2.1   实验动物数量分析   实验选用SD大鼠30只，对照组、模型组、鹿角胶组各10只。实验过程无死亡，每组随机选取6只进入结果分析。 2.2   鹿角胶对激素性股骨头坏死模型大鼠整体状态、体质量及炎症因子的影响   见图1。 2.2.1   大鼠整体状态   在甲泼尼龙琥珀酸钠注射期间，模型组大鼠出现精神状态不佳、食欲下降、毛色灰暗稀疏、大便稀软、尿量多等症状，体质量整体显著下降(P < 0.05)；停止注射后，模型组大鼠体质量有所回升，但至第6周结束时仍显著低于对照组 (P < 0.05)。鹿角胶组大鼠在注射期间症状较轻，表现为食欲尚可、毛色略灰暗稀疏、大便轻度稀软、尿量稍多，体质量下降幅度小于模型组；停止注射后，鹿角胶组大鼠体质量恢复较快，至第6周结束时体质量显著高于模型组(P < 0.05)，但仍低于对照组 (P < 0.05)。 2.2.2   ELISA检测结果   与对照组相比，模型组大鼠血清白细胞介素1β水平显著升高(P < 0.05)；鹿角胶干预后，白细胞介素1β水平显著降低(P < 0.05)，虽未恢复至对照组水平，但显著优于模型组(P < 0.05)。 结果表明，鹿角胶可改善激素性股骨头坏死模型大鼠的整体状态，缓解体质量异常，并降低炎症因子白细胞介素1β的表达水平。 2.3   鹿角胶对激素性股骨头坏死模型大鼠股骨头组织病理学及骨修复能力的影响    2.3.1   组织病理学改变   苏木精-伊红染色结果见图2。与对照组相比，模型组软骨下骨小梁结构紊乱，骨小梁间隙明显变窄，骨髓腔面积缩小，骨小梁内骨细胞数量减少且空骨陷窝增加；同时骨髓腔内造血细胞分布稀疏，骨髓细胞坏死程度加剧，髓内脂肪细胞体积增大并部分融合形成囊状结构(图2B)。鹿角胶干预后，骨小梁结构完整性得到改善，空骨陷窝数量减少，骨髓腔形态规整且髓腔内造血细胞分布均匀，脂肪细胞体积减小且分布稀疏(图2C)。结果表明，鹿角胶可改善激素性股骨头坏死模型大鼠股骨头的组织病理学损伤。 2.3.2   骨修复能力   Masson染色结果见图3。与对照组相比，模型组大鼠股骨头胶原纤维显著减少、变薄且排列稀疏，骨小梁结构破坏严重，骨修复能力明显下降(图3B)。鹿角胶干预后，胶原纤维数量增加、排列更加致密，骨小梁结构得到部分修复，新生骨组织增多，骨修复能力显著提高(图3C)。结果表明，鹿角胶可促进激素性股骨头坏死模型大鼠股骨头的骨修复。 两种染色结果共同证实，鹿角胶通过促进骨小梁结构重建、调节骨髓微环境和增强胶原纤维合成，有效改善激素性股骨头坏死模型大鼠股骨头的组织病理学损伤并增强骨修复能力。 2.4   鹿角胶对激素性股骨头坏死大鼠股骨头成骨标志物Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原a1蛋白表达的影响   Western blot检测结果显示，与对照组相比，模型组大鼠股骨头中Runt相关转录因子2和Ⅰ型胶"

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原a1的蛋白表达水平显著下调(P < 0.05)，表明激素性股骨头坏死模型大鼠的成骨细胞分化和骨基质合成能力受到抑制；鹿角胶干预后，Runt相关转录因子2和Ⅰ型胶原a1的蛋白表达水平较模型组显著上调(P < 0.05)，见图4。    结果表明，鹿角胶可通过促进Runt相关转录因子2和Ⅰ型胶原a1的表达，增强激素性股骨头坏死模型大鼠股骨头的成骨细胞分化和骨基质合成能力，从而改善骨修复功能。 2.5   鹿角胶对激素性股骨头坏死模型大鼠肠道菌群稳态失衡的影响    2.5.1   肠道菌群α多样性分析   对对照组(n=6)、模型组(n=6)和鹿角胶组(n=6)的18份盲肠粪便样本进行16S rDNA基因测序，共获得2 043 425条Clean Reads，聚类为1 456个OTUs。α多样性分析结果显示，随着测序深度的增加，Sob曲线和Shannon曲线均趋于平坦，表明测序数据量足以覆盖样本中的绝大多数微生物信息(图5A，B)。Rank丰度曲线显示，"

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3组样本的物种丰度和均匀度无显著差异(图5C)。进一步分析Ace、Chao1、Shannon和Simpson指数发现，鹿角胶干预对激素性股骨头坏死模型大鼠肠道菌群的整体物种丰度和多样性均无显著影响(P > 0.05)(图5D-G)。结果表明，鹿角胶可能并非通过改变肠道菌群的整体多样性来发挥治疗作用，但其对特定菌群的影响仍需进一步研究。 2.5.2   肠道菌群β多样性分析   采用非度量多维尺度分析和Anosim检验评估3组大鼠肠道菌群结构的差异。非度量多维尺度分析分析结果显示，应力值(stress) < 0.1，表明模型可靠且能够较好地反映样本间的差异(图6A)。Anosim检验结果显示，组间差异显著大于组内差异(R值范围为0-1，P < 0.05)，进一步证实了3组间肠道菌群结构存在显著差异(图6B)。结果表明，激素性股骨头坏死模型大鼠的肠道菌群结构发生了显著改变，而鹿角胶干预可能通过调节特定菌群的丰度，改善肠道菌群稳态失衡。 2.5.3   门水平及属水平肠道菌群组成分析   为了进一步评估3组大鼠肠道菌群的总体组成，对各组样本在门水平上的菌群分布进行了分析。结果显示，Firmicutes(60%-72%)和Bacteroidota(19%-35%)在3组中均显著富集，为优势菌门。与模型组相比，鹿角胶组中Firmicutes的相对丰度显著降低(65.15% vs. 72.09%)。此外，Verrucomicrobiota和Actinobacteriota在鹿角胶组中的相对丰度高于对照组和模型组。在属水平上，模型组中Alloprevotella和Prevotellaceae_ UCG-003的相对丰度低于对照组，而Romboutsia和Bacteroides被富集。与模型组相比，鹿角胶的应用使得Prevotellaceae_UCG-003的相对丰度增加，降低了Romboutsia和Bacteroides的相对丰度，见图7。"

2.5.4   线性判别分析效应大小分析筛选差异基因   在线性判别分析效应大小分析中，设定阈值LDA score≥ 2 ，P < 0.05，得到对照组vs.模型组和模型组vs.鹿角胶组的进化分支图，如图8所示。    可以看出经过糖皮质激素的干预，模型组出现了大量的肠道菌富集，而与之相反的是，鹿角胶组的应用降低了部分肠道菌群的丰度，这些属水平上的差异菌群包括Phycicoccus、OLB12、Dubosiella、Turicibacter、Ruminococcus_torques_group、Tyzzerella、UCG_ 007、Fusobacterium、Nannocystis、Candidatus_Saccharimonas、Pseudomonas、     Photobacterium。其中Dubosiella、Turicibacter、Ruminococcus_torques_group、Tyzzerella、UCG_007均属于Firmicutes。另外值得关注的是，鹿角胶组的Nosocomiicoccus属出现了富集，该菌属也归类于Firmicutes。"

2.6   肠道菌群与代谢物之间的相关性分析   基于前期粪便非靶向代谢组学研究结果(鹿角胶组与模型组间的64个差异代谢物)以及此次研究的13个差异菌属[9]，采用Spearman相关性分析评估差异代谢物与差异菌属的相关性，并对相关性系数绝对值进行排序，筛选前60位相关性最高的代谢物和菌属，绘制层次聚类热图(图9A)。结果显示，Candidatus_Saccharimonas与Β-鼠胆酸、胆酸、胆汁酸呈显著正相关(r > 0.5)，而Turicibacter与Β-鼠胆酸、胆酸、胆汁酸呈显著负相关(r > -0.5)。此外，Fusobacterium与Β-鼠胆酸呈显著负相关(r > -0.5)，UCG_007与牛磺酸呈显著负相关(r > -0.5)。 通过KEGG通路富集分析，基于差异代谢物共获得73条富集通路，其中富集代谢物最多的20条通路及功能富集程度如图9B，C所示；基于差异菌属共获得136条富集通路，其中富集菌属最多的20条通路如图9D所示。 进一步的分析发现，有28条通路在代谢物和菌属分析中均被富集(图9E，表1)，其中包括特别关注的次级胆汁酸生物合成、初级胆汁酸生物合成以及牛磺酸和次牛磺酸代谢，这3条通路在微生物的KEGG功能富集中具有显著性差异(P < 0.05)，且富集到这些通路的代谢物中包括Β-鼠胆酸、胆酸和牛磺酸。"

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上述结果表明，鹿角胶可能通过调节肠道菌群(如Candidatus_Saccharimonas、Turicibacter、Fusobacterium和UCG_007)及其相关代谢物(如Β-鼠胆酸、胆酸和牛磺酸)，影响胆汁酸代谢和牛磺酸代谢通路，从而缓解糖皮质激素诱导的股骨头损伤。"