其他干细胞

    贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法分离纯化鉴定大鼠纤维环源干细胞
  • 图1|倒置相差显微镜下大鼠原代纤维环源干细胞形态(×200)


    图2|荧光显微镜下纤维环源干细胞的骨架形态(鬼笔环肽及DAPI染色,×200)

    结果:原代细胞初次接种于培养瓶,倒置相差显微镜下观察未染色细胞呈多角形。使用鬼笔环肽及DAPI对细胞进行染色,荧光显微镜下可观察到培养24 h时,细胞开始贴壁生长,形态呈不规则形;培养至第4天,细胞开始增殖,且形态多以圆形、三角形为主;培养至第7天,形态呈多角形和星形多突起细胞为主;培养至第14天,细胞生长状态良好,形态未见明显变化,细胞融合度已达到70%-80%,见图12

    图5|大鼠纤维环源干细胞(AFSCs)表面标志物免疫荧光表达(×200) 

    结果:细胞免疫荧光染色结果显示,AFSCs表面特异性标志物CD105、CD73、CD90呈阳性表达,CD45、CD34呈阴性表达,见图5

    图6|大鼠纤维环源干细胞成骨诱导分化(茜素红S染色,×200) 

    结果:加入成骨诱导液的AFSCs于培养第5天开始其细胞形态发生明显变化,3周后使用多聚甲醛固定液对细胞进行固定,选用10%的茜素红S染色液对细胞进行染色,镜下可明显观察到细胞被红染,染色细胞呈典型成骨细胞形态并有明显的红色钙结节沉积出现,而未诱导对照组细胞无明显染色和钙结节出现,呈阴性,
    图6

    图7|大鼠纤维环源干细胞成软骨诱导分化(番红O 染色,×200) 

    结果:加入成软骨诱导液的AFSCs经培养后其细胞形态膨大变圆,且呈现出明显的类软骨细胞形态,3周后使用多聚甲醛固定液对细胞进行固定,选用2.5%番红O染色液对细胞进行染色,镜下可观察到由于软骨细胞特异性分泌大量硫酸蛋白聚糖而呈现出明显的细胞红染现象,而未诱导对照组细胞无明显染色,见图7

    图8|大鼠纤维环源干细胞成脂诱导分化(油红O染色,×200) 

    结果:AFSCs进行成脂诱导培养后,细胞变成空泡样而呈脂肪细胞形态,2周后使用多聚甲醛固定液对细胞进行固定,选用0.36%的油红O染色液对细胞进行染色,镜下可观察到细胞呈明显红染,而未诱导对照组细胞无明显染色且形态也无明显变化,呈阴性,见图8

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  • 发布日期: 2024-01-23  浏览: 46