干细胞与外泌体
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图1｜分离培养的神经干细胞形态及免疫荧光染色鉴定(标尺为100 μm)
刚提取培养的神经干细胞有少量贴壁，大部分悬浮呈单细胞样分布，折光性好。随着培养时间进展，可见悬浮细胞聚集成团，呈桑葚状，且大小不等，细胞纯度增高。然后细胞团直结果：径逐渐增大，部分克隆球中心变暗，经消化换液及传代后形态更加均匀、规整、折光性好且无明显突起，见图1A-C。免疫荧光检测结果显示，提取的细胞高表达神经干细胞标志性蛋白 CD133和Nestin，提示获得较高纯度的神经干细胞，见图1D-I。
图2｜分离培养的星形胶质细胞形态及免疫荧光染色鉴定(标尺为100 μm)
结果：提取培养的星形胶质细胞形态呈典型的不规则星状。随着培养时间进展，细胞数量逐渐增多，纯度逐渐增高，见图2A-C。免疫荧光检测结果显示，提取的细胞中星形胶质细胞特异性标志蛋白胶质纤维酸性蛋白呈现高表达，且细胞纯度达到(96.11±1.52)%以上，提示细胞纯度高，符合后续实验需求，见图2D-F。
图3｜星形胶质细胞来源细胞外囊泡(AS-EVs)的鉴定
结果：透射电子显微镜观察 AS-EVs 形态近似圆形或椭圆形杯状，直径在20-200 nm，见图3A；动态光粒子散射仪显示AS-EVs直径分布在10-200 nm之间，见图3B；Western blot结果示AS-EVs中细胞外囊泡特异性标志蛋白TSG101及CD63高表达，见图3C；上述结果显示提取的AS-EVs符合细胞外囊泡标准。
图4｜星形胶质细胞来源细胞外囊泡(AS-EVs)对神经干细胞增殖及形态的作用(标尺为100 μm)
图5｜星形胶质细胞来源细胞外囊泡(AS-EVs)诱导神经干细胞分化的鉴定(标尺为50 μm)
结果：CCK-8结果显示随着AS-EVs质量浓度增加，神经干细胞增殖活性逐渐增强，根据统计学分析1.0 mg/mL与1.5 mg/mL组之间差异无显著性意义，故选用1.0 mg/mL AS-EVs进行后续实验，见图4A。
PBS组神经干细胞少量贴壁分化，贴壁细胞具有细长突起，呈神经元样，见图4B；而AS-EVs组神经干细胞大量贴壁分化，分化细胞胞体饱满，可见明显细长突起，呈神经元样，见图4C。免疫荧光检测结果显示AS-EVs 组较PBS组中神经元特异性标志物神经丝蛋白200、微管蛋白β3呈显著高表达(P < 0.01，n=3)，见图5A-M。
AS-EVs 组较 PBS 组显著高表达神经元特异性标志物微管蛋白β3及神经丝蛋白200(P均 < 0.001，n=3)，见图5N-P，经多种方式验证得AS-EVs可以促进大鼠神经干细胞向神经元分化。