脐血干细胞

两种方法提取人脐带间充质干细胞三维培养生物学特性的比较

• 图1｜酶消化法和组织块贴壁法原代分离提取人脐带间充质干细胞的形态(标尺为100 μm)

  

  结果：酶消化法分离提取第1天观察到极少量细胞贴壁，第3天可见部分细胞贴壁且呈梭形伸展，在第11天细胞融合密度可以达到85%；组织块贴壁法分离提取第7天以后可见细胞从组织块边缘爬出，第13天细胞融合密度可达到85%，见图1。

  
  

  图2｜酶消化法和组织块贴壁法分离提取人脐带间充质干细胞三维球形培养结果

  

  结果：酶消化法细胞获取时间比组织块贴壁法更短。两种方法提取的细胞进行三维球形培养都能自发聚集，在24 h后形成直径在200-300 μm的细胞球体；扫描电镜观察可见培养3 d的细胞球中细胞和细胞紧密结合；死活染色观察到培养3 d后细胞球外部细胞存活状况良好，中心部分少量细胞凋亡，见图2。

  
  

  图5｜两种原代分离方法提取人脐带间充质干细胞在二维和三维培养下的干细胞标记(标尺为100 μm)

  

  结果：免疫荧光与western blot结果显示：在二维培养和三维培养下酶消化法和组织块贴壁法提取细胞都检测到Sox2、Nanog、Oct4的蛋白表达，见图5，6。灰度值分析结果显示：在二维培养条件下酶消化法Sox2、Nanog、Oct4的表达均高于组织块贴壁法，差异均有显著性意义。在三维培养条件下组织块贴壁法Sox2的表达高于酶消化法(P < 0.01)；Nanog、Oct4的表达两种原代分离方法差异无显著性意义。
  

  
  

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发布日期： 2021-12-29  浏览： 501