其他干细胞

    干细胞来源与组织来源小细胞外囊泡诱导脂肪新生的比较
  • 图1|大鼠脂肪干细胞的鉴定

    结果:光学显微镜下见脂肪干细胞形态呈长梭形,胞体狭长,有一定方向性,见图1A。用成脂诱导液处理10 d诱导脂肪干细胞成脂分化,油红O染色后在光学显微镜下可见细胞内形成了红色的脂滴,见图1B。流式细胞仪鉴定显示脂肪干细胞标志物CD29的标记率为99.6%,CD90的标记率为100%,CD105的标记率为99.9%,CD31、CD45表达均在1%以下,具有典型的间充质干细胞特征,见图1C

    图2|小细胞外囊泡的提取和特性检测

    结果:sEV-ASC与sEV-AT的提取流程见图2A。根据培养液体积及所获取的sEV颗粒数计算sEV的产率,结果显示sEV-ASC产率为2.45×108颗粒/mL,而sEV-AT产率为3.73×109颗粒/mL,在相同体积的培养液中,sEV-AT颗粒数目是sEV-ASC颗粒数目的15.2倍(P < 0.01),sEV-AT产量远大于sEV-ASC,见图2B。纳米颗粒跟踪分析结果显示,sEV-ASC和sEV-AT的粒径绝大部分在50-200 nm之间,sEV-ASC平均粒径为125 nm,sEV-AT的平均粒径为137 nm,sEV-ASC比sEV-AT的平均直径略小,都符合sEV的直径范围,见图2C;Western blot检测显示sEV-ASC和sEV-AT均表达外泌体标志蛋白CD81、CD63、TSG101,不表达β-actin 蛋白,见图2D。透射电镜结果显示,sEV-ASC和sEV-AT均显示出典型的类圆形囊泡状结构,见图2E

    图4|两种小细胞外囊泡促进体内细胞募集

    结果:对小鼠体内植入3 d硅胶管内容物进行苏木精-伊红染色,结果显示,宿主细胞主要集中在植入硅胶管与小鼠皮肤连接处,见图4A,空白对照组的细胞数最少,加入了sEV的2组都比空白对照组募集到更多的细胞。对硅胶管内总细胞数进行计数,结果也显示空白对照组的细胞数最少,平均为8.9×105个,加入了sEV的2组都比空白对照组募集到更多的细胞,且sEV-AT组(平均为2.1×106个)比sEV-ASC组(平均为1.7×106个)募集到的细胞更多,见图4C
    对小鼠体内植入7 d硅胶管内容物进行苏木精-伊红染色,结果显示各组植入硅胶管与小鼠皮肤连接处的浸润细胞比植入3 d时均有增加,见图4B;对硅胶管内总细胞数进行计数,结果显示空白对照组中的细胞数为1.2×106个,sEV-ASC组为1.7×106个,sEV-AT组浸润细胞数最多,平均为2.4×106个,见图4D

    图5|两种小细胞外囊泡促进体内脂肪生成效果

    结果:植入后4周,在小鼠背部行矢状位正中切口,钝性分离皮下组织,翻开,从小鼠体内取出硅胶管,对内容物进行苏木精-伊红染色,如图5A所示,空白对照组没有明显的脂肪组织生成;sEV-AT组和sEV-ASC组可见新生血管以及空泡状的脂肪细胞形成,计算新生脂肪组织占硅胶管切面面积的比例,结果表明sEV-AT组比sEV-ASC组的新生脂肪组织的面积更大,见图5B

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  • 发布日期: 2023-11-25  浏览: 56