脂肪干细胞
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图1｜人脂肪间充质干细胞(Ad-MSCs)的形态学、表面标记和诱导分化能力鉴定
结果：采用胶原酶消化法，从脂肪组织抽取液中提取得到的原代Ad-MSCs种植于细胞培养皿中，细胞生长融合至80%传代，传代后的细胞增殖速度明显增快，细胞形态均匀一致，呈长梭形，见图1A。第3代生长良好的Ad-MSCs分别进行成脂诱导分化和成骨诱导分化，2周后，油红O染液染色显示细胞内存在明显的大小不一的红色脂滴，见图1B，茜红素S染液染色可见明显的红色钙结节沉积，见图1C，这表明分离提取到的细胞具有干细胞分化潜能的特性。采用流式细胞仪检测6种不同的细胞表面标记物，结果显示：CD105(95.6%)，CD90(96.9%)和 CD44(78.6%)呈阳性，CD31(4.68%)，CD34(2.13%)和CD106(9.58%)呈阴性，见图1D，符合Ad-MSCs免疫表型特征，可用于后续的实验研究。
图2｜各组Ad-MSCs活力和增殖能力
结果：以质量浓度为10 mg/L、体积50 μL的N-CWS作用于Ad-MSCs，在72 h和96 h时Ad-MSCs活力有较明显的增强，见图2A，B。为了验证N-CWS对Ad-MSCs增殖的影响，以10 mg/L、50 μL N-CWS作用于Ad-MSCs，分别在72，96 h后用EDU试剂盒进行EdU掺入分析，通过荧光显微镜观察阳性细胞，结果表明N-CWS可提高Ad-MSCs的增殖率，见图2C，D。
图4｜TUNEL染色法检测Ad-MSCs的凋亡情况
结果：在Ad-MSCs中加入高糖诱导细胞凋亡，不同剂量N-CWS分别处理48，72 h后用FITC-PI流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况。结果表明，N-CWS可抑制高糖诱导的干细胞凋亡，见图3。为了验证结果选用TUNEL法检测细胞凋亡，定量分析TUNEL荧光图，与流式法结果一致，见图4。
图7｜苏木精-伊红染色、Masson染色和免疫荧光验证慢性创面第14天愈合情况(×200)
结果：术后14 d将各组创面皮肤标本进行苏木精-伊红染色和Masson染色，见图7A，结果显示Ad-MSCs组和N-CWS+Ad-MSCs组均能促进糖尿病创面再生，但N-CWS+Ad-MSCs组胶原纤维生长更整齐，条纹更加清晰。此外行组织免疫荧光CD31及肿瘤坏死因子α染色检测皮肤微血管再生及炎症因子表达，见图7B，结果显示N-CWS+Ad-MSCs组比Ad-MSCs组能够更好地促进糖尿病创面的皮肤再生和血运重建。