其他干细胞

建立并鉴定一种基于人诱导多能干细胞的肝脏细胞定向分化实验方案

• 图1｜人诱导多能干细胞(hiPSCs)表型鉴定

  

  结果：明场显微镜下显示hiPSCs呈现经典的诱导多能干细胞特征，表现为hiPSCs克隆边缘光滑，克隆内细胞排列致密，细胞呈圆形、边界清晰，核仁明显且核质比高。免疫荧光图片显示hiPSCs核转录因子OCT4和SOX2高水平特异性表达在细胞核中，而hiPSCs特异膜蛋白SSEA4定位在细胞膜上且呈现强信号。上述结果均符合hiPSCs特征，见图1。

  
  

  图3｜动态观察不同分化阶段明场显微镜下人诱导多能干细胞(hiPSCs)形态变化

  

  结果：如图3明场显微镜下观察显示，随着分化进程，细胞形态经历了明显的变化，表现为从第0天的经典hiPSCs形态，如高核质比、核仁明显和细胞边缘清晰，到第5天终末内胚层细胞和第15天肝母细胞，二者均为典型上皮细胞，但明显失去了hiPSCs的特征形态。到第15天以后开始出现经典的肝脏细胞形态，呈多边形，细胞核大且圆、居中，上述结果初步提示肝细胞分化成功。
  

  
  

  图5｜利用免疫荧光和ELISA验证分化的肝细胞

  

  结果：利用免疫荧光检测第15天时肝细胞特异标记物AFP，结果显示AFP信号定位在细胞核中，呈现强阳性率。利用ELISA分别对第15，25，30，35天细胞上清中的白蛋白和尿素进行检测，结果显示，在第15天时上清中白蛋白和尿素呈现低水平表达，随着分化进展细胞上清中二者含量均递增且在第35天达到最大(第25，30天， P < 0.05；第35天，P < 0.01)。上述结果进一步证实肝细胞分化成功。见图5。
  

  
  
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发布日期： 2022-06-14  浏览： 475