骨髓干细胞
-
图1｜大鼠骨髓间充质干细胞的形态特征(×100)
结果：原代培养3 d后可见骨髓间充质干细胞呈放射状分布，细胞形态大小不一，长至六七天时，待细胞融合度为80%-90%时消化传代。传至第3代可见细胞呈漩涡生长，细胞形态呈长梭形，见图1。
图3｜大鼠骨髓间充质干细胞成骨、成脂诱导分化能力鉴定(×100)
结果：经成骨诱导21 d后，镜下观察可见钙结节，茜素红染色可见红色颗粒物，经成脂诱导21 d后，镜下观察可见圆形脂肪颗粒，油红O染色可见大量红色脂滴，结果表明大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后可向成脂、成骨细胞分化，见图3。
图4｜化疗型卵巢功能不全大鼠阴道涂片动情周期变化(×100)
结果：正常组大鼠体质量增加，进食正常，毛发光泽。经过15 d的环磷酰胺腹腔注射造模，卵巢功能不全组大鼠可见体质量下降，进食量减少，活动量减少，出现掉毛现象。取大鼠阴道涂片可见动情周期出现延迟或者紊乱，大鼠动情周期变化，见图4。
图6｜各组大鼠卵巢组织苏木精-伊红染色及卵泡计数
结果：苏木精-伊红染色结果显示正常组卵巢结构完整，卵泡以生长卵泡和成熟卵泡为主，颗粒细胞结构致密，黄体结构完整，血运丰富，无明显结构纤维化。卵巢功能不全组大鼠卵巢结构出现异常，卵泡数量减少且大量卵泡细胞停滞在生长发育的幼稚期。颗粒细胞出现大量凋亡，结构疏松。黄体结构紊乱，纤维化严重。经干细胞治疗或联合治疗后大鼠卵巢组织卵泡数量增加，颗粒细胞明显致密，黄体结构有部分恢复，血运增加，纤维化明显减少。卵泡计数显示卵巢功能不全组卵泡数量明显减少，且主要以原始卵泡和初级卵泡为主，成熟卵泡较少，且闭锁卵泡数量多。干细胞组及联合组治疗后生长卵泡数量(初级+次级卵泡)明显增加(P < 0.05)，然而干细胞组与联合组的生长卵泡数量并无明显差异。与卵巢功能不全组相比，干细胞组及联合组治疗后闭锁卵泡数量明显减少(P < 0.01)，干细胞组与联合组闭锁卵泡数量无明显差异，见图6。
图7｜各组大鼠骨髓间充质干细胞归巢情况及卵巢组织中CXCR4蛋白表达水平
结果：干细胞组和联合组的每个视野中荧光阳性细胞数分别为22.28±1.82，35.20±2.26(n=4)，结果表明电针治疗可以促进骨髓间充质干细胞向卵巢组织归巢(P=0.004 3，P < 0.01)。为进一步探究电针刺激骨髓间充质干细胞的机制，检测了卵巢组织趋化因子受体CXCR4的蛋白表达水平，结果显示，联合组CXCR4表达水平高于干细胞组(P=0.036，P < 0.05)，证明电针可以通过促进骨髓间充质干细胞表面的CXCR4表达进而促进骨髓间充质干细胞向卵巢归巢，见图7。
图8｜各组大鼠卵巢细胞凋亡水平(×100)及凋亡蛋白表达水平
结果：免疫荧光染色结果显示正常组、卵巢功能不全组、干细胞组、联合组凋亡阳性细胞数分别为18.44±1.27，57.06±2.10，35.75±2.31，27.44±2.04(n=4)。与卵巢功能不全组相比，干细胞组和联合组颗粒细胞凋亡水平均显著降低(P=0.000 5，P < 0.000 1)。与干细胞组相比，联合组的凋亡水平显著减少(P=0.035 5，P < 0.05)，差异有显著性意义，证明电针治疗可以通过促进骨髓间充质干细胞在卵巢组织中的抗凋亡作用来增强骨髓间充质干细胞的疗效，见图8。