发表时间:2019年第23卷17期发表
文题:分离与鉴定人脂肪间充质干细胞来源的外泌体
第一作者:王静
更正理由 :作者校对失误,文章内容要更改
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2.2 脂肪间充质干细胞的流式细胞学检测 CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,阳性率分别为98.6%,93.6%,93.6%及85.0%,CD34及CD45为阴性表达,阴性率分别为98.7%和92.6%,见图2。
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3.第2655页
多种方法均可获得脂肪组织,其中吸脂术能获取大量的脂肪组织[27],McIntosh等[28]表明每毫升吸脂术后的组织中可在单次传代中产生2.5×105个有核细胞,有研究亦证实每毫升吸脂术后组织中经扩增培养后平均能获得大量脂肪间充质干细胞[29]。不同部位、不同层次的脂肪组织所含脂肪间充质干细胞量不同,更多的脂肪间充质干细胞存在于皮下脂肪中[30]。不同脂肪组织分离出的脂肪间充质干细胞活性也存在差异[31],据报道及预实验结果,实验选用腹部浅层皮下吸脂术后脂肪。脂肪间充质干细胞的分离提取方法多种多样,常见的有酶消化法和组织块贴壁法[32]。成熟的脂肪细胞含有大量的胶原酶[33],使用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织易于分离成熟的脂肪细胞与脂肪间充质干细胞,可获取较大量的脂肪间充质干细胞。
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使用酶消化法提取的细胞为许多细胞类型的群体,包括血细胞、前脂肪细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、滞留的单核细胞/巨噬细胞、淋巴细胞和脂肪间充质干细胞等[11],需对脂肪间充质干细胞进行鉴定。据目前研究表明脂肪间充质干细胞无单一特定的表面标志物,其与骨髓间充质干细胞表面标志物相似[34],需通过对多种相对特异的表面标志物进行检测来对其进行鉴定。常用的检测方法为流式细胞技术和免疫组织化学技术。CD29存在于红细胞外几乎所有细胞及组织内[35],其阳性高表达可排除红细胞污染。CD44在人间充质干细胞群体的几乎所有细胞中均有表达[36];CD90在各代间充质干细胞中均高表达[37];CD105与CD44相似,也几乎表达于所有人间充质干细胞内[36],此3者均高表达可认定为间充质干细胞。CD45为造血系统源细胞细胞表面标志物[25,38],其阴性高表达表达,可排除造血干细胞污染。实验使用流式细胞仪检测结果显示CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,CD34,CD45为阴性表达。与以往研究报道相符[8,34],可以在很大程度上认为脂肪间充干细胞。
5. 第2656页
细胞来源的囊泡外形均呈杯状,杯状形态是区别细胞是区分细胞来源囊泡和大小相似的颗粒有用的特征[5],区分微泡、凋亡小体和外泌体主要在于直径大小,外泌体直径30-100 nm,透射电子显微镜是鉴定外泌体的金标准,是惟一可以同时测定囊泡大小和观察囊泡形态的方法[68]。粒度仪可以检测悬浮颗粒的直径分布[69]。实验透射电子显微镜鉴定的颗粒形态呈杯状,有膜结构,直径(81.225± 22.226) nm,结合粒度仪测定的颗粒直径范围集中于70-100 nm可以初步认为实验使用差速离心法提取的为外泌体。
应更正为:
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2.2 脂肪间充质干细胞的流式细胞学检测 CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,阳性率分别为99.7%,88.9%,96.1%及83.4%,CD34及CD45为阴性表达,阴性率分别为98.7%和92.5%,见图2。
2. 第2654页:
3.第2655页
多种方法均可获得脂肪组织,其中吸脂术能获取大量的脂肪组织[27],McIntosh等[28]表明每毫升吸脂术后的组织中可在单次传代中产生2.5×105个有核细胞,有研究亦证实每毫升吸脂术后组织经分离提取纯化培养后能获得大量脂肪间充质干细胞[29]。不同部位、不同层次的脂肪组织所含脂肪间充质干细胞量不同,更多的脂肪间充质干细胞存在于皮下脂肪中[30]。不同脂肪组织分离出的脂肪间充质干细胞活性也存在差异[31],据报道及预实验结果,实验选用腹部浅层皮下吸脂术后脂肪。脂肪间充质干细胞的分离提取方法多种多样,常见的有酶消化法和组织块贴壁法[32]。成熟的脂肪细胞含有大量的胶原[33],使用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织易于分离成熟的脂肪细胞与脂肪间充质干细胞,可获取较大量的脂肪间充质干细胞。
4.第2655页
使用酶消化法提取的细胞为许多细胞类型的群体,包括血细胞、前脂肪细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、滞留的单核细胞/巨噬细胞、淋巴细胞和脂肪间充质干细胞等[11],需对脂肪间充质干细胞进行鉴定。据目前研究表明脂肪间充质干细胞无单一特定的表面标志物,其与骨髓间充质干细胞表面标志物相似[34],需通过对多种相对特异的表面标志物进行检测来对其进行鉴定。常用的检测方法为流式细胞技术和免疫组织化学技术。CD29存在于红细胞外几乎所有细胞及组织内[35],其阳性高表达可排除红细胞污染。CD44在人间充质干细胞群体的几乎所有细胞中均有表达[36];CD90在各代间充质干细胞中均高表达[37];CD105与CD44相似,也几乎表达于所有人间充质干细胞内[36],此3者均高表达可认定为间充质干细胞。CD34和CD45为造血系统源细胞细胞表面标志物[25,38],其阴性高表达表达,可排除造血干细胞污染。实验使用流式细胞仪检测结果显示CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,CD34,CD45为阴性表达。与以往研究报道相符[8,34],可以在很大程度上认为所提取的细胞为脂肪间充干细胞。
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细胞来源的囊泡外形均呈杯状,杯状形态是区分细胞来源囊泡和大小相似的颗粒有用的特征[5],区分微泡、凋亡小体和外泌体主要在于直径大小,外泌体直径30-100 nm,透射电子显微镜是鉴定外泌体的金标准,是惟一可以同时测定囊泡大小和观察囊泡形态的方法[68]。粒度仪可以检测悬浮颗粒的直径分布[69]。实验透射电子显微镜鉴定的颗粒形态呈杯状,有膜结构,直径(81.225± 22.226) nm,结合粒度仪测定的颗粒直径范围集中于70-100 nm可以初步认为实验使用差速离心法提取的为外泌体。