中国组织工程研究 ›› 2010, Vol. 14 ›› Issue (36): 6768-6771.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.36.026
• 干细胞基础实验 basic experiments of stem cells • 上一篇 下一篇
张万里,李 伟,林学科,李 航,翟荣林,王国斌,陶凯雄
Zhang Wan-li, Li Wei, Lin Xue-ke, Li Hang, Zhai Rong-lin, Wang Guo-bin, Tao Kai-xiong
摘要:
背景:研究表明小鼠胚胎成纤维细胞的制作受多种因素的影响。目前对这些因素的研究均建立于半经验的基础上,缺乏客观定量的数据支持。 目的:对小鼠胚胎成纤维细胞制作胚胎干细胞饲养层细胞条件进行优化。 方法:用两种不同方法从孕13.5 d昆明小鼠胚胎中分离胚胎成纤维细胞,采用锥虫蓝染色计数,比较两种分离方法在细胞活性和数量方面的差异。对分离得到的胚胎成纤维细胞用0.05%胰酶在室温下消化不同时间,分析胰酶消化时间解离贴壁细胞能力和其对细胞活性影响;采用梯度浓度国产丝裂霉素灭活饲养层细胞2 h和2.5 h并制作细胞生长曲线,探索丝裂霉素最佳浓度和处理时间;通过不同冻存方法比较复苏后胚胎成纤维细胞活性,筛选出适合小鼠胚胎成纤维细胞最佳冻存方法。 结果与结论:胚胎成纤维细胞对胰酶极其敏感,短时间多次消化法方法显著提高细胞活性和数量;室温下4~6 min胰酶消化时间有利于保存细胞活性;10 mg/L 2.5 h和20 mg/L 2 h丝裂霉素灭活适合制作饲养层细胞;程序性降温使细胞更能适应温度变化,显著提高解冻后细胞活性和数量。
中图分类号: