骨髓干细胞

    凋亡诱导因子基因敲减对骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的影响
  • 图1|LV-AIF-shRNA慢病毒感染下调骨髓间充质干细胞(BMSCs)中凋亡诱导因子(AIF)的表达

    结果:LV-AIF-shRNA慢病毒感染BMSCs后,绝大部分BMSCs有绿色荧光蛋白的表达,见图1A;流式细胞术检测显示97.7%的BMSCs表达出绿色荧光蛋白,见图1B;Western blot及RT-qPCR检测结果显示LV-AIF-shRNA慢病毒感染后,BMSCs的AIF蛋白及基因表达都显著下降(P < 0.001),见图1C,D

    图2|凋亡诱导因子(AIF)基因敲减促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后的存活

    结果:CCK-8实验检测体外缺血缺氧培养状态下LV-AIF-shRNA病毒感染BMSCs的细胞活力较正常BMSCs显著升高,见图2A;免疫荧光结果显示:模型组小鼠心脏组织中AIF蛋白表达较假手术组明显升高;LV-vector-shRNA组AIF蛋白表达有所减少;与LV-vector-shRNA组相比,LV-AIF-shRNA组AIF蛋白表达进一步减少,见图2B。说明AIF敲减的BMSCs更能减少干细胞移植区域的AIF表达,对增加BMSCs的存活量起到一定的作用。
    SRY基因是雄性动物细胞Y染色体上所携带的特定基因,因此将雄性小鼠BMSCs移植入雌性小鼠体内只要通过RT-qPCR检测SRY基因表达量,便能计算BMSCs移植至心脏组织4周后的存活量,结果显示:LV-AIF-shRNA病毒感染BMSCs移植后在梗死心脏中的存活率较LV-vector-shRNA感染BMSCs移植后在梗死心脏中的存活率升高至3.71倍(P < 0.001),见图2C,D

    图3|凋亡诱导因子(AIF)基因敲减骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植促进急性心肌梗死小鼠心功能恢复

    结果:

       Masson染色结果显示:模型组小鼠有明显蓝色区域,提示纤维化,结合心脏彩超结果提示室壁运动减弱以及射血分数值下降,进一步说明心肌梗死建模成功;LV-vector-shRNA组小鼠纤维化区域减少;与LV-vector-shRNA组相比, LV-AIF-shRNA组小鼠心肌梗死区纤维化程度得到进一步显著改善,见图3A
        TTC染色结果显示:模型组小鼠心脏有明显的组织坏死区域,提示心肌梗死模型建模成功;从梗死面积看,与模型组相比,LV-vector-shRNA组小鼠梗死区域缩小,而注射AIF敲减的BMSCs后还能进一步显著减小梗死范围,见图3B,说明AIF敲减的BMSCs更能通过减少干细胞移植区域的纤维化程度,帮助梗死后的心功能恢复。
    模型组小鼠左室射血分数及左室缩短分数较假手术组均明显下降,说明心肌梗死建模成功。 LV-vector-shRNA组小鼠左室射血分数及左室缩短分数均有恢复;与LV-vector-shRNA组小鼠相比, LV-AIF-shRNA组小鼠左室射血分数及左室缩短分数等心功能指标均有显著改善(P < 0.05),见图3C
    ELISA检测结果显示:与假手术组比较,模型组小鼠脑钠尿肽水平显著升高;与模型组比较,LV-vector-shRNA组小鼠脑钠尿肽上升幅度降低,LV-AIF-shRNA组小鼠脑钠尿肽的升高幅度进一步降低(P < 0.05),见图3D

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  • 发布日期: 2023-11-25  浏览: 60