胚胎干细胞

    人胚胎干细胞自分泌巨噬细胞迁移抑制因子及受体表达
  • 图1|相同数量胚胎干H1和H9系细胞正常培养24,48,72 h光镜图片(倒置显微镜,×400)

    结果:随着培养时间的增加,光镜下可见人胚胎干H1和H9系细胞数量随之增多,细胞间隙变小,形态较前无变形,镜下可见有少量漂浮死亡细胞,各孔细胞生长状态良好。H1和H9系细胞计数显示在24,48,72 h细胞数量呈指数增长(P < 0.001,P < 0.000 1),同一时间不同系之间细胞数量相似,无明显差异(P > 0.05)。ELISA检测结果显示培养基中MIF水平相对恒定,并没有呈现细胞数量依赖性,H1和H9系之间也并无显著差异(P > 0.05),见图1。


    图2|H1和H9细胞各相关因子免疫荧光检测结果(×1 000)

    结果:免疫荧光染色结果如图2所示,DAPI染胞核呈蓝色荧光,绿色荧光的深浅表示胚胎干细胞中MIF的表达水平,绿色越深,分布越密集,表明MIF表达水平越高,红色荧光的深浅表示MIF相关受体CD74、CD44、CXCR2、CXCR4、CXCR7在胚胎干细胞中的表达水平,红色越深,分布越密集,表明相关受体表达水平越高。


    图5| 免疫荧光共聚焦显微镜检测互作蛋白巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)和CXCR7共定位(×1 000)

    结果:将鼠源MIF抗体和兔源CXCR7抗体分别孵育鼠源和兔源的荧光二抗,通过荧光显微镜可见H9细胞上MIF和CXCR7分别激发绿色和红色荧光,细胞核通过DAPI染色后激发蓝光荧光,最后应用 Photoshop 软件对3张不同颜色的荧光图片进行叠加,组合后的图片可见MIF与CXCR7表达位置重复,说明两种蛋白存在共定位,见图5A,另外,将组合图片进行荧光定量分析(图中箭头所示),发现MIF在H9细胞胞膜、胞质均表达,CXCR7主要在胞膜表达,这在空间上为2种蛋白的互作提供了可能,见图5B。


    图6|不同浓度的巨噬细胞迁移抑制因子抑制剂ISO-1对H9细胞凋亡的影响(TUNEL,× 400)

    结果:与空白组相比,随着ISO-1浓度(12,48,192 μmol/L)的增加,细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),并伴随一定的剂量依赖性,见图6。


    图7|不同质量浓度的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对ISO-1诱导的H9细胞凋亡的影响(TUNEL,× 400)

    结果:与ISO-1(192 μmol/L)组相比,在加入不同质量浓度的MIF(30,100,300 μg/L)共孵育24 h后,TUNEL法检测结果显示细胞凋亡率显著减少(P < 0.01),表现出一定的剂量依赖性,见图7。


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  • 发布日期: 2022-06-14  浏览: 530