骨髓干细胞
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图1｜TLN1与骨髓间充质干细胞成脂分化呈负性相关
结果：该研究中所使用的骨髓间充质干细胞均符合国际细胞治疗学会规定的标准[13]。将骨髓间充质干细胞进行成脂分化诱导，在0-18 d不同时间点进行油红O染色，结果提示成脂分化水平随时间延长逐渐增强，14 d基本到达高峰，第18天较第14天稍增强，见图1A，因此选择诱导至14 d进行后续研究。 qRT-PCR结果表明在成脂分化过程中TLN1表达逐渐降低，见图1B，进一步分析发现TLN1的mRNA表达水平与成脂分化关键分子PPAR-γ、C/EBP-α表达水平呈显著负相关关系，见图1C。此外，发现TLN1蛋白水平在成脂分化过程中逐渐降低，与qRT-PCR 结果一致，见图1D。上述结果表明TLN1与骨髓间充质干细胞成脂分化功能呈负性相关，可能在骨髓间充质干细胞成脂分化中发挥重要作用。
图2｜敲减TLN1促进骨髓间充质干细胞的成脂分化
结果：通过siRNA敲减TLN1以评估TLN1对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用，该研究中选取的2个siRNA敲减序列均可有效降低骨髓间充质干细胞中TLN1的mRNA和蛋白表达水平，见图2A，B，发现敲减TLN1对骨髓间充质干细胞增殖无明显影响，见图2C。根据油红O染色和定量分析，敲低TLN1显著促进脂肪细胞的形成，见图2D。进一步检测成脂分化中的关键标志物表达水平，发现敲低TLN1后PPAR-γ和C/EBP-α mRNA表达水平升高，见图2E。以上结果表明敲低TLN1可提高骨髓间充质干细胞的成脂分化能力，即TLN1可负调控骨髓间充质干细胞成脂分化。
图4｜激活β-catenin信号通路可逆转TLN1敲减促进骨髓间充质干细胞成脂分化
结果：为证明TLN1是否通过活化β-catenin信号通路调控成脂肪分化，在敲减TLN1的同时加用β-catenin信号通路激活剂WAY-262611，Western blot结果显示WAY-262611可有效激活TLN1敲减组β-catenin信号通路，见图4A。油红O染色和定量分析表明，无添加β-catenin信号通路激活剂时TLN1敲低组骨髓间充质干细胞成脂分化水平高于空载对照组，与前期结果一致，加入激活剂的TLN1敲减组成脂分化水平降低，并与空载对照组无明显差异，见图4B。上述结果提示WAY-262611激活β-catenin信号通路可逆转TLN1敲减促进骨髓间充质干细胞成脂分化，即TLN1敲减通过抑制β-catenin 信号通路活化从而抑制骨髓间充质干细胞成脂分化。