脂肪干细胞
-
图1｜分离所得细胞的形态学观察和增殖能力检测
结果：原代细胞培养24 h左右时已开始贴壁生长，3 d时逐渐延展为大小不一的多角形或长梭形的类成纤维细胞状，见图1A；至培养8 d时，细胞汇合度达95%以上，细胞成旋涡状或鱼群状排列，见图1B。MTS实验绘制细胞的生长曲线可见，细胞增殖曲线大致呈“S”形，细胞增殖能力较好，见图1C。
图2｜分离所得细胞的鉴定(×200)
结果：对P3代细胞进行3项分化鉴定可见：分离所得的细胞经成脂诱导液诱导分化10 d后，使用油红O染色可见细胞内含有的脂滴与油红O结合后被染成红色；用成骨诱导液诱导21 d后，经茜素红染色后可见细胞内出现红色钙盐沉积；用成软骨诱导液诱导分化21 d后，经阿利新蓝染色可见软骨基质中的黏性多糖与阿利新蓝结合，形成蓝色沉淀。经过3项分化实验可初步证实分离的细胞为间充质干细胞，见图2A-C。随后，通过免疫荧光染色，观察到分离所得的细胞高表达CD44，CD90，CD105，低表达CD34，符合国际细胞与基因治疗学会间充质基质细胞委员会对间充质干细胞的标准[17]，从细胞表面标志物层面证实分离得到的细胞为间充质干细胞，即脂肪干细胞，见图2D-I。
图3｜慢病毒转染脂肪干细胞效率观察(×50)
结果：慢病毒转染72 h后使用倒置荧光显微镜观察生长激素组和空载组细胞形态及转染效率。镜下可见两组细胞形态均良好，转染效率达90%以上，但由于插入了生长激素基因，生长激素组细胞内绿色荧光蛋白表达降低，荧光信号较空载组稍弱，见图3。
图5｜生长激素-脂肪干细胞对成纤维细胞迁移和增殖的影响
结果：细胞划痕实验可见，24，48，72 h生长激素组成纤维细胞迁移至划痕区域的数量均多于空载组，至72 h基本已愈合。Transwell实验可见：通过五点取样法选择5个视野进行细胞计数，生长激素组成纤维细胞穿过小室的数量多于空载组(P < 0.001)。MTS实验可见：在接种后的第1-6天，生长激素组成纤维细胞增殖能力略好于空载组，其差异有显著性意义，见图5。