关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及评估

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.22.005

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (22): 3470-3475.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.22.005

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关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及评估

肖统光^1，2，郝春香³，荆晓光²，刘雪剑²，郭岗岗²，杨建华²，郭全义¹

¹解放军总医院骨科研究所，北京市 100853；²佳木斯大学，黑龙江省佳木斯市 154007；³解放军总医院，北京市 100853

收稿日期:2017-05-26 出版日期:2017-08-08 发布日期:2017-09-01
通讯作者: 杨建华，教授，佳木斯大学，黑龙江省佳木斯市 154007
作者简介:肖统光，男，1985年生，安徽省界首市人，汉族，佳木斯大学在读硕士，主要从事关节软骨再生方向的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81472092)；国家高技术发展研究计划(863计划)(2012AA020502)

Preparation and evaluation of an articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel composite scaffold

Xiao Tong-guang^1,², Hao Chun-xiang³, Jing Xiao-guang², Liu Xue-jian², Guo Gang-gang², Yang Jian-hua², Guo Quan-yi¹

¹Institute of Orthopaedics, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China;²Jiamusi University, Jiamusi 154007, Heilongjiang Province, China; ³Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

Received:2017-05-26 Online:2017-08-08 Published:2017-09-01
Contact: Yang Jian-hua, Professor, Jiamusi University, Jiamusi 154007, Heilongjiang Province, China
About author:Xiao Tong-guang, Studying for master’s degree, Institute of Orthopaedics, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China; Jiamusi University, Jiamusi 154007, Heilongjiang Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81472092; the National High-Tech Research and Development Project of China (863 Program), No. 2012AA020502

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

细胞外基质：是由动物细胞合成并分泌到胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要是一些多糖和蛋白，或蛋白聚糖，这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构、调节组织的发生和细胞的生理活动。细胞外基质是动物组织的一部分，不属于任何细胞，它决定结缔组织的特性，对于一些动物组织的细胞具有重要作用。

脐带Wharton胶：脐带包括2条动脉和1条静脉，在动脉和静脉之间有特殊的胚胎黏液状结缔组织，这种特殊的黏液状组织被称为脐带Wharton胶，富含透明质酸、糖胺多糖及胶原等、成分与天然软骨细胞外基质类似。

背景：软骨组织工程主要包括种子细胞、支架材料、细胞因子及生物反应器等，其中支架材料是构建组织工程软骨的关键环节。

目的：制备关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架，评估其理化特性及细胞相容性。

方法：采用物理法分别制备猪关节软骨细胞外基质及人脐带Wharton胶，然后以冻融干燥法制备关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架，检测支架的孔隙率、吸水率、组织成分及纵向压缩弹性模量，并进行组织学染色。将关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架与兔软骨细胞共培养7 d，进行扫描电镜观察、活-死细胞染色及苏木精-伊红染色；分别采用关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架浸提液与细胞培养液培养兔软骨细胞6 d，MTT法检测细胞增殖。

结果与结论：①关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架横断面为均匀的多孔网状结构，孔壁上密布软骨纤维，纵断面为垂直管状结构，支架苏木精-伊红红染、番红O及甲苯胺蓝染色均呈阳性，含有胶原和糖胺多糖成分，支架的吸水率、孔隙率和纵向压缩弹性模量分别为(17.418 8±0.909 0)%、(81.495 1±6.621 0)%和(2.833 3±0.456 4) kPa；②共培养7 d，兔软骨细胞在支架上黏附和增殖，并均匀长入支架孔隙内；③关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架浸提液对软骨细胞无毒性；④结果表明，关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的理化性能及生化成分与天然软骨相似，具有良好的细胞相容性。

ORCID: 0000-0001-5089-7985(杨建华)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 生物材料, 软骨生物材料, 细胞外基质, 人脐带Wharton胶, 软骨, 细胞相容性, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Soft tissue engineering mainly includes seed cells, scaffolds, cytokines and bioreactors, among which, the scaffolds are the key link in the construction of tissue-engineered cartilage.

OBJECTIVE: To prepare an articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffold, and to evaluate its physicochemical properties and biocompatibility.

METHODS: The articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffold was prepared by freeze thawing drying method using porcine articular cartilage extracellular matrix and human umbilical cord Wharton glue as raw materials. The porosity, water absorption, tissue composition and longitudinal compressive elastic modulus of the scaffold were measured and histologically stained. Rabbit chondrocytes were co-cultured with the articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffold for 7 days. Then, scanning electron microscopy, live-dead cell staining and hematoxylin-eosin staining were performed. In addition, rabbit chondrocytes were cultured in the extract of the articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffold and cell culture medium for 6 days, respectively; and MTT assay was used to detect cell proliferation.

RESULTS AND CONCLUSION: The articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffolds had a cross-section of uniform porous network structure and a vertical cross-section of the vertical tubular structure, and the pore wall was densely covered with cartilage fibers. The composite porous scaffold was positive for hematoxylin-eosin staining, safranin O staining and toluidine blue staining, and contained collagen and glycosaminoglycan ingredients. The water absorption, porosity and longitudinal compressive elastic modulus of the scaffolds were (17.418 8±0.909 0)%, (81.495 1±6.621 0)% and (2.833 3±0.456 4) kPa, respectively. After 7 days of co-culture, rabbit chondrocytes adhered to the scaffold and proliferated, and further grew into the pores of the scaffold. Moreover, the scaffold was non-toxic to the rabbit chondrocytes. To conclude, the physiochemical properties and biochemical components of articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel porous scaffolds are similar to those of natural cartilage, and the scaffold has good biocompatibility.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Extracellular Matrix, Cartilage, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

肖统光，郝春香，荆晓光，刘雪剑，郭岗岗，杨建华，郭全义. 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及评估[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(22): 3470-3475.

Xiao Tong-guang, Hao Chun-xiang, Jing Xiao-guang, Liu Xue-jian, Guo Gang-gang, Yang Jian-hua, Guo Quan-yi.

Preparation and evaluation of an articular cartilage extracellular matrix/human umbilical cord Wharton gel composite scaffold

[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(22): 3470-3475.

图/表（结果） 5

2.1 扫描电镜观察关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶=复合多孔支架结果扫描电镜下可见，支架横断面呈现均匀的多孔网状结构，孔径100-200 μm(图2A)，孔壁上布满软骨纤维(图2B)；支架的纵断面呈近似垂直取向的管状结构，测得管径100-200 μm，孔隙之间交互连通性好(图2B)。

2.2 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的组织学染色观察结果组织学染色可见，支架苏木精-伊红染色单纯红染，无蓝染(图3A)，表明关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合材料中已无完整的细胞及细胞核；甲苯胺蓝、番红O、Ⅱ型胶原免疫荧光染色均呈阳性(图3B，C，D)，表明关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架含有蛋白多糖、胶原成分，与天然软骨成分相似。

2.3 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的生化成分定量分析成分定量检测结果显示支架自身含有胶原和糖胺多糖成分，其含量(样品干质量)分别为(17.70±0.18)，(3.01±2.73) mg/g，可证明关节软骨组织中原有天然存在的胶原和糖胺多糖成分被保留下来。

2.4 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的孔隙率、吸水率及力学特性关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的孔隙率为(81.495± 6.621)%，吸水率为(17.418 8±0.909 0)%，干燥状态下测得支架纵向压缩弹性模量为(2.833 3±0.456 4) kPa(图4)。

2.5 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的细胞相容性支架浸提液MTT检测结果(图5)显示：不同时间点实验组兔关节软骨细胞的增殖与对照组相比无明显差异(P > 0.05)，表明支架浸提液无细胞毒性。 Live/ Dead细胞染色结果(图6A)显示：复合体在培养箱培养7 d后，支架上的细胞大部分显绿色荧光(活细胞)，极少数细胞显红色荧光(死细胞)；扫描电镜观察细胞-支架结合体(图6B)，可观察到细胞贴附支架孔壁生长且分泌细胞外基质；细胞-支架结合体苏木精-伊红染色(图6C)可见，在复合培养7 d后，细胞在支架孔隙内分布均匀，表明支架孔隙结构有利于细胞的黏附、长入。

参考文献

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引言

材料方法

1.1 设计观察性实验。

1.2 时间及地点实验于2015年3月至2017年3月在解放军总医院骨科研究所完成。

1.3 材料新鲜猪膝关节购于北京市屠宰场；第2代兔关节软骨细胞(解放军总医院骨科研究所)；月坛双人水平层流型超净工作台(北京半导体元件一厂，北京)；Hereus BB5060型CO₂培养箱(上海德国Hereus公司，上海)；OlympusIX70型倒置显微镜、BH-2型Olympus生物显微镜、IX70型荧光显微镜(日本Olympus公司，日本)；MS260型电子天平(上海电子天平一厂，上海)；Nikon光学显微镜及照相设备(日本Nikon公司，日本)；Sonyo-80 ℃深低温冰箱(日本Sanyo公司，日本)；容声牌普通家用冰箱(广东容声电冰箱厂，广东)；Beckman Allegra X-22R 离心机(美国Beckman公司，美国)；紫外分光光度计DU640型(美国Beckman公司，美国)；恒温水浴箱(美国Turner BioSystems公司，美国)；FD-1 冷冻干燥机(北京博医康技术公司，北京)；细胞培养板、培养瓶、离心管、(美国corning costar公司，美国) ；软骨培养基、L-脯氨酸、HEPES、低温高速离心机、维生素C、Ⅱ型胶原酶(美国Sigma公司，美国) ；标准胎牛血清(美国 Hyclone公司，美国)；非必需氨基酸(NEAA(美国Hyclone公司，美国)；胰蛋白酶(美国Gibco公司，美国)；二抗(美国abcam公司，美国)；糖胺多糖比色法定量检测试剂盒(美国 Genmed 公司，美国)；羟辅氨酸试剂盒(南京建成公司，中国)。

1.4 实验方法

1.4.1 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备

物理法制备脱细胞的猪软骨细胞外基质：在干净的环境下削取猪关节软骨组织，将削得的软骨组织碎片使用PBS冲洗3次，然后置于酸性氧化电位水中进行浸泡，共 3次，30 min/次。无菌条件下，在超净工作台内，用眼科剪把软骨碎片剪碎至适当大小，用无菌蒸馏水反复冲洗 3次，再用体积分数3%H₂O₂浸泡30 min，然后再用无菌的馏水漂洗2次，每次30 min。将处理好的猪软骨颗粒放入匀浆机内，并且加入3倍体积的无菌蒸馏水，在低温条件下反复搅拌粉碎，制作成含有细胞及细胞碎片的软骨浆料。向浆料内加入10倍体积的无菌蒸馏水混匀。将上述低渗性猪软骨浆料放入-20 ℃冰箱中冷冻，然后在常温下进行融化，经过五六个冻融周期，可使细胞膜破裂。然后将冻融后的猪软骨浆料进行梯度离心，3 000 r/min离心10 min 后取上清；再给予4 000 r/min离心10 min，取上清；5 000 r/min离心20 min得到上清，如此反复10次；尽量洗去浆料内细胞膜碎片及细胞内物质，最后加入大量无菌蒸馏水洗调pH至7.0，然后取上层浆料，4 ℃下10 000 r/min离心10 min，去上清，最后收集到的沉淀就是纳米级不含细胞的猪软骨细胞外基质^[7]。

物理法制备脱细胞的人脐带Wharton胶：在不违反医学伦理的情况下，于妇产科收集新鲜健康的人脐带，将取得的人脐带组织置于酸性氧化电位水中浸泡，共3次，20 min/次，以进行首次灭菌。于超净工作台内无菌条件下，将脐带进行解剖处理，去除脐带内的动静脉，并且剥除脐带外面的膜，可获取胶冻样组织(即Wharton胶)。把获得的Wharton胶利用无菌三蒸水冲洗3次，加入体积分数3%H₂O₂浸泡消毒 20 min，然后用无菌三蒸水漂洗3次，20 min/次。将处理后的Wharton胶加入匀浆机内，然后加入5倍体积的无菌三蒸水，在4 ℃下进行充分搅拌粉碎，即可制成包含细胞和部分细胞碎片的Wharton胶匀浆。向Wharton胶匀浆内加入5倍体积的无菌蒸馏水混匀，将此匀浆放入-20 ℃冰箱中冷冻，然后在常温下融化，经过五六个冻融周期，可又一次使细胞膜破裂。然后将冻融后的Wharton胶匀浆进行梯度离心， 3 000 r/min离心20 min后取上清；再给予4 000 r/min离心20 min，取上清；5 000 r/min离心20 min得到上清，如此反复6次，尽量洗去匀浆里的细胞膜碎片及细胞内物质，加入足量无菌三蒸水调pH为7.0，最后取上层匀浆，4 ℃下10 000 r/min离心60 min，去上清，最后收集到的沉淀即为不含细胞的纳米级人脐带Wharton胶^[8]，溶剂为蒸馏水。

关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的制备及交联：将猪关节软骨细胞外基质和人脐带Wharton胶按照1∶1的比例混合均匀，配制为浓度3%的匀浆后放入圆柱型塑料模具(直径15 mm、高30 mm)，小心去除气泡，然后垂直放置在金属板上(事先把金属板置于-20至-40 ℃环境中预冷)12-18 h。待完全冻结后，再 -60 ℃放置 2 h。最后将其转移到冷冻干燥机中进行升华干燥。此种冰相在真空下(<13.33 Pa)升华48-72 h。然后进行紫外交联，最后在室温条件下平衡后，将支架切成直径15 mm、高1 mm的圆柱状(图1)，⁶⁰Co辐照灭菌后备用^[8]。

扫描电镜观察：事先分别切取厚度为1 mm的关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架横断面和纵断面，表面喷金处理后进行扫描电镜观察。

组织学染色：将支架包埋于组织包埋剂中后进行冰冻切片，切成厚度为10 μm的横断切片，然后进行苏木精-伊红、番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光观察。

组成成分定量检测：将支架经过胰蛋白酶处理后，分别应用羟脯胺酸测试盒和二甲基亚甲蓝法定量检测支架中总胶原含量及总糖胺聚糖含量。

孔隙率测定：采用无水乙醇法检测支架的孔隙率，利用一个有刻度的试管装上无水乙醇，将其体积记为V₁；将支架放入浸泡5 min，运用负压脱气的方法将乙醇充满支架孔，得出此时体积为V₂；取出支架读取数据，计为V₃，计算出支架的孔隙率为E=(V₁-V₃)/(V₂-V₃)，测试3次，取平均值。

吸水率测定：取5个支架分别称质量为m，然后将5个支架分别放入三蒸水中浸泡，直到无气泡逸出，支架取出后擦净支架表面水分，然后称质量为m₀, 吸水率X=(m₀-m)/m₀，测试3次，取平均值。

力学性能测定：利用微型材料试验机Minimat 2000 (Rheometric Scientific Corporation，美国)检测支架的纵向压缩弹性模量，并且绘制支架测试的应力-应变曲线，检测3个支架，取平均值。

1.4.2 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架与兔关节软骨细胞的复合将灭菌后的关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶=1∶1复合多孔支架置于12孔板中，每孔放置1个支架。调节第2代兔关节软骨细胞浓度至10×10⁹ L^-1，用枪吹匀。用200 µL的枪头将细胞悬液滴入支架内部直至支架饱和，将接种后的支架-细胞复合体转移至37 ℃细胞培养箱中孵育1-1.5 h，待细胞复合在支架上后，每孔加入5 mL含体积分数10%胎牛血清的F12-DMEM培养液后于细胞培养箱中培养，每二三天更换一次培养液，构建细胞-支架复合体。

细胞-支架复合体活-死细胞染色：细胞-支架复合体培养7 d后取出，加入FDA/PI染液，在激光共聚焦显微镜下观察细胞活性。

细胞-支架复合体扫描电镜观察：细胞-支架复合体培养72 h后取出，固定、脱水，干燥后切成厚度1 mm的薄片，表面喷金处理后进行扫描电镜观察。

细胞-支架复合体组织学染色：细胞-支架复合体培养 7 d后取出，支架包埋于组织包埋剂中后进行冰冻切片，切片厚度10 μm，进行苏木精-伊红染色观察。

1.4.3 关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的细胞相容性以含有体积分数10%胎牛血清的F12-DMEM培养基浸泡关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架24 h，制备支架浸提液。将300 μL细胞浓度为1.0×10⁷ L^-1的第2代兔关节软骨细胞悬液接种到96孔培养板上，等到细胞贴壁后，实验组加支架浸提液培养，对照组以含体积分数10%FBS的F12-DMEM培养基培养，培养2，4，6 d后采用MTT法检测关节软骨细胞的增殖。

1.5 主要观察指标关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架的理化性能及细胞相容性。

1.6 统计学分析采用SPSS 17软件包进行分析，所得所有数据以x(_)±s的格式记录，并且组间比较采用单因素方差分析，实验中以P <0.05作为差异有显著性意义的标准。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

目前已知可用于软骨组织工程构建的支架材料主要包括天然生物材料、人工合成高分子材料、复合材料3大类^[9]。理想的支架材料应有以下几个特点：来源广泛，易于获得；具有良好的生物相容性；具有较好的力学特性；易于种子细胞黏附和生长等特点。早期的软骨组织工程采用的支架材料主要有合成材料，如聚乳酸、聚羟基乙酸等^[9-10]。由于合成材料本身存在生物相容性较差、易导致机体免疫排斥反应等缺点，所以临床应用极为有限。天然生物材料来源于自然界生物自体，其较突出的优点是抗原性低，并且与正常组织细胞外基质结构成分相似，能够积极参与受损伤组织的愈合，比较完美地克服了合成材料存在的缺点；而两种天然生物材料复合而形成的复合天然生物材料，又集中了单种天然材料的优点，故而复合天然生物材料是软骨组织工程中比较有发展前景和临床治疗价值的一大类支架材料。

因为猪在生理及亲缘关系方面与人极其相近而备受组织工程研究及应用人员的青睐，且猪关节软骨具有来源广泛、易于获得、生物安全性高等优点^[11]。另外，人脐带本身作为医疗废弃物更加体现了它的再利用价值，除了它的生物源性优点外，又因为它是人源性的，临床应用更加易于被人们接受。之前已证实了关节软骨细胞外基质和人脐带Wharton胶具有自己的优点，因此，此次实验选用关节软骨细胞外基质和人脐带Wharton胶作为支架材料的来源。未经处理的猪关节软骨和人脐带含有细胞成分，所以具有抗原性，故体内移植可能导致免疫排斥反应，对此，此次实验采用差速离心法对其进行脱细胞处理后，有效去除了关节软骨细胞外基质和人脐带Wharton胶大部分抗原性，并且保留了关节软骨细胞外基质和人脐带Wharton胶的天然成分，如胶原、生长因子、蛋白多糖等^[12-13]，所有这些天然成分能够为需用的种子细胞提供仿生的生化环境，并对种子细胞有促进生长和维持表型的作用^[7-8]。既往国内外有单独关节软骨和人脐带脱细胞后在组织工程应用的报道^[7-8]，两种材料各有自己的优点。而此次实验中，将两种材料等比例混合制成关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架，是对以往两种材料优势结合的一次有益尝试。

差速离心法技术彻底破坏了关节软骨和和人脐带原有的物理结构，由于采用的是物理方法，更有利于保留组织天然成分，这是在Jia等^[14]的物理粉碎与化学消化结合法基础上的优化。

关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架

作为种子细胞再生组织的载体，具有搭载种子细胞并促进种子细胞生长及维持种子细胞表型的作用，进而塑造细胞外基质的排列积累，最终决定新生组织的结构及功能作用^[15]。所以，制造出结构上高度仿生的支架也是对软骨组织工程的另一个要求。早期国内外对软骨组织工程支架的研究多不注重支架的结构仿生，而此次实验制备的支架具有与正常关节软骨垂直于关节面而呈柱状组织排列结构相似的地方，所以在结构上达到了较高水平的仿生要求。此外，由于关节软骨组织通常需承受较大的载荷来维持关节活动，因而要求软骨支架所具有的力学特性也相应地尽量接近于关节软骨组织正常水平，这样才能具有足够的载荷能力。此次实验中垂直取向的结构则极大提高了支架本身的纵向抗压缩性能，这对于新生软骨组织形成有着极为重要的意义。

种子细胞是缺损组织修复再生的细胞来源，种子细胞的在借助软骨支架进行增殖的同时也需要维持种子细胞的表型^[16]，这样才能形成形态功能正常的组织，能使损伤的组织得以再生。此次实验所用的兔关节软骨细胞是一种以极小量即可大量产生的自体细胞。此次研究结果表明，关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架对兔关节软骨细胞具有良好的相容性，为进一步探讨以关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合多孔支架搭载兔关节软骨细胞构建组织工程化软骨奠定了基础。此实验从细胞毒性实验结果可看出，证明了当前生物支架材料无毒的普遍特性，而细胞死活染色及组织学染色结果也印证了支架材料具备的易于细胞黏附和生长，并且维持细胞分泌细胞外基质的特点。

综上所述，实验成功制备了关节软骨细胞外基质/人脐带Wharton胶复合浆料来源的具有类似天然软骨的取向性软骨支架，在结构上具有高度仿生性，理化性能较优良，生物相容性极好，是一种相对理想的可应用于软骨组织工程支架。在以后的研究中会进一步结合动物实验，探索其构建组织工程软骨，并将其进一步应用于修复动物损伤组织修复的可行性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

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