胚胎干细胞

两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较

• 图1  无饲养层培养的人胚胎干细胞形态(×100)

  

  结果：在Matrigal胶上贴壁培养的人胚胎干细胞呈克隆样生长，细胞排列紧密，核质比高，细胞集落边缘光滑，生长状态良好，无边缘细胞向外明显延展和核质比降低等分化表现，随着培养天数增加细胞集落逐渐融合，培养7 d时细胞汇合度可达80%-90%，见图1。

  
  

  图3  两种不同方法传代后的人胚胎干细胞形态及转染pAdTrack-AKT1荧光质粒后的绿色荧光蛋白表达(×100)

  

  结果：不同方式传代的人胚胎干细胞在传代后继续培养48 h，光学显微镜下观察细胞状态，可见小克隆传代的细胞之间致密紧凑；单细胞传代的细胞结构清晰，仍趋向克隆样生长，细胞与细胞之间连接较松散，见图3A，D。转染48 h后，使用荧光显微镜观察不同传代方式的细胞转染效率，发现在去除ROCK抑制剂Y-27632(可以阻止人胚胎干细胞因分离导致的细胞凋亡，提高单个人胚胎干细胞的存活率)后，单细胞传代的人胚胎干细胞仍呈克隆样紧密生长，见图3E。单细胞传代后转染pAdTrack-AKT1荧光质粒48 h的荧光细胞数目明显多于小克隆传代法，见图3C，F。

  
  

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发布日期： 2020-02-28  浏览： 1787