髓核细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化

中国组织工程研究

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髓核细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化

韦葛堇，黄育强，覃万安，廖长川，林舟丹

解放军第303医院骨科，广西壮族自治区南宁市 530021

修回日期:2013-09-25 出版日期:2013-11-05 发布日期:2013-11-05
通讯作者: 林舟丹，硕士，主任医师，硕士生导师，全军骨科学术委员会委员，解放军第303医院骨科，广西壮族自治区南宁市 530021 303gklzd@sina.com
作者简介:韦葛堇★，男，1981年生，广西壮族自治区河池市人，瑶族，2009年南方医科大学毕业，硕士，主治医师，主要从事脊柱、关节损伤的研究。
基金资助:
广西自然科学基金项目(桂科自0991287)*

Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into nucleus pulposus-like cells after co-culture with nucleus pulposus cells

Wei Ge-jin, Huang Yu-qiang, Qin Wan-an, Liao Chang-chuan, Lin Zhou-dan

Department of Orthopedics, the 303 Hospital of PLA, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China

Revised:2013-09-25 Online:2013-11-05 Published:2013-11-05
Contact: Lin Zhou-dan, Master, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Orthopedics, the 303 Hospital of PLA, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China 303gklzd@sina.com
About author:Wei Ge-jin★, Master, Attending physician, Department of Orthopedics, the 303 Hospital of PLA, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Guangxi Zhuang Autonomous Region, No. 0991287*

摘要/Abstract

摘要：

背景：骨髓间充质干细胞近年来作为种子细胞被广泛应用于髓核组织工程。在诱导骨髓间充质干细胞向髓核细胞分化的过程中，需要提供适当的细胞外微环境以及生长因子。
目的：研究体外与髓核细胞非接触共培养和生物诱导剂条件下，兔骨髓间充质干细胞向类髓核样软骨细胞分化的可行性。
方法：用单层培养法分别分离培养兔骨髓间充质干细胞和髓核细胞。选用第3代的髓核细胞和骨髓间充质干细胞置于Transwell培养皿上下层构建共培养体系并加入转化生长因子β1为主的生物诱导剂诱导培养21 d，以高糖DMEM培养基单独培养的骨髓间充质干细胞作为阴性对照。
结果与结论：分离培养的兔骨髓间充质干细胞细胞表面CD29和CD44表达阳性，CD34、CD45的细胞表达阴性。与髓核细胞共培养诱导21 d后，可观察到骨髓间充质干细胞形态向多角形类圆形转变，胞质中分泌Ⅱ型胶原颗粒明显增多，RT-PCR结果表明诱导后细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达明显增高。结果说明骨髓间充质干细胞在与髓核细胞共培养加生物诱导剂条件下可成功诱导分化为类髓核细胞。

关键词: 干细胞, 骨髓干细胞, 骨髓间充质干细胞, 细胞共培养, 诱导分化, 转化生长因子β1, Ⅱ型胶原, 髓核细胞, 类髓核细胞, 省级基金, 干细胞图片文章

Abstract:

BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells in recent years have been widely used as seed cells for nucleus pulposus tissue engineering. Appropriate extracellular microenvironment and growth factors are required for the induction of bone marrow mesenchymal stem cells differentiating into nucleus pulposus cells.
OBJECTIVE: To observe the differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells into nucleus pulposus-like cells in vitro induced by biological inducers and co-culture conditions.
METHODS: Rabbit bone marrow mesenchymal stem cells and nucleus pulposus cells were isolated and cultured using monolayer culture method, respectively. Passage 3 bone marrow mesenchymal stem cells were placed in the Transwell culture plates for co-culture with the passage 3 nucleus pulposus cells and then were induced biologically to differentiate into the nucleus pulposus-like cells for 21 days. Bone marrow mesenchymal stem cells were cultured alone in the high-glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium as negative controls.
RESULTS AND CONCLUSION: The expressions of CD29 and CD44 were positive and CD34 and CD45 were negative in the bone marrow mesenchymal stem cells. After 21 days of co-culture with nucleus pulposus cells, the morphology of bone marrow mesenchymal stem cells changed obviously from polygonal to oval shape, and collagen type Ⅱ granules were increased significantly. Reverse transcription-PCR results showed that expression of collagen type Ⅱ mRNA was significantly increased after induction. These findings indicate that bone marrow mesenchymal stem cells can be induced into differentiate into nucleus pulposus-like cells in co-culture plus biological inducer conditions in vitro.

Key words: mesenchymal stem cells, transforming growth factors, bone marrow, tissue engineering

中图分类号:

R394.2

韦葛堇，黄育强，覃万安，廖长川，林舟丹. 髓核细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化[J]. 中国组织工程研究.

Wei Ge-jin, Huang Yu-qiang, Qin Wan-an, Liao Chang-chuan, Lin Zhou-dan . Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into nucleus pulposus-like cells after co-culture with nucleus pulposus cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research.

图/表（结果） 5

2.1 细胞大体形态学观察见图1。

倒置相差显微镜下观察可见原代髓核细胞呈多角形、短梭形或类圆形，排列散乱，轮廓清楚，传代后逐渐变为短梭形；原代兔骨髓间充质干细胞贴壁后细胞呈长梭状及纺锤样，胞核大，折光性好；传代后细胞增殖较快，旋涡样生长，逐渐变为长梭状。
2.2 骨髓间充质干细胞的表面抗原检测流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞细胞表面CD29为87.4%、CD44为86.5%，CD34、CD45的细胞表达阴性，见图2。说明培养的为骨髓间充质干细胞并均一性较好。

经与髓核细胞共培养及诱导21 d后，骨髓间充质干细胞逐渐由长梭形变为圆形、类圆形或三角形，细胞突起变短，成为类髓核细胞，见图3。
类髓核细胞苏木精-伊红染色可见胞浆中大量嗜碱性分泌颗粒，见图4A。甲苯胺蓝染色见细胞外基质呈蓝紫色，胞核清晰，核仁明显，见图5A。共培养诱导21 d后，免疫细胞化学染色见胞浆中棕黄色分泌颗粒分布，呈Ⅱ型胶原阳性表达，见图6A。
而未与髓核细胞共培养的对照组骨髓间充质干细胞苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色提示中细胞形态无改变，无明显异染，见图4B、图5B、图6B。

2.4 骨髓间充质干细胞经诱导后Ⅱ型胶原基因mRNA的表达经琼脂糖凝胶电泳分析，骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养及诱导21 d后形成的类髓核细胞中Ⅱ型胶原基因mRNA为阳性表达，而未与髓核细胞共培养的对照组骨髓间充质干细胞中未见Ⅱ型胶原mRNA条带，见图7。

参考文献

[1] 丁凡,邵增务.椎间盘组织工程种子细胞研究进展[J].国际骨科学杂志,2010,31(6):376-377,380.
[2] Wang F, Wu X, Wang Y, et al. Research situation of stem cells transplantation for intervertebral disc degeneration. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2013;27(5):575-579.
[3] Zhang L, Ning B, Jia T, et al. Microcarrier bioreactor culture system promotes propagation of human intervertebral disc cells. Ir J Med Sci. 2010;179(4):529-534.
[4] 丁树伟,徐学振. 椎间盘组织工程种子细胞的选取、鉴定及培养难点[J].中国医药指南,2013,11:470-472.
[5] 陈国仙,王万明,王国荣,等. 骨髓间充质干细胞透明质酸钠溶液复合体移植修复兔退变椎间盘的实验研究[J].中华临床医师杂志(电子版),2011, 5(6):1547-1553.
[6] 王青,贾长青.干细胞生物技术治疗椎间盘退行性病变的现状[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(20):4001-4004.
[7] Jin ES, Min J, Jeon SR, et al. Analysis of molecular expression in adipose tissue-derived mesenchymal stem cells : prospects for use in the treatment of intervertebral disc degeneration. J Korean Neurosurg Soc. 2013;53(4):207-212.
[8] Stoyanov JV, Gantenbein-Ritter B, Bertolo A, et al. Role of hypoxia and growth and differentiation factor-5 on differentiation of human mesenchymal stem cells towards intervertebral nucleus pulposus-like cells. Eur Cell Mater. 2011;21:533-547.
[9] Korecki CL, Taboas JM, Tuan RS, et al. Notochordal cell conditioned medium stimulates mesenchymal stem cell differentiation toward a young nucleus pulposus phenotype. Stem Cell Res Ther. 2010;1(2):18.
[10] 张彦男,邵增务,吴永超,等. 非接触共培养脊索细胞诱导骨髓间充质干细胞向类软骨细胞分化的实验研究[J].中国脊柱脊髓杂志,2012,22(8):737-742.
[11] 韩成龙,姜超.骨髓间充质干细胞向髓核细胞的转化[J].中国矫形外科杂志,2009,17(19):1476-1478.
[12] 李全修,陈伯华,刘勇,等.构建兔髓核细胞诱导人骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的体外模型[J].中国组织工程研究与临床康复,2009,13(45):8961-8965.
[13] 韩成龙,姜超.模拟微重力下转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化[J].中国脊柱脊髓杂志,2011,21(5): 358-364.
[14] 李华壮,周跃.椎间盘组织工程研究进展[J].中华骨科杂志,2005, 25(5):316-318.
[15] van den Eerenbeemt KD, Ostelo RW, van Royen BJ, et al. Total disc replacement surgery for symptomatic degenerative lumbar disc disease: a systematic review of the literature. Eur Spine J. 2010;19(8):1262-1280.
[16] Miller LE, Block JE. Safety and effectiveness of bone allografts in anterior cervical discectomy and fusion surgery. Spine (Phila Pa 1976). 2011;36(24):2045-2050.
[17] Meisel HJ, Siodla V, Ganey T, et al. Clinical experience in cell-based therapeutics: disc chondrocyte transplantation A treatment for degenerated or damaged intervertebral disc. Biomol Eng. 2007;24(1):5-21.
[18] Watanabe K, Mochida J, Nomura T, et al. Effect of reinsertion of activated nucleus pulposus on disc degeneration: an experimental study on various types of collagen in degenerative discs. Connect Tissue Res. 2003;44(2): 104-108.
[19] 李军芳,邝晓聪,韦瑛,等.人骨髓间充质干细胞体内移植安全性评价的初步研究[J].广西医科大学学报,2009,26(6):833-836.
[20] 呼和,韩成龙,姜超,等.转化生长因子β1对骨髓干细胞分化类髓核细胞的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(36): 6722-6726.
[21] 吴健,杨金华,杨宗华,等.可注射型纤维蛋白凝胶转化生长因子β1复合骨髓间充质干细胞移植治疗椎间盘退变[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(3):478-482.
[22] Risbud MV, Guttapalli A, Stokes DG, et al. Nucleus pulposus cells express HIF-1 alpha under normoxic culture conditions: a metabolic adaptation to the intervertebral disc microenvironment. J Cell Biochem. 2006;98(1):152-159.
[23] Yamamoto Y, Mochida J, Sakai D, et al. Upregulation of the Viability of Nucleus Pulposus Cells by Bone Marrow-Derived Stromal Cells: Significance of Direct Cell-to-Cell Contact in Coculture System. Spine.2004;29(14):1508-1514.
[24] 刘连江,李放,文天用,等.转化生长因子β1/胰岛素样生长因子1与髓核细胞诱导脂肪间充质干细胞向髓核样软骨细胞分化的比较[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(23):4217-4221.
[25] 邵建树,吴小涛,王运涛,等.兔骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养后的营养效应和类髓核分化效应[J].中国脊柱脊髓杂志,2009, 19(5):381-387.
[26] 陈亮,李大鹏,黄永辉,等.髓核细胞诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向的分化[J].中国组织工程研究,2013,17(6):992-998.

引言

材料方法

设计：细胞学体外对照观察。

时间及地点：实验于2010年11月至2012年11月在广西医科大学实验中心完成。

材料：

动物：8周龄的新西兰大白兔6只，不限雌雄，体质量为2.0-2.5 kg，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(桂)2009-0002。实验过程中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

研究兔骨髓间充质干细胞体外向类髓核细胞分化的主要试剂及仪器：

方法：

骨髓间充质干细胞的分离、培养：取新西兰大白兔，耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠全身麻醉(1 mL/kg)。无菌条件下分离股骨胫骨骨段浸于PBS中，剪除双侧干骺端，用 5 mL无菌注射器针头抽取含体积分数15%胎牛血清的低糖DMEM培养液反复冲洗3次，收集冲洗液以100 μm滤网滤过，1 000 r/min离心5 min(离心半径15 cm)，弃上清，以上述培养液吹打制成细胞悬液。缓慢加入预加有10 mL密度为1.077 g/L的Percoll淋巴细胞分离液的离心管中，1 000 r/min离心15 min(离心半径15 cm)，吸取中间白膜层，PBS洗涤3次后，接种于细胞培养瓶内，置于体积分数5% CO₂、37 ℃、饱和湿度孵箱内原代培养，倒置相差显微镜观察细胞并照像。5 d首次换液，此后每3 d换液1次。当细胞单层生长密度达80%后用0.25%胰酶消化，按1∶3的比例传代接种，标记P1，培养基逐渐递减胎牛血清至10%。

骨髓间充质干细胞的鉴定：取处于对数生长期第3代骨髓间充质干细胞，消化制成悬液，离心弃上清后加入 2.5 mL培养基重悬后分为5支，其中1支为空白对照，其余4支加入10 µL的小鼠抗兔CD45-FITC、CD44-FITC、CD29-FITC、CD34-FITC抗体，取样枪吹打均匀放置 20 min，PBS洗液漂洗2次，分别加入0.5 mL PBS洗液重悬，移入专用测试管，流式细胞仪检测分析细胞表面抗原表达。

髓核细胞的分离、培养：无菌条件下取出上述大白兔胸腰段脊柱，剔除周围组织，切开纤维环取出髓核组织并剪碎，PBS洗涤后加入0.25%胰酶37 ℃浴箱中消化30 min，1 000 r/min离心5 min(离心半径15 cm)，弃上清，PBS洗涤后加入0.3%Ⅱ型胶原酶37 ℃浴箱中消化3 h，PBS洗涤后以100 μm滤网滤过，1 000 r/min离心 5 min(离心半径15 cm)，弃上清，加入培养液吹打制成细胞悬液接种于细胞培养瓶培养，5 d首次换液，此后每3 d换液1次，倒置相差显微镜下观察细胞生长并传代、标记。

共培养及生物诱导体系的建立：在Transwell 12孔板下层接种第3代骨髓间充质干细胞，部分培养皿在接种细胞前预置细胞玻片以利于后期进行染色，在Transwell 12孔板上层小室内接种第3代髓核细胞，骨髓间充质干细胞与髓核细胞的比例为1∶1^[12]。加入不含血清的诱导培养液，即高糖DMEM培养基含1 μg/L 转化生长因子β1、1×10^-⁷ mol/L地塞米松、6.25 mg/L胰岛素、50 mg/L维生素C。对照组取同代数骨髓间充质干细胞接种于Transwell 12孔板下层，加入不含血清高糖DMEM培养基。置于37 ℃，体积分数5%CO₂，饱和湿度孵箱培养，3 d换液1次。

细胞形态观察：取出共培养诱导21 d后的细胞爬片^[13]，40 g/L多聚甲醛固定，常规苏木精-伊红染色，常规进行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色，脱水，透明，中性树脂封固。

Ⅱ型胶原mRNA的检测：收集共培养诱导21 d各孔细胞，Trizol裂解细胞后提取总RNA，测定其浓度，将其反转录为cDNA，进行PCR扩增。查阅相关文献^[13]，定制上海生工合成的引物片段，其中Ⅱ型胶原mRNA检测片段长度为558 bp，引物序列为上游ACG CCA CGC TCA AGT CCC TCA A，下游为TGT GTT TCG TGG AGC CAT CCT G，其RT-PCR反应条件为94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共进行32个循环，72 ℃再延伸10 min；内参β-actin片段长度为225 bp，上游序列为TCA CCA TGG ATG ATG ATA TCG C，下游为CGT GCT CGA TGG GGT ACT TCA，其RT-PCR反应条件为94 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共进行28个循环，72 ℃再延伸10 min。

上述反应所获得PCR产物经2%琼脂凝胶电泳、图像分析系统进行扫描分析。

主要观察指标：经髓核细胞非接触共培养结合转化生长因子β1诱导剂后，骨髓间充质干细胞的形态变化及Ⅱ型胶原mRNA表达情况。

讨论

椎间盘退变在骨科临床实践中较为常见，易引发腰腿痛。目前对其采用的保守治疗和手术等治疗方法虽在一定程度上缓解患者痛苦，但皆存在局限性，即不能从根本上修复椎间盘髓核细胞退变等原有组织生理状态^[14-15]。外科治疗又往往因改变脊柱结构生物力学，带来加快邻近椎体进行性退变等并发症^[16]。

采用组织工程技术，对退变椎间盘进行生物细胞学的修复和功能重建成为近年来脊柱外科基础研究中的热点和重点之一。Meisel等^[17]利用人自体髓核细胞体外扩增后微创注入原椎间隙，发现可推迟其间隙退变。Watanabe等^[18]在兔子中同种异体移植髓核细胞取得同等效应。相对于髓核细胞的取材难、创伤大、来源局限等不足，骨髓间充质干细胞具有来源多样、易于分离、取材方便、多向分化、体外增殖能力强等优点，逐渐成为髓核组织工程最常用的种子细胞之一。李军芳等^[19]的研究指出人骨髓间充质干细胞体内移植无显著成瘤性且对各脏器无明显形态学损伤，提示其移植安全系数有一定保证。

转化生长因子β是一多功能蛋白质，可以影响多种细胞的生长，分化、细胞凋亡及免疫调节等功能，广泛存在于动物正常组织细胞及转化细胞中，人体内几乎所有细胞均可产生转化生长因子β。国内的韩成龙等^{[13, 20]}采用模拟微重力下转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化，发现骨髓间充质干细胞蛋白聚糖与Ⅱ型胶原蛋白水平明显高，说明转化生长因子β1能提高大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化类髓核的数量，从而使骨髓间充质干细胞发挥更高的治疗效率。吴健等^[21]观察可注射型纤维蛋白凝胶转化生长因子β1复合骨髓间充质干细胞移植抑制椎间盘退变的可行性，发现治疗后新西兰大白兔的椎间隙高度下降较缓慢，髓核细胞数量及Ⅱ型胶原含量增多，细胞凋亡率下降，说明骨髓间充质干细胞联合纤维蛋白凝胶转化生长因子β1能很好抑制椎间盘退变。

国外各学者分别单独将骨髓间充质干细胞处于缺氧并含有转化生长因子β1的特定环境中诱导或与髓核细胞共培养使其分化为类髓核细胞的研究^[22-23]。刘连江等^[24]在研究中对比了转化生长因子β1生物诱导与共培养诱导的效应，提出髓核细胞共培养组较单独的细胞因子组效应更强。邵建树等^[25]进行兔骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养，发现骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养时骨髓间充质干细胞可通过表达转化生长因子β1、血小板衍化生长因子等细胞因子发挥其营养效应，激活髓核细胞，促进其增殖及细胞外基质的合成；在共培养后期，骨髓间充质干细胞在髓核局部微环境下，可发挥其类髓核分化效应，开始合成蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白。陈亮等^[26]在Transwel 非接触共培养条件下进行骨髓间充质干细胞及髓核细胞复合藻酸盐的共培养，发现髓核细胞能诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向分化。

实验采用Transwell培养皿构建骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养体系的同时加入转化生长因子β1为主的生物诱导剂，以期模拟椎间盘退变的早期病变中尚有部分髓核细胞存活的环境，采用生物因子促进骨髓间充质干细胞诱导分化并修复椎间盘退变的环境。结果离培养的兔骨髓间充质干细胞细胞表面CD29和CD44表达阳性，CD34、CD45的细胞表达阴性，说明培养的为骨髓间充质干细胞并均一性较好。与髓核细胞共培养诱导21 d后，可观察到骨髓间充质干细胞形态向多角形类圆形转变，胞质中分泌Ⅱ型胶原颗粒明显增多，细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达明显增高。结果说明骨髓间充质干细胞在与髓核细胞共培养加生物诱导剂条件下可成功诱导分化为类髓核细胞。

刘连江等^[24]采用的种子细胞为脂肪间充质干细胞并将2种细胞分别制成细胞微球三维培养，而作者这次研究采用骨髓间充质干细胞并构建单层共培养、细胞非接触同时联合生物诱导的方法。作者认为，除了联合不同诱导机制使其效应增强，细胞微团的三维培养方法既减少细胞运动中其相互接触的机会，又同时带来微团中心细胞液化、坏死等情况，获取细胞数量有限。Transwell培养皿为单层共培养条件加生物诱导体系，聚碳酸酯透水膜可分隔不同细胞避免分选困难，又能使细胞因子相互流通，并可通过细胞运动中缝隙连接等接触促进诱导分化，同时单层接种的骨髓间充质干细胞适用于染色等简单可行的方法检验其分化效应。

总之，实验表明骨髓间充质干细胞在与髓核细胞共培养体系的同时加入转化生长因子β1的诱导体系下可分化为类髓核细胞，为进一步动物体内实验提供了更充分的实验依据。当然，骨髓间充质干细胞体外分化为类髓核细胞的机制复杂，目前尚不能充分认识其具体调控机制。此外，体内环境较体外环境更为敏感复杂、所诱导的类髓核细胞生物性能和时效性等问题尚需后续深入研究。

髓核细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化

Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into nucleus pulposus-like cells after co-culture with nucleus pulposus cells

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[1]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta 分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(在线): 3-.
[2]	涂鹏程, 郭杨, 马勇, 潘娅岚, 郑苏阳, 王礼宁, 吴承杰, 过俊杰. 威灵仙提取物可促进体外牵张应力环境下软骨细胞表型的维持[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1182-1187.
[3]	占龙, 孟农钦, 农桔安, 李小峰, 杨渊, 余雪. 原儿茶酸可减轻退变软骨细胞的损伤[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1149-1154.
[4]	陈江, 肖辉灯, 孙旗, 张帆, 祝永刚, 刘志超, 郭菲宇, 柳根哲. 人椎间盘髓核细胞增殖活性与益肾活血通络方的干预调控[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1200-1206.
[5]	陈劲松, 王中汉, 常非, 刘贺. 多种特殊状态下关节软骨缺损修复的组织工程技术[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1272-1279.
[6]	乔雪松, 陈霓, 杨风英, 牛燕媚. 运动调控间充质干细胞来源骨髓脂肪细胞的作用及前景[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1293-1298.
[7]	张圣敏, 刘超. 生物支架材料诱导脂肪来源干细胞成骨分化的最新热点[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1107-1116.
[8]	王田田, 王建忠. 骨髓间充质干细胞治疗早期股骨头坏死的应用与前景 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1117-1122.
[9]	王张玲, 余丽梅, 赵春华. 间充质干细胞线粒体转移治疗修复组织损伤的作用 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1123-1129.
[10]	邓俊豪, 李苗, 张里程, 唐佩福. 三维悬滴法培养间充质干细胞在组织损伤修复中的应用及优势[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1101-1106.
[11]	任春梅, 刘玉芳, 许诺, 邵苗苗, 何建亚, 李晓杰. 非编码RNAs在人牙髓干细胞中的调控作用及机制 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1130-1137.
[12]	黄文文, 李硕, 侯宗柳, 王文举. 炎症性肠病发病机制及间充质干细胞治疗的作用与问题 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1138-1143.
[13]	何林, 白晋伟, 苏伟. 基于Scopus数据分析多能干细胞研究领域的文章、作者及高影响力机构[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1144-1148.
[14]	刘春栋, 申晓青, 张艳丽, 张小根, 吴补领. 钛表面锶改性后骨髓基质干细胞黏附、迁移、增殖及成骨相关基因的表达[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1009-1015.
[15]	林明, 潘金勇, 张惠荣. 敲除NIPBL基因可下调小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1002-1008.