结果:培养第5天,肩袖肌腱干细胞开始从组织碎块中爬出,呈不规则形状;培养第10天,肩袖肌腱干细胞呈现长梭形并开始聚集;培养第20天,肩袖肌腱干细胞呈现明显的长梭形并逐渐呈现漩涡状分布,见图1。
图2|肩袖肌腱干细胞克隆形成能力鉴定
结果:克隆形成能力鉴定结果表明,肩袖肌腱干细胞具有克隆形成能力,见图2。
图4|人肩袖肌腱干细胞的三系分化能力
结果:三系分化能力检测表明,肩袖肌腱干细胞具有向成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞分化的能力,见图4。
图6|MDC法检测肩袖肌腱干细胞自噬体荧光(SP,×200)
结果:对照组只有少量点状荧光颗粒弥散分布在细胞质中,H2O2组与3-甲基腺嘌呤+H2O2组荧光颗粒明显增加,且H2O2组增加更明显。与空白组比较,H2O2组荧光强度较高,且在细胞质中可见明显聚集的荧光颗粒;与H2O2组比较,3-甲基腺嘌呤+H2O2组荧光强度降低且点状结构明显减少,见图6。
图7|Lyso-Tracker Red检测肩袖肌腱干细胞溶酶体特异性荧光(SP,×200)
结果:对照组只有少量点状荧光颗粒弥散分布在细胞质中,H2O2组与3-甲基腺嘌呤+H2O2组荧光颗粒明显增加,且H2O2组增加更明显。与空白组比较,H2O2组自噬溶酶体小点显著性增加;与H2O2组比较,3-甲基腺嘌呤+H2O2组自噬溶酶体小点显著性下降,见图7。
图8|荧光显微镜下各组肩袖肌腱干细胞LC3A/B蛋白分布及表达(SP,×200)
结果:空白组只有些许点状荧光颗粒散在分布,H2O2组LC3A/B荧光颗粒亮度明显,且数量增加;与H2O2组相比,3-甲基腺嘌呤+H2O2组荧光颗粒荧光强度明显降低,提示H2O2促进自噬相关蛋白LC3A/B表达,见图8。