ，因而，牙周疾病的发生可能是多种因素综合作用的结果。
综上，镍铬合金烤瓷修复体导致了修复基牙龈下菌群组成的变化，且导致了部分牙周可疑致病菌构成比增加，其原因可能与龈沟内镍、铬等金属离子的析出有关^[40] 。但对于镍铬合金烤瓷修复体是否一定会造成牙周的损伤及其机制尚待进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程
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实验研究了9例患者共12颗患牙在镍铬合金烤瓷修复体拆除前后的龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱，通过变性梯度凝胶电泳图像分析表明，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱在修复体拆除后1，3个月相比拆除前均发生了明显变化，而且拆除后3个月相比拆除后1个月也发生了较明显变化；此外，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图像在拆除镍铬烤瓷冠前与对侧同名牙的差异较大，而随着拆除后时间的推移其变性梯度凝胶电泳图像越来越接近对侧同名牙。这些结果表明镍铬合金烤瓷冠确实导致了修复基牙龈下菌群组成的变化，而在拆除镍铬合金烤瓷冠更换成金合金烤瓷冠或全瓷冠后，其龈下菌群的组成随着时间推移也逐渐发生变化，而且这种变化趋向于越来越接近正常对侧同名牙的龈下菌群构成。这个研究结果从另一角度论证了其他学者关于镍铬合金烤瓷修复体对牙周影响的一些相关研究。许多研究表明，镍铬合金烤瓷修复体戴入口腔后会导致龈沟液成分的改变。赵彤等发现患者戴入镍铬合金烤瓷冠后，龈沟液中白细胞介素1β 及天门冬氨酸转氨酶水平明显增加。李榕卿等对采用镍铬合金烤瓷冠修复的上颌切牙龈沟液中的C-反应蛋白和肿瘤坏死因子α进行了检测，也发现修复后龈沟液内C-反应蛋白、肿瘤坏死因子α明显增高。Barnes等检测到镍铬合金烤瓷冠修复后龈沟液中的NO浓度也随之增加。江泳等研究发现镍铬合金烤瓷冠修复后患者龈沟液量明显增加，而且龈沟液内的肿瘤坏死因子α和弹性蛋白酶的含量也明显升高。龈沟液是结缔组织内的液体不断通过龈沟内壁上皮和结合上皮进入龈沟内所形成的，Darany等认为龈沟液量的增加是牙龈炎症早期变化的敏感指标，其内各种炎症递质、酶和蛋白等成分与牙周组织疾病的发生发展都有着非常密切的关系。因此，推测镍铬合金烤瓷修复体导致龈沟液成分的变化，造成了修复体局部牙周微生态环境的改变，进而可能导致了龈下菌群构成的改变。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化

Variation in subgingival flora of abutments before and after removal of nickel-chromium alloy porcelain-fused-to-metal restoration

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