牙髓干细胞

慢病毒介导沉默Smad2基因对人牙髓干细胞成骨向分化的作用

• 图1｜不同感染复数(MOI)值慢病毒感染人牙髓干细胞72 h后的荧光表达(×100)

  

  结果：由荧光镜下图片可知在感染复数为100、感染时间为72 h且采用助染剂Polybrene的情况下细胞转染效率达到80%，荧光强度达到最大，因此在后续的实验中选用了这一条件，见图1。qRT-PCR检测结果显示，与空白对照组(1.008±0.156)、阴性对照组(1.091±0.198)相比，shRNA1组 (1.168±0.067)、shRNA2组(1.114±0.181)Smad2的mRNA相对表达量差异无显著性意义(P > 0.05)， shRNA3组(0.408±0.077)Smad2的mRNA相对表达量明显降低，差异有显著性意义(P < 0.05)，慢病毒敲减效率60%左右，后续实验使用shRNA3慢病毒，见表2。
  

  图5｜牙髓干细胞诱导第7天和第14天的茜素红染色结果(×100)

  

  结果：通过茜素红染色观察，培养第7天后，Smad2-shRNA+转化生长因子β3组可见明显的红色沉积物，空白对照组、阴性对照组及Smad2-shRNA组均未出现矿化结节现象。培养第14天后，Smad2-shRNA+转化生长因子β3组可见红色沉积物明显增多，其余组均未出现矿化结节现象。结果表明，使用常规培养基培养以及使用慢病毒载体转染细胞不能诱导牙髓干细胞的成骨分化，而转化生长因子β3能够正向调控牙髓干细胞的成骨向分化，见图5。

  
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发布日期： 2022-11-29  浏览： 299