补阳还五汤及主要成分对大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织细胞焦亡的影响

doi:10.12307/2025.670

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (18): 3819-3825.doi: 10.12307/2025.670

• 组织构建实验造模 experimental modeling in tissue construction • 上一篇下一篇

补阳还五汤及主要成分对大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织细胞焦亡的影响

王瑞坤1，2，高维娟1，2，张浩燃1，刘一洁1，卜佳欣1，袁玟1，秦雨欣1，张怡1，2

1河北中医药大学，河北省石家庄市 050091；2河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室，河北省石家庄市 050091

收稿日期:2024-05-13 接受日期:2024-07-20 出版日期:2025-06-28 发布日期:2024-11-28
通讯作者: 张怡，博士，副教授，河北中医药大学，河北省石家庄市 050091；河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室，河北省石家庄市 050091
作者简介:王瑞坤，男，1997年生，河南省商水县人，汉族，河北中医药大学在读硕士，主要从事缺血性脑血管病的发生机制及中医药防治研究。
基金资助:
国家自然科学基金青年基金项目(82104963)，项目负责人：张怡；国家级大学生创新创业训练计划项目(202314432002，202314432015)，项目负责人：都宏飞、袁玟，指导教师：张怡；河北省大学生创新创业训练计划项目(S202214432064)，项目负责人：张浩燃，指导教师：张怡；河北省中医药管理局科研计划项目(2024336)，项目负责人：张怡；河北中医药大学燕赵医学研究项目(YZZY2023001)，项目负责人：张怡

Effects of Buyang Huanwu Tang and its main components on pyroptosis in brain tissue of rats with middle cerebral artery occlusion and reperfusion

Wang Ruikun1, 2, Gao Weijuan1, 2, Zhang Haoran1, Liu Yijie1, Bu Jiaxin1, Yuan Mei1, Qin Yuxin1, Zhang Yi1, 2

1Hebei University of Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China; 2Hebei Key Laboratory of Chinese Medicine Research on Cardio-cerebrovascular Disease, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China

Received:2024-05-13 Accepted:2024-07-20 Online:2025-06-28 Published:2024-11-28
Contact: Zhang Yi, MD, Associate professor, Hebei University of Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China; Hebei Key Laboratory of Chinese Medicine Research on Cardio-cerebrovascular Disease, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China
About author:Wang Ruikun, Master candidate, Hebei University of Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China; Heibei Key Laboratory of Chinese Medicine Research on Cardio-cerebrovascular Disease, Shijiazhuang 050091, Hebei Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China (Youth Fund Project), No. 82104963 (to ZY); China National University Student Innovation & Entrepreneurship Development Programs, Nos. 202314432002 and 202314432015 (to DHF, YM and ZY [supervisor]); Hebei College Students Innovation and Entrepreneurship Training Program, No. S202214432064 (to ZHR and ZY [supervisor]); Hebei Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine Scientific Research Program, No. 2024336 (to ZY); Yanzhao Medical Research Project of Hebei University of Chinese Medicine, No. YZZY2023001 (to ZY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
细胞焦亡：是一种由炎性小体传感器激活引起的程序性细胞死亡，最终导致细胞膜完整性丧失，释放大量促炎症因子。
缺血再灌注损伤：缺血的组织、器官经恢复血流灌注后，不但不能使其功能和结构恢复，反而加重功能障碍和结构损伤，这种现象称为缺血再灌注损伤。
补阳还五汤：中医方剂学中理血剂之一，具有理气、活血、通络的功效，主治中风气虚血瘀证，是临床治疗缺血性脑卒中的常用方剂。

背景：细胞焦亡是脑缺血再灌注损伤的重要病理机制，补阳还五汤是中医临床治疗缺血性脑卒中的经典方剂，细胞焦亡可能是补阳还五汤治疗脑缺血再灌注损伤的有效作用靶点。
目的：观察补阳还五汤对大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织细胞焦亡的影响及作用机制。
方法：将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪组及补阳还五汤组。除假手术组外，其余各组均进行大脑中动脉阻塞缺血2 h再灌注72 h处理，黄芪组和补阳还五汤组大鼠均于缺血2 h再灌注后开始连续灌胃相应体积的药物至缺血再灌注72 h，早晚各1次。Zea Longa评分观察大鼠神经功能缺损情况，TTC染色观察大鼠脑梗死体积，苏木精-伊红染色观察大鼠脑组织病理损伤变化，免疫荧光观察脑组织Tunel和Cleaved Caspase-1共表达以及接头蛋白ASC表达情况，免疫组化及Western blot检测大鼠脑组织焦亡相关蛋白表达。
结果与结论：①与假手术组相比，模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P < 0.01)，与模型组相比，补阳还五汤组及黄芪组大鼠神经功能缺损评分显著下降(P < 0.01)；②与模型组相比，黄芪组和补阳还五汤组脑梗死体积占比下降(P < 0.01)；③模型组脑组织神经细胞胞核固缩深染或溶解消失，细胞排列紊乱，与模型组比较，补阳还五汤组及黄芪组脑组织病理损伤较轻；④与假手术组相比，模型组大鼠脑组织Tunel与Cleaved Caspase-1双染色阳性细胞数及ASC免疫荧光表达强度显著增加，Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素18和白细胞介素1β焦亡蛋白表达显著升高(P < 0.01)；与模型组相比，补阳还五汤组及黄芪组Cleaved Caspase-1与Tunel双染色阳性细胞数、ASC免疫荧光表达强度及Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素18、白细胞介素1β焦亡蛋白表达均明显下降(P < 0.01)。结果表明，补阳还五汤及其君药黄芪可有效缓解大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织损伤，其机制可能与抑制神经细胞焦亡有关。
https://orcid.org/0009-0004-0540-2161(王瑞坤)；https://orcid.org/0000-0003-2234-6021(张怡)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 补阳还五汤, 黄芪, 中风, 大脑中动脉阻塞, 脑缺血再灌注损伤, 细胞焦亡, 神经功能缺损评分, 工程化组织构建

Abstract: BACKGROUND: Cellular pyroptosis is an important pathological mechanism of cerebral ischemia/reperfusion injury. Buyang Huanwu Tang is a classic formula for the clinical treatment of ischemic stroke in traditional Chinese medicine, and cellular pyroptosis may be an effective target of Buyang Huanwu Tang in the treatment of cerebral ischemia/reperfusion injury.
OBJECTIVE: To observe the effect and mechanism of Buyang Huanwu Tang on pyroptosis in brain tissues of middle cerebral artery occlusion/reperfusion rats.
METHODS: Forty-eight Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham operation group, model group, Astragalus membranaceus group and Buyang Huanwu Tang group. Except for the sham operation group, all groups were subjected to middle cerebral artery occlusion for ischemia for 2 hours and reperfusion for 72 hours. The rats in the Astragalus membranaceus group and Buyang Huanwu Tang group were continuously gavaged with the corresponding volume of drugs until ischemia and reperfusion for 72 hours after awakening from the modeling, once in the morning and once in the evening. Zea Longa score was used to observe the neurological deficits of rats. TTC staining was performed to observe cerebral infarct size in rats. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the pathological changes of the brain tissue. Immunofluorescence was used to observe the co-expression of Tunel and Cleaved-Caspase-1 in the brain tissue and the expression of the junction protein ASC. Immunohistochemistry and western blot were used to detect the expression of pyroptosis-related proteins in rat brain tissues.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the sham operation group, the neurological deficit score of rats was significantly higher in the model group
(P < 0.01), and compared with the model group, the neurological deficit score of rats was significantly lower in the Buyang Huanwu Tang group and the Astragalus membranaceus group (P < 0.01). (2) Compared with the model group, the volume ratio of cerebral infarction was lower in the Astragalus membranaceus group and Buyang Huanwu Tang group (P < 0.01). (3) In the model group, the nuclei of neuronal cells in the brain tissue were deeply stained or lysed, and arrangement of the cells was disorganized. Compared with the model group, the pathologic damage of the brain was less severe in the Buyang Huanwu Tang group and the Astragalus membranaceus group. (4) Compared with the sham operation group, the number of Tunel and Cleaved-Caspase-1 double-positive cells and immunofluorescence intensity of ASC in the brain tissue was significantly increased in the model group, and the expression of Cleaved-Caspase-1, NLRP3, interleukin 18, and interleukin 1β was significantly elevated in the model group (P < 0.01). Compared with the model group, the number of Cleaved-Caspase-1 and Tunel double-positive cells, immunofluorescence intensity of ASC, and the expression of Cleaved-Caspase-1, NLRP3, interleukin 18, and interleukin 1β were all significantly decreased in the Buyang Huanwu Tang group and the Astragalus membranaceus group (P < 0.01). The results indicate that Buyang Huanwu Tang and its monarch drug Astragalus membranaceus can effectively alleviate brain tissue injury in rats with middle cerebral artery occlusion and reperfusion, and its mechanism may be related to the inhibition of neuronal cell pyroptosis.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Buyang Huanwu Tang, Astragalus membranaceus, stroke, middle cerebral artery occlusion, cerebral ischemia/reperfusion injury, pyroptosis, neurological deficit score, engineered tissue construction

中图分类号:

王瑞坤, 高维娟, 张浩燃, 刘一洁, 卜佳欣, 袁玟, 秦雨欣, 张怡. 补阳还五汤及主要成分对大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织细胞焦亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(18): 3819-3825.

Wang Ruikun, Gao Weijuan, Zhang Haoran, Liu Yijie, Bu Jiaxin, Yuan Mei, Qin Yuxin, Zhang Yi. Effects of Buyang Huanwu Tang and its main components on pyroptosis in brain tissue of rats with middle cerebral artery occlusion and reperfusion[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(18): 3819-3825.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析实验过程中有17只大鼠造模失败或死亡，均由同批次备用大鼠补足样本数，48只大鼠进入结果分析。
2.2 各组大鼠神经功能缺损情况与假手术组比较，模型组大鼠Zea Longa评分显著升高(P < 0.01)，与模型组比较，补阳还五汤组及黄芪组大鼠Zea Longa评分显著降低，其中补阳还五汤组效果更优(P < 0.01)，见图1。

2.3 各组大鼠脑梗死体积差异 TTC染色结果显示，与模型组相比，黄芪组和补阳还五汤组大鼠脑梗死体积均明显减少(P < 0.01)，其中补阳还五汤组脑梗死体积更低(P < 0.01)，见图2。

2.4 各组大鼠脑组织病理损伤变化苏木精-伊红染色结果显示，假手术组大鼠脑组织神经细胞核仁明显，无固缩，无集中明显的不规则空洞出现；模型组大鼠脑组织神经细胞数量减少，分布散乱，细胞核固缩深染，结构完整度低且周围出现大量的不规则空洞；补阳还五汤组及黄芪组亦出现病理形态变化，但与模型组相比，脑组织损伤明显改善，细胞结构较完整，不规则空洞数量明显减少，见图3。

2.5 各组大鼠脑组织焦亡细胞数 Tunel和Cleaved Caspase-1免疫荧光双染色结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠Tunel和Cleaved Caspase-1双染阳性细胞数显著升高(P < 0.01)，与模型组比较，补阳还五汤组及黄芪组大鼠Tunel和Cleaved Caspase-1双染阳性细胞数明显降低(P < 0.01)，其中补阳还五汤组阳性细胞数降低更为显著(P < 0.01)，见图4。

2.6 各组大鼠脑组织ASC平均荧光强度 ASC免疫荧光染色结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠脑组织ASC平均荧光强度显著升高(P < 0.01)，与模型组比较，补阳还五汤组及黄芪组大鼠脑组织ASC平均荧光强度明显降低(P < 0.01)，见图5。

2.7 各组大鼠脑组织焦亡相关蛋白表达变化免疫组织化学染色法及Western blot检测结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠脑组织Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素1β及白细胞介素18蛋白表达均明显上调(P < 0.01)；与模型组比较，补阳还五汤组及黄芪组大鼠脑组织Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素1β及白细胞介素18蛋白表达均明显下调(P < 0.05)，其中以补阳还五汤组下降更为显著(P < 0.01)，见图6，7。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。组间分析符合正态分布采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，不符合正态分布采用非参数检验(Kruskal-Walis H)。
1.2 时间及地点实验于2023年8月至2024年1月在河北中医药大学河北省心脑血管病中医药防治研究重点实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物清洁级雄性SD大鼠48只，7周龄，体质量240-280 g，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0011，于河北中医药大学动物中心适应性饲养1周后进行实验。实验方案经河北中医药大学动物实验伦理委员会批准，审批号为DWLL202306041。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。
1.3.2 实验试剂 NLRP3抗体(货号DF15549)、Cleaved Caspase-1抗体(货号AF4005)、ASC抗体(货号DF6304)(Affinity Biosciences公司)；白细胞介素18抗体(货号10663-1-AP)、白细胞介素1β抗体(货号16806-1-AP)(武汉三鹰生物技术有限公司)；β-actin抗体(货号GB12001)(武汉塞维尔生物科技有限公司)；2% TTC染液(武汉塞维尔生物科技有限公司)；HRP标记的山羊抗兔IgG、Cy3标记山羊抗兔IgG、Tunel试剂盒、免疫组化试剂盒(武汉塞维尔生物科技有限公司)。
1.3.3 实验仪器多功能小动物手术台(Kent公司)；组织包埋机(EG11508)、全自动轮转切片机(RM2255)、荧光显微镜(DM5000B)(Leica公司)；小型垂直电泳槽、半干转印槽、基础电源(Bio-Rad公司)；多功能成像系统(Vilber公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 药物制备参考《方剂学》药液制备方法，补阳还五汤由黄芪125 g，当归尾6 g，地龙3 g，川芎3 g，赤芍5 g，桃仁3 g，红花3 g组成(药材购自北京同仁堂有限公司)。上述7味中药饮片混合加蒸馏水浸泡2 h，一煎加500 mL蒸馏水煎至150 mL，二煎加300 mL蒸馏水煎至100 mL，两煎合并后浓缩至100 mL(含生药1.48 g/mL)，-20 ℃保存备用。同法制备黄芪水煎剂(含生药1.25 g/mL)。
1.4.2 动物分组与模型制备将适应性饲养1周的SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪组及补阳还五汤组，每组12只。除假手术组外，其余各组均采用线栓法制备大脑中动脉阻塞再灌注损伤模型[9]。将提前禁食、禁水的SD大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉(40 mg/kg)，麻醉后固定于小动物手术台进行手术操作：分离、结扎和切断颈外动脉，通过颈外动脉残端的小切口将线栓插入动脉，穿过颈内动脉到达大脑中动脉以闭塞大脑中动脉；在闭塞大脑中动脉2 h后，轻轻拔出线栓以实现再灌注，大鼠完全苏醒后，采用Zea Longa评分法观察神经功能缺损情况，评分在1-3分视为造模成功。假手术组仅分离颈内动脉及颈外动脉，不进行插线处理。参考徐叔云主编《药理实验方法学》按大鼠与人等效剂量比值6.3计算，补阳还五汤组大鼠苏醒后给予补阳还五汤2.3 mL灌胃，黄芪组给予黄芪水煎剂2.5 mL灌胃，模型组给予2.3 mL纯水灌胃，每日早晚各给药1次，连续给药3 d。
1.4.3 神经功能缺损评分给药3 d后，采用Zea Longa评分观察大鼠神经功能缺损情况。0分：无神经功能缺损症状；1分：对侧前爪不能完全伸展；2分：爬行时身体向病灶对侧转圈；3分：爬行时向病灶对侧倾倒；4分：不能自发行走或失去意识。
1.4.4 2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色在神经功能缺损评分完成后，麻醉处死大鼠，取大脑放入-20 ℃冰箱冷冻20 min，制备厚度约为1.5 mm的冠状面切片，将切片置于2% TTC染液中，37 ℃孵育15 min，在40 g/L多聚甲醛中过夜固定。对固定好的切片拍照，成像后使用Image-Pro Plus软件进行量化，脑梗死体积(%)=(梗死区总面积/切片总面积)×100%。
1.4.5 苏木精-伊红染色将脑组织置于40 g/L多聚甲醛中固定24 h，乙醇脱水、透明石蜡包埋，制备切片，厚度为3-5 μm，按照试剂盒说明对脑组织切片进行苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察脑皮质部位组织病理学变化。
1.4.6 免疫组织化学染色将固定于40 g/L多聚甲醛溶液中的大鼠脑组织取出进行石蜡包埋制成石蜡切片后，依次进行脱蜡、水化、抗原修复、正常血清封闭，滴加调配好的Cleaved Caspase-1(1∶50)、NLRP3(1∶50)、白细胞介素18(1∶50)和白细胞介素1β(1∶50)抗体，湿盒内4 ℃条件下孵育过夜，滴加HRP标记的山羊抗兔IgG，室温孵育45 min，经洗涤、DAB显色后，再滴加苏木精染核，脱水处理后封固，光学显微镜下观察。
1.4.7 免疫荧光染色脑组织切片进行抗原修复、封闭，加入Cleaved Caspase-1(1∶50)一抗稀释液和Tunel染液，4 ℃条件下避光孵育过夜；滴加Cy3标记山羊抗兔IgG，室温避光孵育45 min；DAPI荧光染料染核后封固，荧光显微镜下观察。染色后细胞核呈蓝色，Cleaved Caspase-1阳性表达呈红色，Tunel阳性表达呈绿色。红色、绿色以及蓝色相重合的细胞，作为阳性细胞，细胞焦亡率=阳性细胞数/蓝色荧光细胞数×100%。同样，对脑组织切片进行抗原修复、封闭后，加入ASC(1∶200)一抗稀释液，4 ℃条件下避光孵育过夜；滴加Cy3标记山羊抗兔IgG，室温避光孵育45 min；DAPI荧光染料染核后封固，荧光显微镜下观察。ASC阳性表达呈红色，细胞核表达呈蓝色，红色和蓝色重合的细胞作为阳性细胞。Image-Pro Plus软件对图片进行分析。
1.4.8 Western blot检测相关蛋白表达按说明提取大鼠脑组织蛋白，BCA法测定蛋白质浓度，蛋白变性后进行SDS-PAGE电泳、PVDF转膜、脱脂牛奶封闭及抗体孵育(Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素18、白细胞介素1β、β-actin一抗均为1∶1 000，二抗为1∶3 000)；二抗孵育结束后摇洗、ECL发光，用Image J软件对条带进行分析。
1.5 主要观察指标大鼠神经功能评分，脑梗死体积，脑组织病理形态，NLRP3、ASC、Caspase-1焦亡蛋白及炎症因子白细胞介素1β和白细胞介素18的表达。
1.6 统计学分析使用SPSS 19.0软件进行统计分析，符合正态分布的数据用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，方差齐的数据用LSD检验法，方差不齐用Dunnett’s T3法进行多重比较；数据不符合正态分布用M(Q1，Q3)表示，组间比较采用非参数检验。统计学方法已通过河北中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

脑缺血再灌注损伤是缺血性脑卒中溶栓和手术治疗后的常见并发症，是涉及氧化应激、炎症反应、细胞内钙离子超载、细胞凋亡、细胞焦亡等多种机制的复杂病理生理过程[10]。深入探索脑缺血再灌注损伤的发生机制并积极寻找治疗脑缺血再灌注损伤的有效手段，是临床和基础研究的重点。
大量研究证实，炎症反应参与了缺血性脑卒中发生发展的全过程，且炎症的发展程度与脑组织的损伤程度呈正相关，细胞焦亡在炎症调节中起关键作用[11-12]。与其他程序性细胞死亡类似，适度的细胞焦亡有助于清除受损神经细胞，维持脑稳态。但在脑缺血再灌注过程中脑组织细胞尤其是神经元和内皮细胞大量焦亡是增加炎症因子、加重脑实质损伤的直接原因[13-14]。目前已知的细胞焦亡通路中，NLRP3/Caspase-1介导的经典焦亡通路是当今研究热点，多项研究发现，Caspase-1经典途径介导的细胞焦亡广泛参与炎症过程[15-16]。脑缺血再灌注损伤发生后，线粒体产生过量活性氧、启动氧化应激等程序并促进NLRP3的蛋白构象发生变化，NLRP3通过同型作用完成自身的寡聚，寡聚后与接头蛋白ASC相互作用，募集大量Caspase-1前体蛋白Pro-Caspase-1，完成NLRP3炎性小体的组装与激活程序，进而诱导Caspase-1的活化[17-18]。活化后的Caspase-1可以对GSDMD蛋白进行剪切，产生含有N端的活性片段，片段上的肽段可与细胞膜上的脂类物质紧密结合，导致细胞膜上孔洞的生成，增加细胞膜的通透性，炎症因子随之释放，进而诱导细胞发生焦亡[19-20]。同时，活化的Caspase-1还可以直接作用于白细胞介素18前体和白细胞介素1β前体，活化致炎因子白细胞介素18和白细胞介素1β，扩大炎症反应，进一步加重脑损伤[21]。此研究发现，脑缺血再灌注损伤后，大鼠脑组织Tunel和Cleaved Caspase-1阳性细胞数明显增加，Cleaved Caspase-1、NLRP3、白细胞介素1β及白细胞介素18蛋白表达均显著升高，证实缺血再灌注后脑组织发生炎症反应、神经细胞大量焦亡。
传统医学并无“缺血性脑卒中”这一病名，其归属于中医中风病的范畴。对于中风的中医病因病机认识，历代医家论述观点各有侧重，但气虚血瘀的基本病机是历代医家共识。清代名医王清任在中风病的治疗中指出其关键应为“大补元气，活血通络以祛瘀”，因此确立了益气活血治法，并在此基础上创建治疗中风病的名方——补阳还五汤。补阳还五汤由黄芪、当归尾、川芎、桃仁、赤芍、红花、地龙等7味中药组成，方中黄芪为君药，用量独重，意在大补元气以行血，血行则瘀祛而络通；当归尾善行血和血，为臣药；川芎、桃仁、赤芍、红花佐助当归尾活血祛瘀，配地龙通经活络。基础研究证实，补阳还五汤治疗缺血性中风具有多成分、多通路、多靶点的特点，可通过抗自由基的产生、调控细胞自噬、抑制细胞凋亡、改善微循环等机制发挥神经保护作用，能在一定程度上增强神经细胞的自我修复能力，减少神经细胞死亡，缓解脑缺血再灌注损伤[22-24]。大量临床研究证实，补阳还五汤可用于不同类型中风病各种时期的治疗，Meta分析结果也证实：对于气虚血瘀型缺血性中风，不论急性期、恢复期和后遗症期补阳还五汤均有显著疗效，能有效改善患者的神经功能缺损情况及日常生活、活动能力[25-26]。除补阳还五汤全方外，亦有诸多关于方中活性成分的研究，如方中主要入脑成分黄酮类化合物黄芩素能通过多条通路发挥抗炎、抗氧化和抗凋亡的药理作用[27-28]；其君药黄芪中有效活性成分芒柄花素、毛蕊异黄酮和黄芪甲苷可通过抗炎、抗凋亡和调控细胞自噬等途径减轻缺血再灌注后脑组织损伤[29-30]。但补阳还五汤及其主要成分对脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡影响的研究相对较少。课题组前期研究证实补阳还五汤可通过调控细胞自噬、抑制细胞凋亡减轻大脑中动脉闭塞再灌注大鼠脑组织损伤程度，但其药效物质基础及对细胞焦亡的影响和具体机制仍待探究。
此研究发现，给予补阳还五汤及其君药黄芪处理后，大脑中动脉阻塞再灌注大鼠神经功能缺损情况及脑组织病理损伤均显著缓解，脑组织焦亡细胞数明显减少，脑组织Cleaved Caspase-1、NLRP3、ASC、白细胞介素1β及白细胞介素18等焦亡相关蛋白表达均明显下降，补阳还五汤全方效果明显优于黄芪。上述研究结果提示补阳还五汤及其君药黄芪能够通过抑制细胞焦亡缓解大鼠脑组织缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制Caspase-1介导的经典焦亡途径有关(图8)。

此研究虽然观察了补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡及其经典通路的影响，但对补阳还五汤抑制细胞焦亡缓解脑缺血再灌注损伤的机制探索仍不够深入。脑缺血再灌注过程中细胞焦亡的调控是一个复杂过程，经典焦亡途径上下游因子或通路有何变化？MIAO等[31]在《Immunity》发表的文章证实活性氧可放大经典和非经典炎性小体介导的细胞焦亡，补阳还五汤是否对缺血再灌注后脑组织活性氧产生影响？是否可通过干预活性氧调控经典焦亡途径从而抑制脑缺血再灌注后细胞焦亡进程？这都是下一阶段实验可以继续探究、解决的问题。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

补阳还五汤及主要成分对大脑中动脉阻塞再灌注大鼠脑组织细胞焦亡的影响

Effects of Buyang Huanwu Tang and its main components on pyroptosis in brain tissue of rats with middle cerebral artery occlusion and reperfusion

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