2.1  纳入文献基本情况  初检得到189篇文献，中文80篇，英文109篇。阅读标题和摘要  进行初筛，排除因研究目的与此文无关及过于陈旧的文章107篇，内容重复性的研究40篇，共保存25篇中英文文献做进一步分析。文献[1-8]综述了肌源干细胞的起源和研究进展，文献[9-16]阐述了肌源干细胞常用的培养方法，文献[17-25]总结了肌源干细胞在组织工程和再生医学研究中的应用。 2.2  结果描述 2.2.1  肌源干细胞的研究起源  长期以来肌组织中的肌卫星细胞受到关注和深入研究，其由Katz等[1]首次发现，是普遍存在于肌组织中的一类前体细胞，能够促进新生个体肌组织的正常发育和损伤后修复，能够保持通过自我复制和分化维持肌组织的形态和体积，进而维持肌肉的功能[2] 。肌卫星细胞在成熟肌组织中位于肌膜下的特殊位置，这使得肌卫星细胞紧贴于肌纤维表面，呈现包绕成熟肌组织的布局。肌卫星细胞在肌组织损伤后即被激活，能够迅速增殖和分化，促进肌组织的缺损。由此，损伤后肌组织的再生被认为全部归功于肌卫星细胞。但这一结论被成体肌组织中分离得到的一类多能细胞打破，这类细胞也被称之为侧群干细胞。Bhagavati等[3]从肌组织中分离得到侧群干细胞，将其注射到经过致死剂量射线照射后的小鼠血管内，发现此类细胞可以持续增殖并分化为几乎所有类型的血细胞，证实了其自我更新和多潜能分化的能力，因而也被赋予肌源干细胞的名称。有实验表明，向缺损肌组织中移植骨髓来源的干细胞和肌组织来源的干细胞同样可以促进肌肉组织的再生，但单独移植肌组织来源的干细胞后发现肌卫星细胞数目增加更为明显；且当肌源干细胞被特定的条件培液或组织微环境诱导时，可以转化为成肌细胞。 2.2.2  肌源干细胞的分离培养方法  不同的实验室通过各自的方法从肌组织中分离得到干细胞，并冠以肌源干细胞、侧群干细胞、mesoangioblasts和pericytes等名称等名称[4] ，部分方法分离得到的肌组织来源干细胞与肌卫星细胞的关系尚待进一步阐明，但结合这些研究报道中所得细胞在体内和体外均具有自我复制和多分化潜能的特性，参考干细胞定义的根本要义，可以统称为肌源干细胞[1-2] 。以下简述常见的肌源干细胞分离方法。 差速贴壁法(Preplate法)：Qu等[5]最先应用差速贴壁法分离肌源干细胞，经过不断地探索贴壁的次数和时间间隔来获得高纯度的肌源干细胞。该方法主要通过细胞培养板预先铺被多聚赖氨酸或胶原蛋白溶液，利用少量上皮细胞和成纤维细胞较快贴壁而肌源干细胞需较长时间贴壁的差异，逐步将肌源干细胞分离纯化。 流式细胞仪分选法(FACS)：Yu等[2]和Bhagavati等[3]利用肌源干细胞不能被Hoechst 33342染色的特点，应用FACS法分离纯化肌源干细胞。Tamaki等[8]应用类似方法，利用双激光波长鉴别分离MDSC中的两个亚群，CD34+ /CD45-细胞群和CD34+ /CD45+细胞群。 非贴壁生长法：Arsic等[6]则通过非贴壁生长法分离肌源干细胞。其肌组织取材于2-8周龄的动物，消化方法类似于Qu等[5]描述的差速贴壁法，但未使用胰蛋白酶。细胞悬液首次贴壁24 h后收集上清再次贴壁培养，重复6次，最后收集上清培养一两周后可以收集得到肌源干细胞。冠之以非贴壁生长法，实质也是利用少量上皮细胞和成纤维细胞较快贴壁而肌源干细胞需较长时间贴壁的时间差异进行差速贴壁，最后收集悬液中未贴壁的肌源干细胞进行培养。 2.2.3  肌源干细胞的生物学特性 肌源干细胞的形态和细胞表面标记物：作为新近研究的成体干细胞，出现了多种关于肌源干细胞表面特异性标记物的不同描述。尽管许多不同的表面标记物被用来鉴定肌源干细胞，但CD34 和Sca-1几乎得到研究者们的一致认可，而Desmin作为显示其肌组织来源的标记物也被广泛应用。CD34是细胞表面具有跨膜结构的一类糖蛋白分子，一般用来标记来自不同种属的造血干细胞[3] ，Sca-1同样也是多数种属造血干细胞表面特有的蛋白分子，一般作为肌组织来源的干细胞特有的标记物之一[4] 。Qu等[5]分离培养的肌源干细胞中，细胞多数呈现小圆形形态，部分呈现短梭形，折光性强，90%的细胞表达Sca-1。同时该实验室利用流式细胞分选的方法研究CD34(+)细胞和Sca-1(+)细胞之间的关系。研究表明肌源干细胞细胞中79%的细胞表达CD34，60%的细胞同时表达Sca-1和CD34，其中10%的细胞表达为Sca-1(+)/CD34(-)。Seal等[7]同样证实肌源干细胞 表达Sca-1，而不表达M-cadherin和Pax7等肌卫星特异性标记物[5] 。重要的是肌源干细胞并不表达造血干细胞特有的c-Kit和CD45，从而排除出了早期关于肌源干细胞来源于游走的造血细胞的猜测。Alessandri等[8]从人体肱桡肌肌组织分离得到肌源干细胞，其将细胞形态描述为两类：一类颇似肌卫星细胞的短梭形，一类为小圆形。这与Qu-Petersen等[9]对小鼠来源的肌源干细胞形态描述颇为相似。 肌源干细胞的干细胞特性：Qu-Petersen等[9]研究发现，肌源干细胞与其克隆集落表达的细胞表面标记物基本相同；对第30次传代肌源干细胞进行流式细胞检测，发现57%细胞表达为CD34(+)/Sca-1(+)，8%的细胞为CD34(-)/Sca-1(+)，这几乎与第10代肌源干细胞表达一致，且无成瘤现象，充分证实了肌源干细胞体外培养时良好的自我复制能力。Qu-Petersen等[9]还将肌源干细胞移植到杜兴肌营养不良症动物模型中，发现成肌细胞前体的数量大量增加，表明肌源干细胞在体内同样具备良好的自我更新能力；在肌源干细胞移植到杜兴肌营养不良症动物体内后90 d，仍可检测到抗肌萎缩蛋白阳性表达的新生肌纤维，可见肌源干细胞在体内拥有和在体外一样的超长时间扩增能力。 肌源干细胞的移植免疫优越性：肌源干细胞的另一个特点是其在移植过程中表现出免疫学优越性。在一组将肌卫星细胞和肌源干细胞分别移植进行肌组织损伤修复研究中，肌卫星细胞移植组的修复组织中检测到高水平的CD4(+) 和CD8(+)细胞，而仅在半数的肌源干细胞移植组检测到低水平的CD4(+) 和CD8(+)细胞。甚至在一些肌源干细胞移植部位一月后出现大量新生的抗肌萎缩蛋白阳性表达的肌纤维，而CD4(+) 和CD8(+)细胞检出率几乎为零。后续研究发现，肌源干细胞几乎不表达MHC-1(表达率为0.5%)，肌源干细胞低水平表达MHC-1几乎不触发肌源干细胞移植受区淋巴系统的细胞免疫反应，降低移植通常会带来的免疫排斥反应的可能性，从而提高肌源干细胞在移植部位的生存和促进组织再生的能力。 2.2.4  肌源干细胞在组织工程和再生医学研究中的应用 肌源干细胞应用于骨骼肌和心肌再生的研究：Arsic等[6]将肌源干细胞体外扩增后移植到肌组织缺损的小鼠体内，发现肌容量恢复57%，肌组织的收缩功能恢复55%，这两个数据在对照组均为20%左右，显示出肌源干细胞对肌组织体积和功能恢复的促进作用。Gallacher等[10]同时将肌源干细胞移植到肾脂肪囊下层后移植部位出现新生肌组织，以此证实肌源干细胞具有向肌组织分化的能力。Oshima等[11]将肌源干细胞注射到心肌功能不全的动物模型，发现肌源干细胞在心肌组织中存在时间较成肌细胞和肌卫星细胞更为持久，能促进血管生成和抑制心肌重构，更好的改善心肌的功能。 肌源干细胞应用于骨组织工程的研究：Claros等[12]曾应用分离得到的一类肌源细胞进行骨组织工程的研究，最初的研究认为肌组织中存在成骨细胞的前体细胞。Musgrave等[13]进一步通过基因工程的方法使这类细胞表达骨形态发生蛋白2，发现肌组织中出现了异位骨化现象，并且应用再生的骨组织完好修复了重度联合免疫缺陷小鼠的大面积颅骨缺损。研究还发现此类细胞能够表达一种成骨过程中的特异标记物——骨钙蛋白，这提示基因工程处理后的肌源细胞不仅能表达骨形态发生蛋白2，而且能够被诱导分化为成骨细胞。Wright等[14]应用反转录病毒载体将骨形态发生蛋白4导入肌源干细胞后发现能促进免疫缺陷动物体内骨组织再生。肌源干细胞相对于一般肌源细胞具有较弱的免疫原性而表现出移植免疫优越性，实验表明肌源干细胞能在移植受区存在更长的时间，因而相对于一般肌源细胞而言，利用肌源干细胞作为载体的细胞学治疗进行骨再生的研究更具有效性。有趣的是，Corsi等[15]发现雄性小鼠来源的肌源干细胞在研究中较雌性来源细胞具有更强的成骨能力。 以种子细胞和细胞支架为基础构建组织工程化组织是近来的研究热点。Peng等[16]向肌源干细胞细胞内转入可控的四环素tet-on调控反转录病毒载体，可以灵活的调控细胞在体内和体外的骨形态发生蛋白4表达，以期达到调控成骨的目的。然而，后续研究发现，以含有反转录病毒载体的肌源干细胞移植到颅骨缺损区，往往会造成骨形态发生蛋白4的过度表达，形成臃肿的骨组织块，即使减少移植的细胞数量也不能减少过量骨组织的生成。Peng等向表达骨形态发生蛋白4的肌源干细胞内同时转入特异性拮抗基因Noggin，通过对骨形态发生蛋白4和Noggin的双重调控，最终实现了骨组织再生的可控性。 肌源干细胞在软骨组织工程中的应用研究：Lee等[17]曾首次尝试分离部分肌源细胞以修复动物膝关节软骨的缺损，他们以腺病毒载体将胰岛素样生长因子Ⅰ导入实验动物的肌组织细胞，然后截取3 mm×3 mm大小肌组织用以修复同等大小负重区域软骨组织缺损，研究结果表明术后6周实验组得到了较好的修复效果。Adachi等[18]则将表达Ⅰ型胶原蛋白的基因导入部分肌源细胞，用以修复全层缺损的软骨组织，实验组3周后的组织修复效果几乎与软骨移植组相当；并且在长达24周的观察中，细胞移植组出现优于软骨移植组的修复效果，并能分泌Ⅱ型胶原蛋白。Adachi等强调了肌源细胞在整个过程中充当载体角色的重要作用，同时提示在肌源细胞中包含有一类干细胞，这类干细胞能分化为成软骨细胞并促进软骨组织的修复。为了验证后一猜测，Kuroda等[19]向肌源细胞内导入骨形态发生蛋白4表达基因，术后12周检测到修复组织中的骨形态发生蛋白4阳性表达的移植细胞，术后24周则主要依靠肌源干细胞进行再生和修复，证实了骨形态发生蛋白4促进肌源干细胞向软骨方向分化进而修复缺损的进程。近期研究还证实应用Flt-1拮抗血管内皮生长因子F受体以抑制组织血管化可以显著增加肌源干细胞的成软骨化进程。 肌源干细胞在泌尿系统中的研究：Lee等[20]将肌源干细胞注射到尿失禁动物的尿道括约肌周围进行自体移植研究，术后4周实验动物的尿失禁症状得到明显改善。Huard等[21]将肌源干细胞注射到免疫缺陷动物模型的膀胱壁，术后1周实验动物的膀胱收缩功能即有很大改善。该研究中还发现注射到膀胱壁内的肌源干细胞部分开始表达平滑肌的特异性标记物α-肌动蛋白。Proaño等[22]在应用肌源干细胞移植进行尿失禁细胞学治疗时发现，部分移植到患者膀胱的肌源干细胞能够表达乙酰胆碱能受体，而乙酰胆碱能受体通常出现在神经肌肉接头处，这表明肌源干细胞移植到受区后不仅分化为肌纤维，并且已经和神经系统建立了密切联系。在应用肌源干细胞进行尿失禁细胞学治疗的临床尝试中，患者的症状明显改善，类似的随访最长达2年多，表现出良好的治疗效果。 肌源干细胞在髓核再生和血管再生中的研究：Vadalà等[23]将髓核细胞与肌源干细胞共培养，试图促进髓核中蛋白聚糖的生成，以维持髓核的功能。为了研究肌源干细胞与髓核细胞间可能的相互作用，研究者调整髓核细胞和肌源干细胞的比例，分别在0∶100，   25∶75，50∶50，75∶25，100∶0的比例下进行细胞共培。实验结果表明实验组出现较高的蛋白多糖合成水平，并且随肌源干细胞比例增高呈现上升趋势，提示与肌源干细胞的共培能够促进蛋白多糖的生成和髓核细胞的扩增。 肌源干细胞在神经系统的研究：Alessandri等[8]将肌源干细胞诱导分化为神经系统胶质细胞，分化得到的细胞表达GFAP，b-tubulin Ⅲ和S100，分别是星形角质细胞、神经元和寡突胶质细胞得标记物。Schultz等[24]将肌源干细胞诱导分化为表达RT-97，b-tubulin Ⅲ，神经丝蛋白160，神经丝蛋白200，synapsin，CNPase和RIP的寡突胶质细胞及表达GFAP的星形胶质细胞，该研究同时发现肌源干细胞经诱导分化后得到的神经细胞在谷氨酸的作用下具有明显的钙吸收功能。 除以上研究表明肌源干细胞可向中枢神经系统细胞分化外，肌源干细胞可以分化为周围神经系统细胞。Qu-Petersen等[9]和Tamaki等[25]在应用肌源干细胞进行体内移植实验时，均发现再生的神经组织结构中有肌源干细胞的踪迹。鉴于此作者尝试将肌源干细胞在体外诱导分化雪旺细胞。在借鉴其他干细胞分化方案后，作者选择雪旺细胞条件培液与分离的到的肌源干细胞共培，在培养一周左右转化细胞表现为S100，GFAP和P75阳性，阳性率分别为(65.1±3.4)%，(23.3±1.7)%和(30.3±5.2)%，上述三者通常被用以鉴定干细胞向许旺细胞方向分化的证据，提示在适当的体外条件下诱导肌源干细胞分化为许旺细胞的可能性。"