卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

doi:10.12307/2025.098

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (25): 5403-5413.doi: 10.12307/2025.098

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卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

祝柳慧1，2，张歆悦1，朱洲海2，杨兴隆1，管莹2，刘彬1，2

1昆明医科大学第一附属医院神经内科，云南省昆明市 650032；2烟草与健康联合研究院，云南省昆明市 650106

收稿日期:2024-03-06 接受日期:2024-04-28 出版日期:2025-09-08 发布日期:2024-12-26
通讯作者: 刘彬，硕士，主任医师，硕士生导师，昆明医科大学第一附属医院神经内科，云南省昆明市 650032；烟草与健康联合研究院，云南省昆明市 650106；共同通讯作者：管莹，博士，副研究员，烟草与健康联合研究院，云南省昆明市 650106
作者简介:祝柳慧，女，1998年生，云南省文山州人，汉族，昆明医科大学在读硕士，主要从事神经退行性疾病方面的研究。
基金资助:
云南省应用基础项目(202101AY070001-115)，项目负责人：刘彬；烟草与健康联合研究院开放基金(2021539200340039)，项目负责人：杨兴隆；云南省教育厅科学研究基金项目(2024Y226)，项目负责人：祝柳慧

Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2 inhibits apoptosis of Parkinson’ s disease SH-SY5Y cells by promoting mitochondrial autophagy

Zhu Liuhui1, 2, Zhang Xinyue1, Zhu Zhouhai2, Yang Xinglong1, Guan Ying2, Liu Bin1, 2

1Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650032, Yunnan Province, China; 2Joint Institute of Smoking and Health, Kunming 650106, Yunnan Province, China

Received:2024-03-06 Accepted:2024-04-28 Online:2025-09-08 Published:2024-12-26
Contact: Liu Bin, Master, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650032, Yunnan Province, China; Joint Institute of Smoking and Health, Kunming 650106, Yunnan Province, China; Co-corresponding author: Guan Ying, PhD, Associate researcher, Joint Institute of Smoking and Health, Kunming 650106, Yunnan Province, China
About author:Zhu Liuhui, Master candidate, Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650032, Yunnan Province, China; Joint Institute of Smoking and Health, Kunming 650106, Yunnan Province, China
Supported by:
Applied Basic Research Foundation of Yunnan Province, No. 202101AY070001-115 (to LB); Open Fund of Joint Institute of Smoking and Health, No. 2021539200340039 (to YXL); Yunnan Provincial Education Department Scientific Research Fund Project, No. 2024Y226 (to ZLH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

卷曲螺旋结构域蛋白2：属于卷曲螺旋功能结构域蛋白质家族，与包括帕金森病在内的多种神经退行性疾病相关，对细胞的正常功能维持起重要作用，多数在线粒体中参与调解线粒体代谢并调节呼吸链成分表达，而在应激情况下其转位至细胞核中调控自身以及细胞色素氧化酶等基因的转录。
线粒体自噬：是细胞通过自噬机制选择性清除功能失调或者多余线粒体的一种高度保守的细胞进程，在活性氧应激、营养缺乏、细胞衰老等情况下细胞内线粒体出现去极化损伤，自噬体识别并包裹受损线粒体再与溶酶体结合，促进线粒体内容物的降解，该过程能调整线粒体数目并维持细胞能量代谢的稳定。

摘要
背景：卷曲螺旋结构域蛋白2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2，CHCHD2)能否调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森病中发挥神经保护作用尚未可知。
目的：探讨CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中对PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬发挥的作用及机制。
方法：利用重组质粒转染技术过表达或敲低CHCHD2，用6-羟基多巴胺构建SH-SY5Y细胞帕金森病模型后分对照组、模型组、过表达阴性对照+6-羟基多巴胺组、敲低阴性对照+6-羟基多巴胺组、过表达CHCHD2+6-羟基多巴胺组和敲低CHCHD2+6-羟基多巴胺组。Western blot及RT-qPCR检测CHCHD2的表达；Western blot 检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、MFN1、COXⅣ、DRP1、PINK1、Parkin、TIM23、Bax、Bcl-2及cleaved-caspase3蛋白表达；CCK-8、JC-1和活性氧试剂盒检测细胞活性、线粒体膜电位和活性氧水平，单丹磺酰尸胺染色观察细胞自噬情况，透射电镜观察自噬溶酶体。
结果与结论：①与对照组相比，模型组细胞活性、线粒体膜电位及CHCHD2、PINK1、Parkin蛋白表达降低，活性氧水平、凋亡水平及LC3Ⅰ/Ⅱ、p62蛋白表达升高(P < 0.05)，并观察到自噬溶酶体的存在；②与模型组相比，过表达CHCHD2能降低细胞活性氧水平，升高线粒体膜电位及PINK1、Parkin和MFN1蛋白表达水平，并观察到线粒体自噬溶酶体增多，而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用，并伴有COXⅣ、TIM23和p-DRP1蛋白表达的升高(P < 0.05)；③与模型组相比，过表达CHCHD2能减少细胞凋亡，上调Bcl-2并下调Bax及cleaved-caspase3蛋白的表达，而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用 (P < 0.05)；④结果提示，CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中可以通过促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬改善线粒体功能从而减轻细胞凋亡发挥神经保护作用。

https://orcid.org/0009-0006-2964-6755 (祝柳慧)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 帕金森病, 卷曲螺旋结构域蛋白2, PINK1, Parkin, 线粒体自噬, 线粒体功能, 细胞凋亡, 6-羟基多巴胺, SH-SY5Y细胞

Abstract: BACKGROUND: Whether coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2 (CHCHD2) can regulate the neuroprotective role of PINK1/Parkin-mediated mitochondrial autophagy in Parkinson’s disease remains unknown.
OBJECTIVE: To explore the role and mechanisms of CHCHD2 in the 6-hydroxydopamine-induced Parkinson’s disease cell model in mediating the PINK1/Parkin signaling pathway and its involvement in mitochondrial autophagy.
METHODS: Utilizing recombinant plasmid transfection technology to overexpress or knockdown CHCHD2, SH-SY5Y cells were constructed with a Parkinson’s disease model using 6-hydroxydopamine, and divided into control group, model group, overexpression negative control+6-hydroxydopamine group, knockdown negative control+6-hydroxydopamine group, overexpression CHCHD2+6-hydroxydopamine group, and knockdown CHCHD2+6-hydroxydopamine group. Western blot assay and RT-qPCR were used to detect CHCHD2 expression. Western blot assay was utilized to detect the protein expression of LC3I/II, p62, MFN1, COXIV, DRP1, PINK1, Parkin, TIM23, Bax, Bcl-2, and cleaved-caspase 3. CCK-8 assay, JC-1, and reactive oxygen species assay kits were used to measure cell viability, mitochondrial membrane potential, and reactive oxygen levels. Monodansylcadaverine staining was used to observe cell autophagy. Transmission electron microscopy was used to observe autophagolysosomes.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the control group, cell activity, mitochondrial membrane potential, and the protein expression levels of CHCHD2, PINK1, and Parkin were decreased, and the levels of reactive oxygen species, apoptosis, and LC3I/II and p62 proteins were increased (P < 0.05), and the presence of autophagic lysosomes was observed in the model group. (2) Compared with the model group, overexpression of CHCHD2 could reduce the level of cellular reactive oxygen species, increase the mitochondrial membrane potential, and the expression levels of PINK1, Parkin, and MFN1 proteins, and observed an increase in mitochondrial autolysosomes, and the knockdown of CHCHD2 had the opposite effect with the increase of COXIV, TIM23 and p-DRP1 protein expression (P < 0.05). (3) Compared with the model group, overexpression of CHCHD2 reduced apoptosis, up-regulated Bcl-2, and down-regulated the expression of Bax and cleaved-caspase3 proteins, while knockdown of CHCHD2 had the opposite effect (P < 0.05). (4) The results suggest that CHCHD2 can play a neuroprotective role by promoting PINK1/Parkin-mediated mitochondrial autophagy, improving mitochondrial function, and alleviating apoptosis in 6-hydroxydopamine-induced Parkinson’s disease cell models.

Key words: Parkinson’s disease, coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2, PINK1, Parkin, mitochondrial autophagy, mitochondrial function, cell apoptosis, 6-hydroxydopamine, SH-SY5Y cell

中图分类号:

祝柳慧, 张歆悦, 朱洲海, 杨兴隆, 管莹, 刘彬. 卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(25): 5403-5413.

Zhu Liuhui, Zhang Xinyue, Zhu Zhouhai, Yang Xinglong, Guan Ying, Liu Bin. Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2 inhibits apoptosis of Parkinson’ s disease SH-SY5Y cells by promoting mitochondrial autophagy[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(25): 5403-5413.

图/表（结果） 5

2.1 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞活力受损并发生氧化应激及线粒体自噬 6-OHDA是一种与多巴胺结构相似并能对多巴胺细胞产生毒性的氧化神经毒素，其处理的SH-SY5Y细胞被广泛用作帕金森病的体外模型。如图1A，B所示，与对照组相比，经6-OHDA处理的模型组细胞活性降低(P < 0.001)，增殖速度降低，活性氧水平升高(P < 0.001)。如图1C所示，模型组细胞线粒体膜电位水平明显低于对照组[(0.83±0.05)% vs.(0.95±0.04)%，P < 0.01]。
由于过量的活性氧积累和低线粒体膜电位水平会破坏细胞内稳态并诱导自噬，使用单丹磺酰尸胺染色验证6-OHDA是否可以诱导细胞发生线粒体自噬。如图1D所示，对照组细胞呈现均匀的黄绿色染色，而模型组细胞核碎裂，呈现致密且大小不一的绿色染色颗粒[(0.87±0.03)% vs.(0.05±0.01)%，P < 0.001]。如图1E所示，透射电镜下模型组细胞较对照组细胞中存在大量自噬溶酶体[(8.65±2.67)/视野 vs. (0.20±0.05)/视野，P < 0.001]，证实了线粒体自噬的存在。

2.2 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞中LC3Ⅰ/Ⅱ、p62表达上调及CHCHD2表达下调 鉴于6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞中观察到线粒体自噬现象，进一步分析了线粒体自噬标志物LC3Ⅰ/Ⅱ和p62的表达水平，如果表达水平升高则提示自噬水平降低[25]。如图2A所示，与对照组相比，模型组细胞中LC3Ⅰ/Ⅱ和p62表达水平显著上调(P < 0.001，P < 0.01)。CHCHD2定位于线粒体，在应激时转位至细胞核作为转录因子调控自身和其他蛋白如细胞色素氧化酶的表达[12]，故通过mRNA和蛋白水平观察6-OHDA处理后的细胞质与细胞核中CHCHD2的表达变化。如图2B，C所示，与对照组相比，模型组细胞胞质和胞核中CHCHD2的mRNA表达明显下调(P < 0.001)；如图2D所示，Western blot 检测结果也同样显示模型组细胞质和细胞核中CHCHD2蛋白表达较对照组均显著下调(P < 0.001，P < 0.05)。

2.3 过表达或敲低CHCHD2对6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞中活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡的影响 上述结果表明CHCHD2参与了自噬过程，为此在SH-SY5Y细胞中过表达CHCHD2或敲低CHCHD2的表达，进一步探究该蛋白在线粒体自噬中的作用。如图3A，B所示，过表达CHCHD2+6-OHDA组活性氧水平低于模型组(P < 0.001)，而敲低CHCHD2+6-OHDA组活性氧水平高于模型组(P < 0.001)。如图3C，D所示，过表达CHCHD2+6-OHDA组线粒体膜电位水平显著高于模型组(P < 0.001)，敲低CHCHD2+6-OHDA组线粒体膜电位水平低于模型组(P < 0.001)。此外，如图3E，F所示，CHCHD2过表达显著降低6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞凋亡比例(P < 0.001)，而CHCHD2敲低会促进相同条件下的细胞凋亡(P < 0.001)。

2.4 过表达或敲低CHCHD2对6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞线粒体活性及相关蛋白表达的影响 线粒体凋亡途径是触发细胞凋亡的重要通路之一[26]，使用Mito Tracker ? Red CMXRos探针观察过表达或敲低CHCHD2后6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞线粒体的活性。如图4A所示，过表达CHCHD2 + 6-OHDA组[(89.25±3.33)%]和对照组[(86.65±2.50)%]的相对荧光强度高于模型组[(70.46±2.18)%]，差异有显著性意义(P < 0.01)，敲低CHCHD2+6-OHDA组[(64.67±2.55)%]的相对荧光强度低于模型组[(70.46±2.18)%]，差异有显著性意义(P < 0.01)。过表达阴性对照+6-OHDA、敲低阴性对照+6-OHDA及模型组的相对荧光强度相近(P > 0.05)。如图4B所示，与对照组相比，模型组细胞中TIM23和p-DRP1的表达上调(P < 0.001，P < 0.05)，MFN1的表达下调(P < 0.001)；在6-OHDA处理的细胞中，过表达CHCHD2虽然对线粒体相关蛋白COXⅣ、TIM23和p-DRP1的表达没有明显影响(P > 0.05)，但MFN1的表达显著上调(P < 0.001)；而敲低CHCHD2后COXⅣ、TIM23和p-DRP1的表达显著上调(P < 0.01)，MFN1的表达显著下调(P < 0.05)。

2.5 过表达或敲低CHCHD2对6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞中凋亡蛋白及PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的影响 如前所述，6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞发生线粒体自噬，并在mRNA和蛋白水平抑制CHCHD2的表达。如图5A所示，透射电镜观察CHCHD2过表达促进线粒体自噬，可见大量自噬溶酶体(红色箭头)，而敲低CHCHD2并用6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞中自噬溶酶体的数量较模型组少。PINK1/Parkin通路是线粒体自噬的重要介导者，如图5B所示，模型组PINK1和Parkin的表达较对照组均有所下调，提示6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型中此通路介导的线粒体自噬受损(P < 0.001)；与模型组比较，过表达CHCHD2+6-OHDA组细胞中PINK1和Parkin表达显著上调(P < 0.01)；而敲低CHCHD2+6-OHDA组细胞中PINK1和Parkin显著下调(P < 0.01)。此外，研究表明PINK1/Parkin介导的线粒体自噬可以抑制大鼠大脑皮质神经元凋亡而发挥重要的神经保护作用[26]，因此检测了凋亡相关蛋白的表达以观察凋亡水平的变化，结果显示，Bcl-2的表达与PINK1和Parkin在相同条件下的表达趋势相似，而CHCHD2过表达时Bax和cleaved-caspase3的表达与模型组相比显著下调，在CHCHD2敲低时显著上调(P < 0.01)。

参考文献

[1] YE H, ROBAK LA, YU M, et al. Genetics and Pathogenesis of Parkinson’s Syndrome. Annu Rev Pathol. 2023;18:95-121.
[2] BHIDAYASIRI R, KALIA LV, BLOEM BR. Tackling Parkinson’s Disease as a Global Challenge. J Parkinsons Dis. 2023;13(8):1277-1280.
[3] KWON DK, KWATRA M, WANG J, et al. Levodopa-Induced Dyskinesia in Parkinson’s Disease: Pathogenesis and Emerging Treatment Strategies. Cells. 2022;11(23):3736.
[4] MALPARTIDA AB, WILLIAMSON M, NARENDRA DP, et al. Mitochondrial Dysfunction and Mitophagy in Parkinson’s Disease: From Mechanism to Therapy. Trends Biochem Sci. 2021;46(4):329-343.
[5] FUNAYAMA M, OHE K, AMO T, et al. CHCHD2 mutations in autosomal dominant late-onset Parkinson’s disease: a genome-wide linkage and sequencing study. Lancet Neurol. 2015;14(3):274-282.
[6] SHI CH, MAO CY, ZHANG SY, et al. CHCHD2 gene mutations in familial and sporadic Parkinson’s disease. Neurobiol Aging. 2016;38: 217.e9-217.e13.
[7] YANG N, ZHAO Y, LIU Z, et al. Systematically analyzing rare variants of autosomal-dominant genes for sporadic Parkinson’s disease in a Chinese cohort. Neurobiol Aging. 2019;76:215.e1-215.e7.
[8] JANSEN IE, BRAS JM, LESAGE S, et al. CHCHD2 and Parkinson’s disease. Lancet Neurol. 2015;14(7):678-679.
[9] KOSCHMIDDER E, WEISSBACH A, BRÜGGEMANN N, et al. A nonsense mutation in CHCHD2 in a patient with Parkinson disease. Neurology. 2016;86(6):577-579.
[10] IKEDA A, MATSUSHIMA T, DAIDA K, et al. A novel mutation of CHCHD2 p.R8H in a sporadic case of Parkinson’s disease. Parkinsonism Relat Disord. 2017;34:66-68.
[11] LEE RG, SEDGHI M, SALARI M, et al. Early-onset Parkinson disease caused by a mutation in CHCHD2 and mitochondrial dysfunction. Neurol Genet. 2018;4(5):e276.
[12] ZHOU W, MA D, TAN EK. Mitochondrial CHCHD2 and CHCHD10: Roles in Neurological Diseases and Therapeutic Implications. Neuroscientist. 2020;26(2):170-184.
[13] ZHOU W, MA D, SUN AX, et al. PD-linked CHCHD2 mutations impair CHCHD10 and MICOS complex leading to mitochondria dysfunction. Hum Mol Genet. 2019;28(7):1100-1116.
[14] ARAS S, BAI M, LEE I, et al. MNRR1 (formerly CHCHD2) is a bi-organellar regulator of mitochondrial metabolism. Mitochondrion. 2015;20:43-51.
[15] LU Y, LI Z, ZHANG S, et al. Cellular mitophagy: Mechanism, roles in diseases and small molecule pharmacological regulation. Theranostics. 2023;13(2):736-766.
[16] MA KY, FOKKENS MR, REGGIORI F, et al. Parkinson’s disease-associated VPS35 mutant reduces mitochondrial membrane potential and impairs PINK1/Parkin-mediated mitophagy. Transl Neurodegener. 2021; 10(1):19.
[17] MAGALHÃES JD, CARDOSO SM. Mitochondrial signaling on innate immunity activation in Parkinson disease. Curr Opin Neurobiol. 2023; 78:102664.
[18] XU Y, ZHI F, MAO J, et al. δ-opioid receptor activation protects against Parkinson’s disease-related mitochondrial dysfunction by enhancing PINK1/Parkin-dependent mitophagy. Aging (Albany NY). 2020;12(24):25035-25059.
[19] GLINKA Y, GASSEN M, YOUDIM MB. Mechanism of 6-hydroxydopamine neurotoxicity. J Neural Transm Suppl. 1997;50:55-66.
[20] LIN CY, TSAI CW. PINK1/parkin-mediated mitophagy pathway is related to neuroprotection by carnosic acid in SH-SY5Y cells. Food Chem Toxicol. 2019;125:430-437.
[21] DI RITA A, D’ACUNZO P, SIMULA L, et al. AMBRA1-Mediated Mitophagy Counteracts Oxidative Stress and Apoptosis Induced by Neurotoxicity in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells. Front Cell Neurosci. 2018;12:92.
[22] WEI L, DING L, MO MS, et al. Wnt3a protects SH-SY5Y cells against 6-hydroxydopamine toxicity by restoration of mitochondria function. Transl Neurodegener. 2015;4:11.
[23] YIN X, XIA J, SUN Y, et al. CHCHD2 is a potential prognostic factor for NSCLC and is associated with HIF-1a expression. BMC Pulm Med. 2020;20(1):40.
[24] WEI JP, WEN W, DAI Y, et al. Drinking water temperature affects cognitive function and progression of Alzheimer’s disease in a mouse model. Acta Pharmacol Sin. 2021;42(1):45-54.
[25] XIE L, GU Q, WU X, et al. Activation of LXRs Reduces Oxysterol Lipotoxicity in RPE Cells by Promoting Mitochondrial Function. Nutrients. 2022;14(12):2473.
[26] WEN S, WANG L, ZHANG C, et al. PINK1/Parkin-mediated mitophagy modulates cadmium-induced apoptosis in rat cerebral cortical neurons. Ecotoxicol Environ Saf. 2022;244:114052.
[27] KINET R, DEHAY B. Pathogenic Aspects and Therapeutic Avenues of Autophagy in Parkinson’s Disease. Cells. 2023;12(4):621.
[28] SOOKHAKLARI R, GERAMIZADEH B, ABKAR M, et al. The neuroprotective effect of BSA-based nanocurcumin against 6-OHDA-induced cell death in SH-SY5Y cells. Avicenna J Phytomed. 2019;9(2):92-100.
[29] ZHANG HY, JIANG YC, LI JR, et al. Neuroprotective effects of insulin-like growth factor-2 in 6-hydroxydopamine-induced cellular and mouse models of Parkinson’s disease. Neural Regen Res. 2023;18(5):1099-1106.
[30] IKEDA A, IMAI Y, HATTORI N. Neurodegeneration-associated mitochondrial proteins, CHCHD2 and CHCHD10-what distinguishes the two? Front Cell Dev Biol. 2022;10:996061.
[31] MENG H, YAMASHITA C, SHIBA-FUKUSHIMA K, et al. Loss of Parkinson’s disease-associated protein CHCHD2 affects mitochondrial crista structure and destabilizes cytochrome c. Nat Commun. 2017;8:15500.
[32] LI J, YANG D, LI Z, et al. PINK1/Parkin-mediated mitophagy in neurodegenerative diseases. Ageing Res Rev. 2023;84:101817.
[33] WANG S, LONG H, HOU L, et al. The mitophagy pathway and its implications in human diseases. Signal Transduct Target Ther. 2023; 8(1):304.
[34] JIANG Y, KRANTZ S, QIN X, et al. Caveolin-1 controls mitochondrial damage and ROS production by regulating fission - fusion dynamics and mitophagy. Redox Biol. 2022;52:102304.
[35] JI W, REN Y, WEI X, et al. Ischemic stroke protected by ISO-1 inhibition of apoptosis via mitochondrial pathway. Sci Rep. 2023;13(1):2788.
[36] AKABANE S, WATANABE K, KOSAKO H, et al. TIM23 facilitates PINK1 activation by safeguarding against OMA1-mediated degradation in damaged mitochondria. Cell Rep. 2023;42(5):112454.
[37] YAPA NMB, LISNYAK V, RELJIC B, et al. Mitochondrial dynamics in health and disease. FEBS Lett. 2021;595(8):1184-1204.
[38] JIANG T, WANG Y, WANG X, et al. CHCHD2 and CHCHD10: Future therapeutic targets in cognitive disorder and motor neuron disorder. Front Neurosci. 2022;16:988265.
[39] ZHANG HT, MI L, WANG T, et al. PINK1/Parkin-mediated mitophagy play a protective role in manganese induced apoptosis in SH-SY5Y cells. Toxicol In Vitro. 2016;34:212-219.
[40] GANGULY U, BANERJEE A, CHAKRABARTI SS, et al. Interaction of α-synuclein and Parkin in iron toxicity on SH-SY5Y cells: implications in the pathogenesis of Parkinson’s disease. Biochem J. 2020;477(6): 1109-1122.

引言

帕金森病是全球第二大神经退行性病变，亦是世界范围内患病率增长最快的神经系统疾病[1]，随着人口老龄化，其造成的社会负担不断加剧[2]。现阶段帕金森病的临床治疗依赖于左旋多巴，但其仅能控制症状而难以阻止黑质致密部多巴胺能神经元进行性死亡的病理进程，长期高剂量应用还会产生严重的运动并发症[3]，因此深入探索疾病机制以寻找新的治疗靶点尤为重要。研究表明，帕金森病是遗传、环境和衰老因素长期共同作用的结果，在众多发病机制中，线粒体功能障碍及异常的线粒体自噬是帕金森病发生的重要因素[4]，与该机制相关的突变体基因也得到了广泛研究。
自从2015年首次发现帕金森病患者存在编码线粒体相关的卷曲螺旋结构域蛋白2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2，CHCHD2)基因突变[5]，此后陆续有研究在亚洲帕金森病患者中发现了Thr61Ile、Arg145Gln[5]、Pro2Leu[6]、Ala79Ser突变[7]，在欧洲帕金森病患者中发现了Ala32Thr、Pro34Leu、Ile80Val[8]、Gln126X[9]、Arg8His[10]、Ala71Pro突变等[11]。CHCHD2定位于线粒体，参与维持线粒体正常功能[12]，敲除CHCHD2后细胞线粒体嵴扭曲，线粒体内膜组织系统不稳定，导致线粒体功能障碍[13]，同时细胞内活性氧水平显著升高[14]。以上提示CHCHD2通过维持线粒体稳态从而发挥保护神经的积极作用。线粒体自噬是细胞抵御外界刺激和维持线粒体功能稳定的自我保护机制，可以在不同的应激条件下通过E3泛素连接酶(Parkin)依赖或非依赖途径发生，于不同的细胞环境中维持线粒体稳态，其中PTEN诱导激酶1(PTEN-induced putative kinase 1，PINK1)/Parkin途径被认为是最常见也是最重要的线粒体自噬途径，能有效清除受损线粒体[15]。5%-10%的帕金森病患者是由PINK1和Parkin等基因变异引起的，帕金森病相关突变体降低线粒体膜电位并损害PINK1/Parkin介导的线粒体自噬[16]，PINK1/Parkin轴受损后，片段化、受损的线粒体积聚在细胞内导致神经元损伤[17]；此外，亦有研究表明增强PINK1/Parkin介导的线粒体自噬能预防帕金森病相关线粒体功能障碍[18]。
CHCHD2虽为线粒体相关基因，也被充分证明与帕金森病相关，然而其是否通过促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森病中发挥神经保护作用尚未可知。6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA )能抑制线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅳ的活性而常被用于与线粒体功能相关的帕金森病机制研究[19-21]，这与沉默CHCHD2表达后的线粒体损伤表现有所重叠[12]，因而作者利用6-OHDA构建帕金森病SH-SY5Y细胞模型，探索CHCHD2与PINK1/Parkin介导的线粒体自噬之间的关联机制，拟为帕金森病的机制研究及治疗靶点提供新思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照细胞实验。
1.2 时间及地点 实验于2022年9月至2023年9月在昆明医科大学科技成果孵化中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y) (Cat# iCell-h187)购自上海iCell生物科学公司。

1.3.2 主要试剂与仪器 SH-SY5Y专用细胞完全培养基(Cat# iCell-h187001b)购自上海iCell生物科学公司；ribo FECTTM CP转染试剂购自广州RiBoBio公司；6-OHDA购自美国Sigma公司；转染病毒由广州Cyagen生物科学公司构建；CCK-8试剂盒(Cat#GK10001)购于美国GlpBio公司；活性氧检测试剂盒(Cat#S0033S)和JC-1试剂盒(Cat#C2006)购于上海碧云天生物技术有限公司；电镜固定液(Cat#G1102)购于武汉Servicebio公司；Nuclear/Cytosol Fractionation Kit (Cat#PH1466)购于福州Phygene公司；UNlQ-10 Column Trizol Total RNA Isolation Kit (Cat#B511321)购于上海生工生物工程股份有限公司；SuperMix (Cat#AE31102)购于北京转基因生物技术公司；二喹啉甲酸试剂盒(Cat#PC0020)、增强型化学发光试剂盒(Cat#PE0010)及单丹磺酰尸胺染色液(Cat#G0170)购于Solarbio公司；脑立体定向仪(中国成都泰盟)；荧光显微镜(日本东京奥林巴斯)；流式细胞仪(BD，Lake Franklin，NJ，USA)等；抗体信息见表1。

1.4 实验方法
1.4.1 细胞培养、干预及分组 SH-SY5Y细胞培养于37 ℃、体积分数5% CO2的湿润培养箱中，细胞生长期间每3 d更换1次SH-SY5Y专用培养基，待细胞融合度达到80%后将细胞进行1∶2传代，24 h后待细胞贴壁进行后续干预操作。第一部分先将SH-SY5Y细胞根据是否经6-OHDA (100 μmol/L)处理24 h分为模型组和对照组[22]。第二部分按照说明书操作，将过表达及敲低CHCHD2的重组质粒转染SH-SY5Y细胞，除对照细胞系外，所有转染细胞系均在含有6-OHDA(100 μmol/L)的培养基中培养[22]。根据不同处理方法将细胞分为对照组(正常培养不做任何处理)、模型组(6-OHDA处理24 h)、过表达阴性对照+6-OHDA组(成功构建过表达阴性对照细胞后+6-OHDA处理24 h)、敲低阴性对照+6-OHDA组(成功构建敲低阴性对照细胞后+6-OHDA处理24 h)、过表达CHCHD2+6-OHDA组(成功构建过表达CHCHD2细胞后+6-OHDA处理24 h)和敲低CHCHD2+模型组(成功构建敲低CHCHD2细胞后+6-OHDA处理24 h)。
1.4.2 CCK-8检测细胞活力 根据说明书，使用CCK-8试剂盒评估细胞活力。SH-SY5Y细胞接种于96孔板，每孔加细胞悬液100 μL，约1×104 个细胞，在37 ℃、体积分数5% CO2培养箱培养24 h。根据参考文献[22]，模型组加入由SH-SY5Y专用完全培养基配制而成的6-OHDA(100 μmol/L)，对照组则加入对应溶剂，并设置空白对照孔，然后分别在培养箱中培养0，12，24，36，48 h，每孔加入10 μL CCK-8溶液，孵育2 h，用酶标仪测定450 nm处的吸光度值，初步观察6-OHDA(100 μmol/L)对细胞活力的影响，评估模型组和对照组细胞活力的差异以便展开后续实验。
1.4.3 细胞内活性氧水平的测定 将SH-SY5Y细胞接种到96孔板中，每孔约1×104 个细胞，在培养箱中培养24 h待其贴壁后，参照1.4.1中第一部分和第二部分的分组要求处理细胞，然后加入2′，7′-二氯荧光素二乙酸酯，按照活性氧检测试剂盒说明书，在37 ℃孵育20 min，再用DMEM/F12基础培养基洗涤细胞3次，最后用荧光显微镜检测488 nm和525 nm激发波长下荧光强度从而反映细胞内活性氧水平。
1.4.4 线粒体膜电位的测定 采用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位。将SH-SY5Y细胞以1×105个/孔密度接种于6孔板中，按照1.4.1中第一部分和第二部分分组要求处理SH-SY5Y细胞，收集处理后的细胞并重悬于SH-SY5Y专用完全培养基，按照JC-1试剂盒说明书加入提前配置好的JC-1染色工作液，37 ℃孵育20 min，然后用JC-1缓冲液漂洗细胞，再使之重悬于2 mL DMEM/F12基础培养基中，最后上流式细胞仪检测。
1.4.5 单丹磺酰尸胺染色检测自噬发生情况 将SH-SY5Y细胞以1×105个/孔密度接种于6孔板中，参照1.4.1中第一部分对照组和模型组分组要求处理SH-SY5Y细胞，收集处理后的细胞重悬于洗涤缓冲液中，调整细胞悬液浓度为1×109 L-1，取90 μL细胞悬液与10 μL单丹磺酰尸胺染色液混合，室温避光静置30 min，离心收集细胞并用洗涤缓冲液洗涤2次，再用收集缓冲液重悬细胞，然后在荧光显微镜(激发滤光片波长355 nm，阻断滤光片波长512 nm)下观察染色情况并拍照。
1.4.6 透射电子显微镜观察自噬溶酶体 将SH-SY5Y细胞以1×105个/孔密度接种于6孔板中，按照1.4.1中第一部分和第二部分分组要求处理SH-SY5Y细胞后，吸去培养液，加入电镜固定液固定细胞，然后对细胞进行脱水、包埋、切片、醋酸铀和柠檬酸铅染色，在80 kV的透射电子显微镜下观察。每个样本在20 000倍放大倍数下的3个视野中计数自噬溶酶体的数量，取平均值。

1.4.7 RT-qPCR检测CHCHD2的表达 将SH-SY5Y细胞以1×105个/孔密度接种于6孔板中，按照1.4.1中第一部分分组要求处理SH-SY5Y细胞，根据制造商的说明书使用Nuclear/Cytosol Fractionation Kit分离细胞核和细胞质，然后使用UNlQ-10 Column Trizol Total RNA Isolation Kit从细胞核和细胞质组分中提取总RNA，随后将Easyscript®One Step gDNA removal and cDNA synthesis SuperMix加入到分离的RNA中合成cDNA，混合物在25 ℃孵育10 min，42 ℃孵育15 min，85 ℃加热5 s，置于-20 ℃保存。采用2-ΔΔCt值计算CHCHD2 mRNA在细胞核和细胞质中的相对表达量，每个样品重复3次。引物序列见表2。

1.4.8 Western blot 检测与线粒体自噬和线粒体功能相关蛋白的表达 将SH-SY5Y细胞以1×105个/孔密度接种于6孔板中，按照1.4.1中第一部分和第二部分分组要求处理SH-SY5Y细胞，用含有1 mmol/L苯甲基磺酰氟的放射性免疫共沉淀裂解液裂解细胞30 min，将裂解液离心后使用二喹啉甲酸试剂盒测定上清液样品中的蛋白浓度。通过电泳( 80 V 30 min和120 V 70 min)，在适宜浓度的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶上分离与线粒体自噬、线粒体功能及细胞凋亡相关的靶蛋白。电泳后将蛋白转移到PVDF膜(300 mA 60 min)上，用5%脱脂牛奶室温封闭2 h，而后将膜与以下抗体在4 ℃孵育过夜：抗兔或鼠Bax、PINK1、Parkin、TIM23、DRP1、CHCHD2、Bcl-2、cleaved-caspase3、COXⅣ、MFN1、p-DRP1、Lamin B1、p62、LC3、GAPDH(抗体稀释配比详见表1)。次日经TBST洗涤后，将膜与辣根过氧化物酶标记的抗兔或抗鼠抗(抗体稀释配比详见表1)在室温下孵育1 h，使用增强型化学发光试剂盒于ECL成像分析仪器中进行显影，用Quantity One软件分析蛋白条带的吸光度值。
1.5 主要观察指标 ①CHCHD2、PINK1/Parkin信号通路、线粒体及自噬相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平；②细胞线粒体膜电位变化；③细胞活性氧水平；④细胞自噬发生情况；⑤自噬溶酶体数量。
1.6 统计学分析 所有数据均以x±s表示。采用SPSS 19.0 (IBM，Armonk，NY，USA)统计软件进行分析。采用非参数t检验分析对照组和模型组之间的差异，对照组、模型组、过表达阴性对照+6-OHDA组、敲低阴性对照+6-OHDA组、过表达CHCHD2+6-OHDA组和敲低CHCHD2+6-OHDA组之间的差异采用单因素方差分析，两两比较采用Tukey事后检验。P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过昆明医科大学公共卫生学院生物统计学专家审核。

讨论

帕金森病是一种常见的以黑质区多巴胺能神经元进行性、选择性死亡为特征的神经退行性疾病，其病理特征还包括纹状体多巴胺耗竭以及异常Alpha突触核蛋白沉积在残存的神经元胞浆中等表现[27]。在许多用于构建帕金森病模型的有毒物质(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶、鱼藤酮、百草枯、6-OHDA等)中，由于6-OHDA在结构上与多巴胺相似，其羟基导致多巴胺能细胞产生毒性，被认为是最有吸引力的造模药物[28]。6-OHDA是数十年前在帕金森病患者中发现的一种氧化神经毒素，易形成自由基，抑制线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅳ的活性[19，29]，故而基于6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞的帕金森病体外模型被广泛应用于帕金森病的机制研究，尤其应用于与线粒体自噬相关的研究。该实验发现与未处理的对照组相比，6-OHDA处理后的SH-SY5Y细胞增殖速度变慢，表现出更高的活性氧水平和细胞凋亡率、更低的线粒体膜电位和线粒体活性，并出现线粒体相关蛋白的异常表达；更重要的是，在帕金森病模型细胞中观察到了线粒体自噬相关溶酶体的存在。以上结果提示，6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型存在明显的线粒体功能障碍，并存在线粒体自噬。此外，CHCHD2以及介导线粒体自噬的PINK1和Parkin的表达在模型组细胞中均出现下调，同时，LC3Ⅰ/Ⅱ及p62蛋白表达上调，表明线粒体自噬受损，且提示PINK1/Parkin介导的线粒体自噬或许与CHCHD2有关。
CHCHD2属于卷曲螺旋功能结构域蛋白质家族，与线粒体有着密切的联系，并与帕金森病、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病等多种神经退行性疾病相关[30]。研究发现，敲除CHCHD2基因的果蝇表现出明显的帕金森病样病理，如线粒体呼吸受损和氧化应激增加等效应[31]，说明CHCHD2的正常表达对维持线粒体功能有关键作用。PINK1/Parkin轴亦在维持线粒体稳态中发挥重要作用，并参与包括帕金森病在内的多种神经退行性病变的生理病理机制[32]。在生理条件下，PINK1不断转移到线粒体内膜上，随后被清除，当线粒体膜电位受损时，PINK1进入线粒体内膜的路径被阻断，导致PINK1聚集在线粒体外膜并募集Parkin使之磷酸化，活化的Parkin使线粒体膜蛋白发生泛素化，促进线粒体自噬以清除受损线粒体[15，33]。CHCHD2与PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的关系近年来引起了研究者们的关注，MENG等[31]发现CHCHD2缺失并没有加重由PINK1和Parkin缺失导致的线粒体缺陷，而PINK1和Parkin的过表达导致缺失CHCHD2果蝇中线粒体的完整性破坏。此研究发现在6-OHDA处理的SH-SY5Y细胞帕金森病模型中，CHCHD2过表达能增强细胞线粒体活性，增加线粒体膜电位，降低活性氧水平，并减少细胞凋亡，证明了CHCHD2在此帕金森病模型中发挥维持线粒体稳态的作用。研究表明，线粒体稳态的维持离不开正常的线粒体吞噬和稳定的线粒体动力学的关键作用[34]。此研究发现6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型中PINK1和Parkin的表达均明显下调，该通路介导的线粒体自噬显著受损，而CHCHD2过表达能促进PINK1、Parkin蛋白的表达，产生大量自噬溶酶体，敲低CHCHD2后这2个蛋白表达较模型组进一步下调，且自噬溶酶体减少，另外还伴有COXIV和TIM23蛋白的上调，证明了CHCHD2对PINK1/Parkin介导的线粒体自噬有直接调控作用，未来研究可在更多层面进行相关验证。COXⅣ作为定位在线粒体内膜的细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ，是使线粒体通过氧化呼吸链产生能量的关键酶[35]，TIM23为一种线粒体转位酶，有激活和保护PINK1的作用[36]，这两个线粒体相关蛋白的升高，或许是一种对抗线粒体损伤的代偿反应，具体机制有待进一步探索。另外，磷酸化动力蛋白相关蛋白1(p-DRP1)和线粒体融合蛋白1(MFN1)作为线粒体动力学的关键蛋白亦成为观察指标，其参与的线粒体分裂和融合机制与线粒体稳态密切相关[37]。研究发现，6-OHDA处理后的p-DRP1蛋白表达上调，MFN1蛋白表达下调，表明6-OHDA诱导的帕金森病模型细胞中线粒体分裂增强而融合降低，其动态平衡遭到破坏；敲低CHCHD2后p-DRP1蛋白表达较模型组增加，MFN1蛋白表达显著降低，提示线粒体动力学进一步遭到破坏；而过表达CHCHD2虽然对p-DRP1蛋白表达没有明显影响，但能使MFN1蛋白表达显著增加，提示CHCHD2可以部分逆转6-OHDA导致的线粒体融合抑制。结果表明，CHCHD2能促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬，其正常表达对于线粒体稳态有着重要作用，CHCHD2表达水平的升高能在一定程度上恢复6-OHDA诱导的帕金森病细胞模型中线粒体融合功能；此外，作者认为线粒体相关蛋白的表达变化不是由某种单一的原因引起，以上线粒体自噬和线粒体动力学相关蛋白的表达改变提示其与线粒体数量变化有关，而CHCHD2在细胞质与细胞核的表达变化也提示线粒体相关蛋白的表达变化可能由线粒体数量改变以外的其他原因引起，如核内或者是线粒体内转录水平的改变等。结果初步证明PINK1/Parkin能够识别并补偿CHCHD2缺失引起的线粒体功能障碍，并验证了CHCHD2对PINK1/Parkin信号通路的直接调控作用。研究表明，CHCHD2能够抑制细胞凋亡[38]，在该研究中同样观察到CHCHD2过表达后能够显著减轻凋亡细胞比例，并能够促进Bcl-2蛋白的表达，同时抑制Bax和cleaved-caspase3蛋白的表达，提示CHCHD2能够抑制细胞凋亡发挥神经保护作用。值得注意的是，敲低Parkin表达能够抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞线粒体自噬，并加重细胞凋亡[39]；另有研究表明，PINK1/Parkin介导的线粒体自噬能减轻镉诱导的大鼠大脑皮质神经元凋亡[26]，提示CHCHD2减轻细胞凋亡的作用与CHCHD2增强PINK1/Parkin介导的线粒体自噬有一定关联。此外，Parkin不仅对线粒体自噬有重要作用，还可以通过泛素化和蛋白酶体途径来调节许多蛋白质的降解，如Alpha突触核蛋白等[40]，故CHCHD2在蛋白质降解中的作用有待进一步研究。
综上所述，CHCHD2可以调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬，调节线粒体相关蛋白的表达水平，增强线粒体活性和线粒体膜电位，降低活性氧水平，抑制细胞凋亡。该研究为探索线粒体自噬在神经退行性疾病中的作用和寻找潜在的药物靶点提供了新的视角。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2 inhibits apoptosis of Parkinson’ s disease SH-SY5Y cells by promoting mitochondrial autophagy

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[1]	李加根, 陈跃平, 黄柯琪, 陈尚桐, 黄川洪. 线粒体自噬视域下的类风湿关节炎：多机器学习算法构建预测模型及验证并免疫调控分析[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(在线): 1-15.
[2]	尹路, 蒋川锋, 陈俊杰, 易明, 王子赫, 石厚银, 汪国友, 沈骅睿. 沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1541-1547.
[3]	李花园, 李春, 刘君伟, 王亭, 李龙, 武永利. 温针灸干预慢性疲劳综合征大鼠骨骼肌PINK1/Parkin通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1618-1625.
[4]	朱汉民, 王松, 肖文琳, 张文静, 周茜, 何烨, 李微, . 线粒体自噬调控骨代谢[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1676-1683.
[5]	万玲玲, 吴梦滢, 张宇骄, 罗青清. 炎性因子干扰素γ以焦亡途径影响人血管平滑肌细胞的迁移和凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(7): 1422-1428.
[6]	贺光辉, 原杰, 柯燕琴, 丘小婷, 张晓玲. Hemin调控小鼠软骨细胞氧化应激的线粒体途径[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1183-1191.
[7]	何波, 陈文, 马岁录, 何志军, 宋渊, 李金鹏, 刘涛, 魏晓涛, 王威威, 谢婧. 皮瓣缺血再灌注损伤的发病机制及治疗进展[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1230-1238.
[8]	兰双笠, 向飞帆, 邓光慧, 肖喻琨, 阳运康, 梁杰. 柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(5): 888-898.
[9]	逯冉冉, 周旭, 张利杰, 杨新玲. 富马酸二甲酯减轻帕金森病模型鼠神经损伤的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(5): 989-994.
[10]	张晓宇, 韦善文, 方佳炜, 倪莉. 普鲁士蓝纳米粒子抗氧化恢复退变髓核细胞线粒体功能[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(34): 7318-7325.
[11]	谢铱子, 林雪莹, 张欣欣, 黄秀芳, 詹少锋, 江勇, 蔡彦. 线粒体自噬在特发性肺纤维化中的生物学机制[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(31): 6708-6716.
[12]	康林之, 刘振帅, 魏佳旭, 常娜, 朱大诚. 盐酸青藤碱抑制急性T淋巴细胞白血病CEM细胞株的作用及转录组学分析[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(31): 6674-6680.
[13]	苏琴, 贾思玮, 郭敏芳, 孟涛, 李雁冰, 穆秉桃, 宋丽娟, 马存根, 尉杰忠. 枸杞多糖干预β-淀粉样蛋白1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤：线粒体自噬的保护作用[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(31): 6688-6696.
[14]	林书倩, 赵玺龙, 高景, 潘兴华, 李自安, 阮光萍. 干扰和过表达端粒酶卡哈尔体蛋白1小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性对比[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(31): 6616-6624.
[15]	潘玉, 赵刃峰, 李兴平, 张成栋, 匙峰, 蒲超, 罗栩伟, 肖东琴. 铁过载诱导成骨前体细胞铁死亡并抑制成骨分化[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(30): 6381-6390.