其他干细胞
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图1｜FRET成像显示不同基质条件或ERK活性下MDCK上皮微组织的形成
结果：培养第9天之后，与包埋在Matrigel凝胶中相比，在Matrigel凝胶上生长的微组织FRET比值更高，代表了更高的ERK活性(图1A，B)，细胞团的直径更大(图1C)，提示改变培养的基质环境对MDCK微组织的形态发生有重要影响。用共聚焦显微镜拍摄培养第9天后的微组织图片，证明已形成了类似三维组织结构。使用PD98059、Sorafenib处理的MDCK微组织与对照组相比，ERK活性降低(图1A，B)，直径更小(图1C)；通过CCK-8实验分析，这2种抑制剂对MDCK细胞增殖有一定抑制作用(图1D)。这些结果表明ERK活性对MDCK上皮微组织的生长有重要调控
作用。
图2｜FRET成像检测细胞收缩力作用对MDCK微组织形成的影响
结果：培养第9天后，均形成了MDCK微组织(图2A)，与对照组(二甲基亚砜)相比，加入3种抑制剂之后ERK活性降低(图2A，B)，细胞团变小(图2C)。通过CCK-8实验检测细胞增殖活性，发现Y27632对细胞增殖有一定促进作用、Blebbsitatin对细胞没有影响、ML-7对细胞增殖有一定抑制作用(图2D)。这些结果表明，抑制细胞内收缩力后，ERK活性降低，微组织体积变小，显示细胞收缩力作用是该微组织正常生长的必要条件。
图3｜FRET成像检测钙离子通道对MDCK微组织形成的影响
结果：培养第9天之后，用2-APB和Nifedipine处理的细胞能够形成微组织形态，而Thapsigargin处理的细胞没有组织形态的发生(图3A)。与对照组(二甲基亚砜)相比，2-APB和Nifedipine处理后ERK活性和细胞团大小显著下降(图3B，C)。CCK-8实验显示这3种抑制剂对细胞增殖都有明显抑制作用(图3D)。该结果显示选择性抑制IP3R Ca2+ 通道和质膜上L型Ca2+通道导致MDCK微组织变小，而Thapsigargin对细胞的毒性较大，影响微组织的正常形态发生。
图4｜FRET成像显示Piezo与整合素信号对MDCK微组织形成的调节作用
结果：培养第9天后，与对照组(二甲基亚砜)相比，加入Piezo抑制剂的实验组ERK活性更低(图4A，B)、直径更小(图4C)。CCK-8实验分析显示该抑制剂对细胞增殖没有显著影响(图4D)。这些结果初步表明Piezo1力敏感通道对MDCK细胞中的ERK活性和组织形态大小发挥有效调控作用。加入AIIB2抗体后，实验组中仅形成没有完整组织形态的细胞簇，CCK-8实验分析表明AIIB2对MDCK细胞增殖没有显著影响(图4A-D)，这些结果证实整合素在该组织形态发生中具有重要作用。
图5｜FRET成像显示不同细胞外基质环境影响MDCK的形态发生
结果：培养第9天后，与100% Matrigel凝胶相比，50% Matrigel凝胶上MDCK微组织的ERK活性和直径没有显著性差异(图5A-C)。在基质中加入不同质量浓度Ⅰ型胶原后，对MDCK微组织形态发生有显著影响，生成长形的细胞团(图5A)。与50% Matrigel凝胶条件比较，添加Ⅰ型胶原的各组ERK活性没有显著变化(图5B)。通过测量长轴方向的大小，发现Ⅰ型胶原质量浓度越高，形成的细胞团长度越长(图5D)。这些结果表明胞外基质胶的组成对MDCK的形态发生有重要影响。