干细胞与外泌体
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图2｜骨髓间充质干细胞的形态及表面标记物的表达
结果：原代细胞最初大小、形态不均，24-48 h后细胞呈放射状，聚集为多个细胞集落，伸出长短不一的突起，未出现融合生长，六七天时长梭形细胞集落呈漩涡状或放射状排列，最后用1∶3的比例传至第3代时获得较为单一的间充质干细胞，见图2A。流式细胞分析显示，第3代骨髓间充质干细胞的表面标志物CD73和CD105呈现高表达，CD45呈现低表达，见图2B。上述结果可以证明培养的第3代形态均一的细胞绝大部分为骨髓间充质干细胞。
图3｜骨髓间充质干细胞来源外泌体的鉴定结果
结果：外泌体提取后，透射电镜下观察显示外泌体呈圆形或椭圆形，见图3A。纳米粒子跟踪分析显示外泌体的峰直径为91.8 nm，在所有颗粒中所占比例为98.4%，颗粒浓度为3.3×106 particles /mL，见图3B。Western blot显示，外泌体显著表达特异性的外泌体表面蛋白CD9和CD63，见图3C。以上结果表明成功提取了来自骨髓间充质干细胞的外泌体。
图5｜各组大鼠的肺组织苏木精-伊红染色及炎症评分
结果：为明确雾化外泌体对慢阻肺模型大鼠肺组织病理学的影响，进行了苏木精-伊红染色和Masson染色。苏木精-伊红染色结果显示，与对照组相比，经过反复的脂多糖和香烟烟雾刺激后的慢阻肺模型组大鼠存在明显的炎症细胞浸润，且炎症细胞多聚集在血管及支气管周围，支气管管腔内可见黏液性血栓，此外，还可观察到肺泡壁变薄过度扩张，部分可见肺泡融合。然而，与模型组相比，经低、中和高剂量外泌体雾化治疗后显著降低了气道炎症和肺泡结构的破坏，其中在低剂量外泌体雾化组中，大鼠肺组织的血管及支气管周围有少量的炎症细胞浸润，未见明显的支气管黏液栓，肺泡壁轻度扩张，且有少量的肺泡融合。尾静脉注射外泌体的治疗效果并不显著，见图5A。根据各组苏木精-伊红染色结果进行了大鼠肺组织炎症评分，见图5B。与对照组相比，模型组大鼠炎症评分明显升高(P < 0.05)。与模型组相比，外泌体雾化组炎症评分显著降低(P < 0.05)，其中低剂量外泌体雾化组炎症评分明显低于外泌体尾静脉注射组(P < 0.05)。
图6｜各组大鼠肺组织Masson染色及胶原沉积分析
结果：为了验证外泌体对慢阻肺大鼠肺组织纤维化的保护作用，应用Masson染色评估胶原沉积情况，见图6。模型组大鼠肺组织的气道周围观察到明显的蓝色胶原纤维，外泌体治疗后显著减少模型大鼠肺内胶原沉积(P < 0.05)，其中低剂量外泌体雾化组气道周围胶原纤维明显减少，并且胶原纤维面积百分比明显低于其他治疗组(P < 0.05)。