脐血干细胞

    低氧预处理脐带间充质干细胞源外泌体抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖
  • 图1|细胞形态及鉴定结果

    结果:经酶消化法所得细胞在培养第2,3天可以观察到有细胞贴壁,换液后细胞呈集落状生长,3 d即可在25 cm2 培养瓶中融合至80%。原代分离的细胞呈细长梭形或三角形,细胞融合到一定程度呈“峰-谷”状,见图1A左图;应用免疫组化法鉴定大鼠肺动脉平滑肌细胞,结果显示细胞被染成黄棕色,显微镜下肺动脉平滑肌细胞呈长梭形,细胞内具有大量肌丝即肌动蛋白,见图1A右图。
    ①经组织贴壁法所得细胞在第14-21天可以观察到有细胞贴壁,组织块周围爬出形态呈梭形的间充质干细胞,见图1B左图,融合至80%呈漩涡状生长,成纤维细胞样,见图1B右图。②成骨诱导分化21 d后,茜素红染色显示钙结节,成脂诱导分化21 d后,油红O染色显示脂肪滴的外观,见图1C。③应用流式细胞仪鉴定干细胞,结果显示人脐带间充质干细胞高表达CD29、CD44、CD90、CD105,几乎不表达CD34、CD45,见图1D。 

    图2|人脐带间充质干细胞来源外泌体形态、粒径分析及表型鉴定结果

    结果:图2A所示,透射电镜观察外泌体如杯口状且直径较为均一,呈圆形或椭圆形,且有膜性微囊泡结构,囊泡内含有致密的云状物质,为外泌体内含物;应用纳米颗粒跟踪分析法检测外泌体粒径,结果显示外泌体直径在30-150 nm之间,平均粒径为81.03 nm。
    应用Western blot 实验检测人脐带间充质干细胞来源外泌体及人脐带间充质干细胞相关蛋白的表达,结果表明,人脐带间充质干细胞来源外泌体CD9,CD63,Tsg101,Alix呈阳性表达,人脐带间充质干细胞不表达以上蛋白,见图2B

    图3|肺动脉平滑肌细胞摄取人脐带间充质干细胞来源外泌体情况(标尺为100 μm)

    结果:应用激光共聚焦显微镜观察外泌体在肺动脉平滑肌细胞中的归巢现象,结果表明,通过PKH26标记的人脐带间充质干细胞来源外泌体可被肺动脉平滑肌细胞摄取且归巢率较高,见图3

    图5|人脐带间充质干细胞来源外泌体对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

    结果:与常氧对照组相比,低氧对照组肺动脉平滑肌细胞增殖数量明显增多,常氧或低氧预处理的外泌体干预均可显著降低低氧诱导的细胞增殖,且低氧预处理的外泌体抑制细胞增殖效果更为明显,经统计学分析,差异有显著性意义,见图5A
    同时,应用Western blot实验检测各组细胞核增殖抗原PCNA的蛋白表达水平,结果表明,与常氧对照组相比,低氧对照组细胞的PCNA表达升高;与低氧对照组相比,低氧+常氧外泌体组PCNA表达水平稍微降低,低氧+低氧外泌体组PCNA表达水平明显降低,经统计学分析,差异有显著性意义,见图5B

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  • 发布日期: 2022-11-29  浏览: 288