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    山楂叶总黄酮调控星形胶质细胞治疗脊髓损伤的分子机制
  • 图1|细胞鉴定结果(标尺为100 μm)

    脊髓星形胶质细胞鉴定结果如图1A所示,可见典型星状细胞,阳性率> 90%。脊髓神经元鉴定结果如图1B所示,可见树突轴突交织成网,阳性率> 90%。

    图2|各组细胞生存率及脊髓神经元光镜图

    通过 CCK-8法分别检测TFHL干预脊髓星形胶质细胞48 h和谷氨酸干预脊髓神经元24 h的增殖活性。脊髓星形胶质细胞在TFHL质量浓度为15.625,31.25,62.5,125 μg/mL时细胞存活率与0 μg/mL无显著差异(P > 0.05)。在质量浓度为250,500,1 000 μg/mL时细胞存活率与0 μg/mL有显著差异(P < 0.001),见图2A,故选择125 μg/mL TFHL为干预最佳质量浓度。随着谷氨酸浓度的增加,脊髓神经元生存率总体呈现逐渐减小的趋势,当谷氨酸浓度大于等于100 μmol/L时出现生存率降低(P < 0.05),谷氨酸浓度为200 μmol/L时生存率出现大幅度下降(P < 0.01),且与250,500 μmol/L组无显著差异;为达到最佳损伤效果故选择200 μmol/L为损伤神经元的最佳浓度,见图2B
    光镜下,未损伤神经元胞体完整,体积正常,树突之间交织成网,状态良好。与未损伤脊髓神经元相比,200 μmol/L谷氨酸损伤后,脊髓神经元胞体出现明显回缩,树突出现断裂,部分树突完全断裂,见图2C

    图3|各组脊髓神经元活性氧生成检测结果

    为了研究TFHL干预后脊髓神经元内活性氧的生成情况,对脊髓神经元进行活性氧检测。图3中绿色荧光代表生成的活性氧,可以观察到损伤组荧光强度明显高于对照组,荧光定量分析显示损伤组活性氧生成远高于对照组(P < 0.001),提示脊髓损伤后神经元产生了大量的活性氧。药物组荧光强度低于损伤组但高于对照组,荧光定量分析显示药物组活性氧生成低于损伤组(P < 0.01)但仍高于对照组(P < 0.001),提示TFHL可以降低脊髓损伤后神经元活性氧的产生。


    图6|各组星形胶质细胞β-catenin免疫荧光结果(标尺=50 μm)

    免疫荧光结果显示,损伤组荧光相比对照组增强,药物组β-catenin荧光强度明显高于对照组与损伤组,见图6

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  • 发布日期: 2023-03-31  浏览: 98