脐血干细胞

过表达促红细胞生成素脐带间充质干细胞抑制缺血缺氧SH-SY5Y细胞凋亡及机制

• 图5｜REST缺失导致SH-SY5Y细胞凋亡增加，H3K36me3峰度下调

  

  结果：为了明确EPO-MSCs通过调控REST的神经保护机制，应用慢病毒载体感染构建稳定敲低REST的SH-SY5Y细胞。经流式细胞术分析，约99.24%与99.33%的慢病毒转染的SH-SY5Y细胞为GFP阳性，转染效率高，见图5A，B。RT-qPCR分析证实REST基因在mRNA上的表达水平，pLKO.1-Vector组表达量明显高于pLKO.1-sh1组和pLKO.1-sh2组(P < 0.001)，见图5C。Western blot分析证实REST基因在蛋白上的表达水平，pLKO.1-Vector组表达量明显高于pLKO.1-sh1组和pLKO.1-sh2组(P < 0.01)，见图5D。而EPO-MSCs与NC-MSCs、UC-MSCs的 REST mRNA表达没有明显差异(P > 0.05)，见图5E。
  为了探索转录因子REST在凋亡保护中的作用，该研究将pLKO.1-Vector组和pLKO.1-sh1组细胞缺血缺氧24 h后与EPO-MSCs共培养48 h。流式细胞仪检测结果可见，pLKO.1-sh1组早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率均显著增加(P < 0.001)，见图5F。Western blot分析证实Bcl-2以及H3K36me3在蛋白上的表达水平，pLKO.1-sh1组表达量明显低于pLKO.1-Vector组(P < 0.01)，见图5G，H。
  
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发布日期： 2024-01-23  浏览： 39