文题释义：
胚胎干细胞：来源于囊胚内部的细胞团，具有在体外无限增殖(自我更新)的能力，并且可以分化成所有3个胚层的细胞(多能性)，这些特性使得胚胎干细胞在细胞替代疗法、药物研发、再生医学等基础科学和临床研究中具有极其重要的价值。
巨噬细胞迁移抑制因子：是一种多效性细胞因子，广泛表达于多种组织和细胞中，可调控多种细胞的增殖、存活、分化和迁移等生物学过程。
背景：巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是一种具有多效性作用的细胞因子，可以在不同类型干细胞中自分泌并且能调控细胞的增殖、分化和迁移。课题组前期研究证实人胚胎干细胞自分泌MIF，且在培养液中浓度基本固定。然而，MIF是否参与了人胚胎干细胞的存活、增殖和分化尚不清楚。
目的：探究MIF对人胚胎干细胞存活、增殖和分化的作用。
方法：①培养人胚胎干细胞H9，CCK-8法检测并绘制细胞生长曲线，采用酶联免疫吸附法定量检测培养基中MIF水平。②为了明确外源性MIF对人胚胎干细胞存活、增殖的影响，分为：对照组，细胞在干细胞培养基中正常培养；外源性MIF组，在干细胞培养基中分别添加30，100，300 ng/mL的MIF；MIF抑制剂ISO-1组，在干细胞培养基中分别添加2，7，21 μmol/L的ISO-1；MIF+ISO-1组，在不同浓度ISO-1组中分别添加100 ng/mL MIF，采用CCK-8法检测上述各组细胞活力。③为进一步阐明MIF基因对人胚胎干细胞存活、增殖的影响，采用CRISPR-Cas9技术构建MIF敲除的H9细胞系，观察建系情况。④为了明确高浓度MIF对人胚胎干细胞初步分化是否有影响，在培养基中分别添加100 ng/mL MIF和100 ng/mL CXCR4中和抗体，采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫细胞荧光、蛋白质印迹法(Western blot)检测干细胞自我更新因子(KLF4、c-MYC、NANOG、OCT4、SOX2)及分化转录因子(FOXA2、OTX2)的表达水平。
结果与结论：①人胚胎干细胞H9的对数生长期为3-6 d，正常生长的情况下自分泌MIF水平约为20 ng/mL，与细胞量无关；②与对照组相比，添加不同质量浓度MIF对人胚胎干细胞的增殖无影响(P > 0.05)；ISO-1明显抑制人胚胎干细胞的增殖，ISO-1浓度越大，抑制越明显(P < 0.05)；ISO-1中添加MIF可以减少ISO-1的抑制作用(P < 0.05)；③RT-qPCR检测MIF基因敲除约50%后，人胚胎干细胞生长活力显著降低并且无法建系成功；④在培养基中添加100 ng/mL外源性MIF，自我更新转录因子KLF4的mRNA、蛋白及荧光表达水平均下降；分化因子FOXA2的mRNA、蛋白及荧光表达水平均上升；⑤在培养基中添加100 ng/mL CXCR4中和抗体，KLF4的mRNA及蛋白表达水平均上升；FOXA2的mRNA及蛋白表达水平均下降，与MIF组表达趋势相反。综上所述，人胚胎干细胞自分泌的MIF是其存活所必需的；培养基中额外添加MIF并不能促进人胚胎干细胞增殖，但可以使自我更新因子KLF4表达下降，转录因子FOXA2表达上升，为下一步探明MIF对人胚胎干细胞分化的影响及机制提供了线索，MIF-CXCR4轴在其中起到一定的调控作用。
https://orcid.org/0000-0001-5264-2265(黄婷)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
