牙髓干细胞

    三维培养人牙周膜干细胞的形态、活性及成骨分化能力
  • 图1|人牙周膜干细胞的形态(比例尺=500 μm)

    结果:原代培养3-5 d,可见梭形细胞自组织块边缘爬出,细胞体积较小,胞体丰满,细胞核清晰可见,细胞呈放射状生长,见图1A。传代后,细胞呈成纤维细胞样,长梭形或纺锤形,漩涡状生长,见图1B


    图3|人牙周膜干细胞的多向分化能力

    结果:成脂诱导21 d后,油红O染色可见大小不等的红色脂滴,见图3A,证实培养细胞具有成脂分化能力。成骨诱导21 d后,茜素红S染色可见红色矿化结节,见图3B,证实细胞具有成骨分化能力。


    图4|琼脂糖微孔及人牙周膜干细胞球体

    结果:琼脂糖培养板每个微孔大小均匀,排列整齐,见图4A。将第3-6代人牙周膜干细胞铺入琼脂糖凝胶微孔后,对细胞聚集体进行了10 d的研究。最初,5 h内人牙周膜干细胞开始聚集,自我聚集形成一堆细胞,直到得到一个球体形状,见图4B;24 h后细胞融合成一个细胞球体,见图4C;随着培养时间增长,干细胞球体直径逐渐缩小,见图4C-F


    图5|人牙周膜干细胞球体随时间推移Live/Dead染色结果

    结果:Live/Dead染色通过测量细胞的酯酶活性和质膜完整性来量化活细胞和死细胞。活细胞产生均匀的绿色荧光,死细胞产生红色荧光。如图5所示,可以看出随着培养时间变长,细胞球体核心死细胞逐渐增多。


    图6|人牙周膜干细胞球体通过丝状肌动蛋白(F-actin,绿色)和细胞核(蓝色)染色的细胞骨架结构

    结果:图6为人牙周膜干细胞球聚集体于3,7,10 d的细胞骨架/细胞核染色结果。丝状肌动蛋白(F-actin)染色可以看出细胞球体细胞骨架在第1周内发生变化,随着时间的推移,微球体紧密,皮层肌动蛋白网络越来越狭窄。


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  • 发布日期: 2022-08-05  浏览: 572