脐血干细胞
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图1｜外泌体的鉴定结果
结果：通过慢病毒转染建立了高表达LncRNA H19的UMSCs系(H19-UMSCs)，与未转染UMSCs在相同条件下培养并留取培养上清，通过超速离心法成功提取其中的外泌体(UMSCs-Exos和H19-Exos)。2种外泌体在透射电镜下均呈现出典型的一侧凹陷半球形，见图1A。通过Zetaview仪器分析得出2种外泌体直径约130 nm，见图1B。Western blot检测2种外泌体表达特征蛋白CD63、CD81和TSG1010，不表达Calnexin，见图1C。PCR结果证明H19-Exos中的LncRNA H19水平远远超过对照组，见图1D，这表明UMSCs中高表达的LncRNA H19可以在外泌体中富集并被分泌。通过PKH67绿色荧光染料标记外泌体后与软骨细胞共培养，可以观察到软骨细胞中出现绿色荧光，这表明软骨细胞可以成功摄取2种外泌体，见图1E。上述结果表明H19-Exos拥有和普通Exos一样的典型外泌体特征，并且其中携带丰富的LncRNA H19分子，可被软骨细胞摄取。
图4｜高表达LncRNA H19的脐带间充质干细胞来源外泌体(H19-Exos)对大鼠骨关节炎的治疗作用
结果：如图4A所示，大体观察发现骨关节炎造模组在4周后发生明显的骨关节炎样表现，以软骨剥脱、色泽变暗以及软骨下骨暴露为主要特征；H19-Exos组的大体表现接近正常软骨，仅有小部分软骨损伤；H19-Exos+抑制剂SB-431542组的严重程度介于前两组之间，主要变现为软骨菲薄，部分关节面损伤。如图4B所示，苏木精-伊红染色可见骨关节炎组软骨细胞排列紊乱，主要为纤维组织；H19-Exos组软骨细胞排列整齐均匀；H19-Exos+SB-431542组细胞排列较H19-Exos组紊乱，且细胞数量较少。甲苯胺蓝和COL2A1染色可见H19-Exos组软骨细胞中多糖物质和Ⅱ型胶原含量最高，H19-Exos+SB-431542组软骨细胞中多糖物质和Ⅱ型胶原含量高于骨关节炎组，表明SB-431542部分阻断了H19-Exos对软骨损伤修复的作用。用OARSI评分将上述病理染色结果作半定量分析发现H19-Exos组的骨关节炎表现最轻，与组织学染色结果一致，见图4C。