转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞的分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.49.017

摘要/Abstract

摘要：

背景：颞下关节盘软骨缺损修复在口腔临床上仍然是较大的挑战，具有多向分化潜能的脂肪间充质干细胞为成纤维软骨类组织修复带来了希望。目前使用转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化的研究很少。
目的：观察转化生长因子β3对脂肪间充质干细胞生长形貌及向成纤维软骨分化的影响。
方法：采用转化生长因子β3诱导SD大鼠脂肪间充质干细胞，观察成纤维软骨细胞分化的细胞形态，组织学和免疫荧光染色等方法检测脂肪间充质干细胞产生的细胞外基质Ⅰ，Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达情况，评价脂肪间充质干细胞作为纤维软骨组织工程种子细胞的可行性。
结果与结论：倒置荧光显微镜观察结果显示脂经转化生长因子β3生长因子诱导之后，细胞有明显的聚集生长现象，形态呈多角形、多边形，细胞外基质分泌增多。阿利新蓝染色结果表明，经转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞显示明显的深蓝色，表明脂肪间充质干细胞合成了大量的糖胺聚糖。免疫染色结果表明，在转化生长因子β3 诱导下，脂肪间充质干细胞合成Ⅰ，Ⅱ型胶原细胞外基质。提示转化生长因子β3可诱导脂肪间充质干细胞向成纤维软骨样细胞分化，也意味着脂肪间充质干细胞具有作为工程化纤维软骨种子细胞的潜能。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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关键词: 干细胞, 干细胞因子及调控因子, 转化生长因子β3, 脂肪间充质干细胞, 纤维软骨, 组织工程, 干细胞图片文章

Abstract:

BACKGROUND: The repair of temporomandibular joint disc is still a great clinical challenge. Pluripotent adipose-derived mesenchymal stem cells bring a hope for fibrocartilage tissue repair. Up to now, there are few studies concerning transforming growth factor-β3 to induce differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells into fibrochondrocytes.
OBJECTIVE: To observe the growth and morphology of adipose-derived mesenchymal stem cells under the induction of transforming growth factor-β3.
METHODS: We observed the morphology of fibrochondrocytes differentiated from adipose-derived mesenchymal stem cells under the induction of transforming growth factor-β3. Histological and immunofluorescence staining were employed to detect the expression of extracellular matrix Ⅰ, Ⅱ collagens and proteoglycansthe produced by adipose-derived mesenchymal stem cells. We also evaluated the feasibility of adipose-derived mesenchymal stem cells as seed cells for fibrocartilage tissue engineering.
RESULTS AND CONCLUSION: Under the inverted fluorescence microscope, induced cells showed obvious aggregation growth, polygonal shape, and increased secretion of extracellular matrix. Alcian blue staining results showed that under the induction of transforming growth factor-β3, adipose-derived mesenchymal stem cells exhibited the distinctly deep blue, indicating a large number of glycosaminoglycan was synthesized. Immunostaining results showed that under the induction of transforming growth factor β3, adipose-derived mesenchymal stem cells synthesized extracellular matrix Ⅰ, Ⅱ collagen. These findings suggest that transforming growth factor β3 can induce adipose-derived mesenchymal stem cells to differentiate into fibrouscartilage-like cells, and that adipose-derived mesenchymal stem cells can serve as seed cells for fibrocartilage tissue engineering.

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Key words: stem cells, transforming growth factor beta3, adipose tissue, mesenchymal stem cells, fibrocartilage

中图分类号:

R394.2

雷胜男，樊星. 转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(49): 8570-8575.

Lei Sheng-nan, Fan Xing. Transforming growth factor-beta 3 induces differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells into fibrochondrocytes[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(49): 8570-8575.

图/表（结果） 5

2.1 诱导分化前后的细胞形态变化 倒置荧光显微镜观察结果显示脂肪间充质干细胞在转化生长因子β3诱导下呈现显著性不同的形貌特征。图1显示在未加入转化生长因子β3时，细胞呈聚集生长，细胞外基质分泌较少；经转化生长因子β3生长因子诱导之后，细胞有明显的聚集生长现象，形态呈多角形、多边形，细胞外基质分泌增多，见图2。

2.2 阿利新蓝染色 见图3，4。

阿利新蓝染色结果显示，脂肪间充质干细胞在未经转化生长因子β3诱导时，未见明显的蓝色，空泡多见，见图3。而经转化生长因子β3诱导后脂肪间充质干细胞染色呈蓝色，并且可见明显的异染性着色，空泡少见，见图4。这表明脂肪间充质干细胞在转化生长因子β3诱导下能合成大量的糖胺聚糖。

2.3 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色 见图5-8。

图5-8显示了合成胶原基质的免疫组织化学染色。Ⅰ型胶原免疫化学细胞染色结果显示，在没有转化生长因子β3的诱导下，没有明显的Ⅰ型胶原合成，表达不明显，胞浆呈浅黄色，而胞核染色为蓝色，见图5；在转化生长因子β3的诱导下，Ⅰ型胶原免疫化学细胞染色显示染色结果明显，呈强阳性，胞浆呈明显的棕褐色，胞核染色呈蓝色，且在Ⅰ型胶原表达越密集的区域染色越强，见图7。

对于Ⅱ型胶原的染色结果显示，在对照组中，Ⅱ型胶原免疫化学染色阴性，细胞及细胞外基质均少见，偶见胞浆呈浅黄色，见图6；而在转化生长因子β3诱导组的细胞染色显示，Ⅱ型胶原合成较多，细胞外基质内可见棕黄色颗粒，胞核蓝染，见图8。

参考文献

[1] NIDCR. TMJ disorders, vol. 2010. Bethesda, MD: NIDCR; 2006.

[2] 郝伟,胡蕴玉,魏义勇,等.兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及成骨诱导分化研究[J].中国矫形外科杂志,2006,14(21):1657-1660.

[3] Xu Y, Balooeh G, Chiou M, et al.Analysis of material properties ofearly chondrogenic differentiated adipose-derived stromal cells(ASC) using an in vitro three-dimensional mieromass culture system. Bioehem Biophys Res Commun. 2007;2:311-316.

[4] Lu CH, Lin KJ, Chiu HY, et al. Improved chondrogenesis and engineered cartilage formation from TGF-β3-expressing adipose-derived stem cells cultured in the rotating-shaft bioreactor. Tissue Eng Part A. 2012;18:2114-2124.

[5] Lee JS, Im GI. Influence of chondrocytes on the chondrogenic differentiation of adipose stem cells. Tissue Eng Part A. 2010; 16:3569-3577.

[6] Rich JT, Rosová I, Nolta JA, et al. Upregulation of Runx2 and Osterix duringin vitro chondrogenesis of human adipose-derived stromal cells. Biochem Biophys Res Commun. 2008;372:230-235.

[7] Mochizuki T,Muneta T,Sakaguchi Y ,et al. Higher chondrogenic potential of fibrous synovium and adipose synovium-derived cells compared with subcutaneous fat-derived cells:Distinguishing properties of mesenchynml stem cells in humans.Arthritis Rheum. 2006;54(3):843-853.

[8] 胡生锁,胡蕴玉,魏义勇,等.血清浓度对脂肪成体干细胞向软骨细胞分化的影响[J].中国矫形外科杂志,2007,15(11):860-862.

[9] Pangborn CA, Athanasiou KA. Effects of growth factors on meniscal fibrochondrocytes. Tissue Eng. 2005;11:1141-1148.

[10] Kalpakci KN, Kim EJ, Athanasiou KA. Assessment of growth factor treatment on fibrochondrocyte and chondrocyte co-cultures for TMJ fibrocartilage engineering. Acta Biomater. 2011;7:1710-1718.

[11] Huey DJ, Athanasiou KA. Maturational growth of self-assembled, functional menisci as a result of TGF-beta1 and enzymatic hondroitinase-ABC stimulation. Biomaterials. 2011;32:2052-2058.

[12] Vacanti CA, Vacanti JP. Bone and cartilage reconstruction with tissue engineering approaches. Otolaryngol Clin North Am. 1994;27:263-276.

[13] Vacanti CA, Vacanti JP. Bone and cartilage reconstruction with tissue engineering approaches. Otolaryngol Clin North Am. 1994;27:263-276.

[14] Yarak S, Okamoto OK. Human adipose-derived stem cells: current challenges and clinical perspectives. An Bras Dermatol. 2010;85:647-656.

[15] Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, et al. Muhilineage cells from human adipose tissue: implications for cell based therapies. Tissue Eng. 2001;7(2):211-228.

[16] Fraser JK, Wulur I, Alfonso Z, et al.Fat tissue: an under-appreciated source of stem cells for biotechnology. Trends Biotechnol. 2006;24:150-154.

[17] Fraser JK, Zhu M, Wulur I, et al. Adipose-derived stem cells. Methods Mol Biol. 2008;449:59-67.

[18] Brayfield C,Marra K,Rnbin JP.Adipose stem cells for soft tissue regeneration. Handchir M ikrochir Plast Chir. 2010;42: 124-128.

[19] Malladi P,Xu Y,Chiou M, et al.Efect of reduced oxygen tension on chondrogenesis and osteogenesis in adipose-derived mesenchymal cells. Am J Physiol Cell Physiol. 2006;290: C1139-1146.

[20] Huang JI,Zuk PA,Jones NF,et al.Chondrogenic potential of multipotential cells from human adipose tissue. Plast Reconstr Surg. 2004;113:585-594.

[21] Hematti P.Role of mesenchymal stromal cells in solid organ transplantation.Transplant Rev(Orlando). 2008;22:262-273.

[22] Abdallah BM,Kassem M. The use of mesenchymal(skeletal) stem cells for treatment of degenerative diseases: current status and future perspectives. J Cell Physiol. 2009;218:9-12.

[23] Worster AA, Nixon AJ, Brower-Toland BD, et al.Effect of fransforming growth factor beta1 on chondrogenic differentiation of cultured equine mesenchymal stem cells. Am J Vet Res. 2000;61:1003-1010.

[24] Lieb E,Vogel T, Milz S,et al.Effects of transforming growth factor beta1 on bonelike tissue formation in three-dimensional cell culture.II: Osteoblastic differentiation.Tissue Eng. 2004;10: 1414-1425.

引言

由于成纤维软骨缺乏自我修复能力，颞下颌关节盘软骨损伤的修复一直是口腔科医生面临的巨大挑战^[1]。近年来纤维软骨组织工程技术的发展为解决这一难题提供了新的方法。但由于成纤维软骨细胞来源少，增殖有限，不能满足临床需要。众所周知，干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。

脂肪来源的间充质干细胞，由于具有强大增殖和多向分化能力，且易于获得，已成为纤维软骨组织工程研究的重要细胞来源^[2-4]。脂肪组织来源的脂肪干细胞，与其它成体干细胞一样具有自我更新和多向分化的能力，在适宜诱导条件下经诱导可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等^[5-6]。因此诱导脂肪间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化，合成与纤维软骨相似的细胞外基质，有可能是纤维软骨组织工程中解决细胞源问题的重要途径。脂肪干细胞在培养过程中，同样需要保持细胞增殖活性和多向分化潜能。很明显，培养条件是影响脂肪干细胞的重要因素。多次传代后的脂肪干细胞仍能保持向软骨分化的能力。Liu等研究表明，脂肪干细胞向软骨分化后，长时间培养，其软骨细胞表型稳定。有研究发现，不同部位来源的脂肪干细胞诱导成软骨细胞能力不同，关节周围组织来源的诱导成软骨的能力更强^[7]。一般认为，低体积分数胎牛血清有利于脂肪干细胞向软骨细胞分化。但最近国内有学者报道，含体积分数10%胎牛血清的软骨诱导液更利于脂肪干细胞向软骨细胞方向增殖和分化。研究还发现，高密度种植更利于脂肪干细胞向软骨细胞分化，这可能因为密集种植脂肪干细胞，减少了细胞间的间隔，使细胞间相互作用增加而促进脂肪干细胞向软骨细胞分化^[8]。

转化生长因子已广泛应用于脂肪源干细胞的成纤维软骨分化^[9]。国内外许多研究表明使用转化生长因子β1可以有效地诱导干细胞向软骨细胞分化^[10-11]。但使用转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化的研究却很少见。

实验采用聚集体培养方法使数量较多的SD大鼠脂肪间充质干细胞集合在一起，选用转化生长因子β3作用于脂肪间充质干细胞，观察脂肪间充质干细胞的分化和生物合成情况，充分发挥脂肪间充质干细胞的自分泌及旁分泌作用，有可能促进纤维软骨细胞胞外基质分泌以及表型的表达；通过观察细胞的形态变化，组织学和免疫荧光染色等检测脂肪间充质干细胞产生细胞外基质(包括Ⅰ/Ⅱ型胶原和蛋白多糖)的情况，初步评价脂肪间充质干细胞作为工程化纤维软骨种子细胞的可行性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
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材料方法

设计：细胞学体外实验。

材料：

转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化实验的主要试剂及仪器：

方法：

实验试剂配制：

PBS配制：用微量电子天平分别称取0.8 g NaCl、 2 g KCl、0.2 g KH₂PO₄、3.479 g Na₂HPO₄•12H₂O，加入1 000 mL三蒸水中，充分搅拌4 h后分装至250 mL已灭菌的生理盐水瓶中，封口，高温高压灭菌，待温度降至室温后，标记，于4 ℃冰箱保存。

双抗溶液配制：在超净工作台内，用无菌注射器加4 mL无菌生理盐水于青霉素(8×10⁵ U单位/瓶)内，加5 mL无菌生理盐水于链霉素(1×10⁶ U/瓶)内，充分溶解后各吸取4 mL加入72 mL无菌生理盐水瓶中，在无菌条件下分装至已消毒灭菌的小青瓶内，于-20 ℃冰箱冻存。

胎牛血清灭活：将-20 ℃冻存的胎牛血清置于4 ℃冰箱中过夜解冻，完全溶解后放入56 ℃恒温水浴箱中温浴灭活，每隔5 min振荡1次，30 min后取出，待降至室温后，在无菌条件下分装至已消毒灭菌的小青瓶内，于-20 ℃冰箱冻存。

完全培养液配制：量取900 mL RPMI 1640培养基、100 mL已灭活的胎牛血清、10 mL双抗溶液和10 mL谷氨酰胺，充分混合制成完全培养液。完全培养液存放两周时需重新添加1%的谷氨酰胺。

0.25%胰蛋白酶配制：用微量电子天平称取0.25 g胰蛋白酶，溶解在1 000 mL的PBS溶液中，用磁力搅拌机搅拌2 h，在超净台内用注射滤器(0.22 μm微孔滤膜)过滤除菌，分装至已消毒灭菌的小青瓶内，于-20 ℃冰箱冻存。

细胞冻存液配制：量取1 mL DMSO、4 mL完全培养液和5 mL胎牛血清，充分混匀后于-20 ℃冰箱冻存。

SD大鼠脂肪间充质干细胞的培养：从液氮罐中取出冻存有SD大鼠脂肪间充质干细胞的冻存管，立即放入 37 ℃水浴中，并轻轻摇动令其内容尽快融化。从 37 ℃水浴中取出冻存管，用体积分数75%乙醇消毒后再开启，用吸管吸出细胞悬液注入离心管并加入10倍以上的完全培养液，混合后于800 r/min离心5 min，除去上清液后再重复用完全培养液清洗1次。脂肪间充质干细胞解冻后种植于细胞培养瓶中，加入体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液，置于37 ℃，体积分数5%CO₂的培养箱内培养。48 h首次换液，以后每隔2 d换液1次，逐渐除去非贴壁细胞，5-7 d后细胞达到融合，当细胞融合至 80%-90%时加入0.25%胰酶消化液，按1∶3的比例传代。

SD大鼠脂肪间充质干细胞计数：用体积分数75%乙醇清洁计数板及专用盖玻片，轻轻拭干，备用。用0.25%胰蛋白酶在37 ℃下消化细胞1.0-1.5 min，得到单细胞悬液，吸取少量单细胞悬液在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液，使细胞悬液充满计数板和盖玻片之间但不溢入计数板两侧的玻璃槽内。在显微镜下，用10倍物镜观察计数板四角大方格中的细胞数。细胞压中线时，按照“计上不计下，计左不计右”的原则，将计算结果代入下式，细胞数/mL= 4大格细胞总数/4×10⁴，得出细胞浓度。

转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞成纤维软骨细胞分化的细胞形态观察：选择第3代细胞以1.2×10⁹ L^-¹接种于离心管中进行三维培养。随机分为2组：第1组加入含转化生长因子β3 10 mg/L的成纤维软骨诱导液(含体积分数10%胎牛血清和高糖DMEM培养基)，诱导分化培养14 d；第2组加入不含转化生长因子β3的基础培养液培养作为对照组。通过显微镜动态观察细胞生长形貌。

阿利新蓝染色：细胞培养14 d后，采用40 g/L多聚甲醛固定细胞后石蜡包埋组织制作显微切片，阿利新蓝染色液(50-60 ℃)浸染30 min。蒸馏水终止染色。体积分数95%乙醇分化10 s，显微镜下观察染色结果。

免疫组织化学染色：消化细胞种植在离心管中进行培养。细胞数量为1.2×10⁹ L^-¹，每2 d换培养液，40 g/L多聚甲醛固定后石蜡包埋组织制作显微切片，加入300 μL穿透液(0.5%TritonX-100-0.01 mol/L PBS) 穿透30 min。吸去穿透液，加入正常山羊血清封闭液140 μL，封闭 50 min后，吸去封闭血清，分别加入100 μL Ⅰ型胶原兔抗鼠(Rabbit Anti-CollagenⅠ，1∶200，Bioss，bs-0578R)，在保湿盒中4 ℃孵育过夜。Ⅱ型胶原兔抗鼠抗体(Rabbit Anti-Collagen Ⅱ，1∶200，Bioss，bs-0709R)，在保湿盒中37 ℃孵育1 h。吸出抗体溶液后加入Cy3标记的羊抗兔抗体IgG (Cy3-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)，Jackson，115-165-003)。IgG抗体溶液用0.5%BSA按1:100稀释，分别加入100 μL，37 ℃避光孵育1 h，然后取出IgG溶液。加入140 μL Hoechest染液(0.5 mg/L)，室温避光孵育30 min。吸去染液，加入PBS洗涤；最后添加PBS，采用荧光倒置显微镜观察各抗体表达情况。

主要观察指标：观察转化生长因子β3诱导SD大鼠脂肪间充质干细胞成纤维软骨细胞分化的细胞形态，组织学和免疫荧光染色等方法检测脂肪间充质干细胞产生的细胞外基质Ⅰ，Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达情况。

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讨论

关节软骨损伤的修复仍是临床面临的挑战之一。传统的治疗方法如软骨移植及关节置换并不能完全恢复软骨的结构，组织工程学的兴起为关节软骨损伤治疗提供了新的选择^[12]。关节软骨损伤的修复仍是临床面临的挑战之一。传统的治疗方法如软骨移植及关节置换并不能完全恢复软骨的结构，组织工程学的兴起为关节软骨损伤治疗提供了新的选择^[13]。组织工程软骨的构建中，关键的任务是寻找合适的种子细胞。多能干细胞因为具有多向分化能力^[14]，近20年来成为研究的热点。Zuk等^[15]于2001年在人体皮下脂肪组织中提取到了具有多向分化能力的细胞，并称之为脂肪来源的成体干细胞(脂肪组织提取细胞或脂肪间充质干细胞)。实验表明吸脂手术吸取的每100 mL的脂肪组织中，脂肪间充质干细胞的数量相当于等量骨髓中骨髓间充质干细胞的40倍，且成纤维细胞集落形成单位试验中表明，脂肪间充质干细胞中干细胞数目至少是骨髓的500多倍^[16-17]，而且脂肪间充质干细胞比其他的干细胞分化时间要短，是目前生长最快的干细胞^[18]，因此有望成为优秀的纤维软骨组织工程种子细胞。

作为组织工程的种子细胞，现认为应用于再生医学或组织工程的理想干细胞必须符合以下条件：含量丰富；分离方法无伤害性；多分化潜能具有可调控性和可再生性；自体或异体移植具有高效性和安全性；具有符合目前医疗实践指南的操作标准。已知脂肪干细胞含量丰富，分离方法简单，吸脂安全，对患者伤害小，脂肪组织易再生，可反复获取。这已经预示了脂肪干细胞具有广泛的应用前景。但是，由于体外不能充分诱导脂肪干细胞的分化，且分化后的细胞功能与正常成熟细胞存在差异。如何高效、廉价、安全的诱导脂肪干细胞分化和应用是目前急需解决的难题。现多数脂肪干细胞的研究为体外试验，对于体内微环境特别是病理状态下的微环境与脂肪干细胞的相互作用，以及脂肪干细胞如何被调控定向分化，几乎一无所知，而这恰是理解体内脂肪干细胞作用机制的关键所在。体外培养条件下脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞的分化受多种因素的影响，如细胞培养基、细胞浓度、细胞因子、空间组织以及机械力等^[19-20]。目前对干细胞的定向分化和扩增尚缺乏有力的调控手段，干细胞作为移植物定向增殖分化为器官^[21]，用于组织损伤修复的技术瓶颈成为阻碍其进入临床的难题^[22]。

转化生长因子β系列生长因子是一族具有多种功能的多肽，它能够促进细胞增殖，调节细胞分化，促进细胞合成并分泌细胞外基质^[23]。胚胎形成期可诱导原始的间充质干细胞分化形成软骨组织。所有转化生长因子β家族成员都具有一些共同的结构特征，是由多种细胞和组织产生的一类同源二聚体多肽分子，相对分子质量为25 000，每条多肽链含110-140个氨基酸残基。所有转化生长因子β相关因子显示与转化生长因子β3的序列相似性，是转化生长因子β超家族的一员，通过转化生长因子β受体及其细胞内信号系统将信号传递到细胞核内而起到多种不同的生理调节作用。转化生长因子β3是一种具有双向调节作用的生长因子。关节软骨合成转化生长因子β3，以无活性的形式贮存在基质，能被局部下降的pH值和蛋白酶激活，转化生长因子β3作用于间充质来源的细胞，可促进软骨细胞增生、分化和蛋白质合成^[24]。

组织学实验结果表明，经转化生长因子β3作用后，脂肪间充质干细胞开始向成纤维细胞样细胞分化。阿利新蓝染色，实验组为阳性，表明诱导后细胞有合成糖胺聚糖的能力。免疫组织化学染色结果显示Ⅰ，Ⅱ型胶原呈强阳性，表明诱导后的细胞产生胶原的能力明显增强。

实验在体外聚集体培养条件下证实了脂肪间充质干细胞可以在转化生长因子β3的作用下，向成纤维细胞样细胞分化，能够合成糖胺聚糖和Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原，细胞形成许多有功能的聚集体，这些聚集体中可能具有接近的细胞-细胞接触，且形成类似于体内组织的结构，因而表现出比早先单层贴壁培养的细胞更好的生理功能。说明经过适当微环境诱导，脂肪间充质干细胞可以向纤维软骨细胞方向分化，有望成为纤维软骨组织工程的种子细胞。