2.1 实验动物数量分析 24只犬均进入结果分析。 2.2 各组脊髓病理形态学观察结果  高倍光镜：正常对照组及假手术组脊髓前角运动神经元胞体丰满，与周围组织连接紧密，胞膜无皱缩，细胞浆、细胞核染色正常，见图3A。压迫4，8，12，24，24，48 h组未见明显异常改变，压迫72 h组运动神经元体积减小，细胞膜皱缩，与周围组织分离，细胞均质浓染，见图3B；压迫168 h组运动神经元消失，留空白区，见图3C，其相邻头端脊髓切片未见脊髓前角运动神经元形态异常。  电镜观察：假手术组和正常对照组神经元染色质和细胞器未见异常，胶质细胞未见肿胀，髓鞘结构完整。压迫4，8 h组未见明显异常改变；压迫12 h组脊髓组织肿胀；压迫24 h组运动神经元线粒体肿胀，部分空泡化， 髓鞘板层部分结构松散，胶质细胞肿胀，压迫48 h组上述表现进一步加重；压迫72 h组脊髓组织炎性损伤明显，神经元胞核可见染色质边集，电子密度增高，线粒体肿胀明显，嵴断裂、溶解，部分成空腔，粗面内质网脱颗粒，细胞膜结构不完整，连续性中断，可见凋亡小体，见图4A，部分髓鞘板层结构松散，局部溶解，见图4B，胶质细胞轻度肿胀；压迫168 h组脊髓组织多数区域溶解，形成空白区，神经元细胞肿胀明显，核内染色质结构疏松，异染色质边集，细胞器减少，线粒体损伤较前加重，形成空泡，髓鞘板层结构散乱，不完整，轴突成空泡状，胶质细胞明显肿胀，核内染色质溶解，异染色质边集，其相邻上段脊髓仅在压迫72，168 h组可见脊髓组织和胶质细胞肿胀，髓鞘结构松散、紊乱，未见神经元细胞凋亡改变，见图4C。 2.3 TUNEL检测运动神经元凋亡结果 正常对照组及假手术组无脊髓前角运动神经元凋亡，偶见阳性胶质细胞。压迫4，8 h组均未见脊髓前角运动神经元凋亡阳性细胞，压迫12 h组可检出少量阳性细胞，见图5A；压迫72 h组脊髓前角运动神经元凋亡达高峰，压迫168 h组凋亡阳性细胞减少，同时脊髓前角运动神经元细胞数量明显减少，在神经元细胞区域可见多个空白区，见表1。压迫12 h组偶见胶质细胞凋亡阳性细胞，压迫24 h组胶质细胞凋亡阳性细胞开始增多，压迫72 h组达到(5.16±2.37)%，压迫168 h组仍呈增高趋势，达到(7.21±4.06)%，见图5B。   3 讨论 Discussion 神经元胞体在其发出的周围神经纤维损伤后会发生凋亡[1-2]。李浩鹏等[3-5]在动物模型上发现，压迫马尾神经可导致腰骶段脊髓前角运动神经元凋亡。本实验形态学检查发现，马尾神经压迫持续12 h即可见到脊髓组织肿胀，24 h见神经元胞体较大，核周有薄层异染色质边集，线粒体肿胀，部分嵴断裂，粗面内质网扩张；随压迫时间持续，损伤加重，持续压迫72 h，发现细胞肿胀明显，异染色质边集，细胞内部分结构溶解，胞浆密度增高，胞浆内有空泡形式，线粒体肿胀，嵴溶解，粗面内质网脱颗粒，可见到均质浓染的凋亡小体；至压迫持续168 h见脊髓运动神经元数量减少，留下多个空白区，为凋亡神经元被清除后所留下的空位。同时发现随着压迫持续时间的延长，脊髓组织肿胀加重，胶质细胞肿胀明显，髓鞘板层结构溶解，轴突空泡化，轴浆外溢，有炎性损伤特征样改变。 TUNEL检测发现，脊髓前角运动神经元凋亡出现较早，于12 h即可检出阳性细胞，提示凋亡发生在8-12 h且随压迫持续时间的延长，阳性细胞逐渐增加，于压迫72 h到达高峰，168 h则下降，仅检见个别阳性细胞，这似乎是一种矛盾现象。结合形态学检查结果，胶质细胞有肿胀且胶质细胞凋亡晚于神经元细胞，随着损伤加重持续增高，至168 h仍处于升高趋势，认为急性马尾压迫后发生后，脊髓前角运动神经元溃变不仅有原发损伤刺激激活凋亡机制，也有继发性炎性损伤导致凋亡程序的激活。电镜检见少数压迫168 h组神经元细胞核消失，染色质碎片增多，其特征改变更接近于坏死改变，提示随压迫时间延长，继发性炎性损伤进一步加重，甚至导致神经元胞体坏死改变。 各种因素导致马尾神经纤维受压后，局部脑脊液循环受限，马尾神经表面血管受压闭塞，神经纤维轴浆运输受阻，共同导致了神经元胞体营养缺乏，生长因子反馈减少，从而导致神经元凋亡。马尾神经纤维急性压迫损伤导致神经纤维、神经内血管发生广泛水肿等病理变化，压迫神经纤维，造成神经纤维华勒氏变性和脱髓鞘改变；血管受压迂曲、狭窄，小静脉瘀血，发生组织缺血、缺氧和炎症反应；毛细血肿通透性增加，液体大分子物质、各种离子进入神经组织，致使神经内水肿加剧和内环境紊乱，进一步加重神经内血管受压，形成恶性循环，致使神经血运及轴浆运输严重受阻，神经元细胞营养匮乏，代谢产物积聚，使前角运动神经元凋亡。随着压迫时间延长，损伤进一步加重，甚至导致神经元胞体坏死改变。 在实验中发现，胶质细胞凋亡明显较脊髓前角运动神经元晚，且在凋亡压迫持续168 h仍处于高峰状态，而此时恰为继发性炎性损伤的加重期，提示马尾综合征时，凋亡转导信号机制首先通过轴突传递到相应发出段脊髓神经元胞体，导致胞体发生凋亡改变；而胶质细胞的凋亡，则是继发于炎性损伤的一种继发性反应，为炎性因子损伤引起，进一步证明马尾综合征除原发损害外，炎性反应的继发性损伤也在发病机制中处于重要地位。继发性炎性反应引发胶质细胞凋亡，使神经细胞失去支持和营养而易于凋亡。星形胶质细胞彼此连成网络，对神经元起支持作用，可供给神经元葡萄糖，合成和分化神经生长因子，促进神经元成活，可吞噬损伤的细胞碎片，少突胶质细胞直接参与髓鞘形成，研究认为脱髓鞘可能是少突胶质细胞凋亡引发的[6]。小胶质细胞更多存在于灰质中，多分布在神经元附近，可吞噬并清除坏死组织。胶质细胞大量凋亡，使神经元营养、能量缺乏，处于炎性损伤因子环境中更加易于发生凋亡，甚或坏死；髓鞘损伤亦影响其传导功能。实验中发现炎症有向头端波及趋势，这可能是临床上发现脊髓功能恢复中常有上下阶段波动的原因，提示治疗马尾综合征应采用综合性措施，早期去除压迫因素，增加神经营养支持，消除或减轻炎性反应，拮抗凋亡发生机制，保护受损神经元，促进神经元细胞再生等，以期提高临床疗效。 压迫168 h发现组织肿胀，髓鞘板层部分溶解，胶质细胞有凋亡发生，在各压迫组中均未见神经元凋亡发生。胶质细胞支持和营养神经元，位于神经元周围，先于神经元受到继发性炎性因子损害。考虑此损伤为邻近炎性反应损伤波及所致，这也可能与临床上马尾神经综合征术后常有脊髓功能上下节段波动具有相关性，继发性炎性损伤可能是临床恢复欠佳的重要因素。 胶质细胞凋亡明显较脊髓前角运动神经元晚，凋亡在压迫持续168 h仍处于高峰状态，而此时恰为继发性炎性损伤的加重期，提示凋亡转导信号机制首先通过轴突传递到相应发出段脊髓神经元胞体，导致胞体发生凋亡改变；而胶质细胞的凋亡，则是继发性炎性因子损伤引起，进一步证明急性马尾压迫原发损害外，炎性反应的继发性损伤也在发病机制中处于重要地位，马尾神经纤维脱髓鞘将导致神经功能受损。 Li等[7]发现轴浆外溢、轴突空泡化、胶质细胞凋亡，可能是由于压迫区损伤的轴突不能产生存活信号，导致纵向传导体上的胶质细胞凋亡，并持续3周以上。本实验也发现压迫1周时胶质细胞凋亡仍处于高峰，胶质细胞进一步如何变化，对神经元有何影响，是需要进一步探讨的问题。 急性马尾神经压迫后，脊髓前角运动神经元胞体接受轴突逆反馈信息，早期即出现凋亡，压迫持续导致脊髓继发性炎性损伤，随压迫持续时间延长而加重，炎性损伤可向脊髓临近头端组织蔓延。"