肿瘤干细胞

β-catenin基因沉默对肝癌干细胞干性转录因子的影响

• 图1｜HepG2细胞分选前后生长情况

  

  结果：经过多次实验优化，此次先采用免疫磁珠筛选CD133+HepG2细胞，然后又经干细胞培养基诱导、扩增的方案，能达到纯化的预期值。显微镜下观察磁珠分选前后HepG2细胞的生长状态，见图1。与分选前相比，分选后的细胞在倒置荧光显微镜下观察到聚合生长、悬浮成球的现象，并表现为透亮度增强。

  
  

  图4｜β-catenin-shRNA 慢病毒的感染效率(×100)

  

  结果：慢病毒或慢病毒空载体转染CD133+HepG2细胞后，应用RT-PCR方法检测3种RNAi稳定干扰β-catenin的情况，结果显示RNAi-a以及RNAi-c的封闭效果达到90%，见图3，后续实验采用干扰能力最佳的RNAi-c干扰序列。病毒稳定感染获得β-catenin基因沉默的CD133+HepG2细胞(病毒干扰组)和病毒对照CD133+HepG2-shNC细胞(病毒空载组)，转染72 h后通过倒置荧光显微镜观察细胞中病毒所带荧光的发光比例，见图4。此次实验显示β-catenin-shRNA 慢病毒的感染效率约90%，病毒转染效果良好，进行扩增、提纯后用于后续实验。

  
  

  图5｜β-catenin沉默后CD133+HepG2细胞克隆形成情况

  

  结果：利用平板细胞克隆形成实验检测各组CD133+HepG2细胞的增殖情况，见图5。与空白对照组、病毒空载组相比，病毒干扰组的克隆形成能力明显降低。利用流式细胞术检测各组CD133+HepG2细胞的细胞周期，见图6。与空白对照组、病毒空载组相比，病毒干扰组G0/G1期细胞百分比明显增多，S期细胞百分比和G2/M期细胞百分比降低(P < 0.05)，见表2。

  
  

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发布日期： 2022-10-18  浏览： 449