雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.009

中国组织工程研究

• 脂肪干细胞 adipose-derived stem cells • 上一篇下一篇

雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化

张慧^1，2，郑红光²，张德伟²，梅煜明²

1辽宁医学院解放军沈阳军区总医院研究生培养基地，辽宁省沈阳市 110016；2解放军沈阳军区总医院肾脏病科，辽宁省沈阳市 110016

收稿日期:2013-02-21 修回日期:2013-04-15 出版日期:2013-07-02 发布日期:2013-07-02
通讯作者: 郑红光，博士，教授，主任医师，硕士生导师，解放军沈阳军区总医院肾脏病科，辽宁省沈阳市 110016 phd528@sohu.com
作者简介:张慧★，女，1986年生，山东省泰安市人，汉族，辽宁医学院在读硕士，主要从事肾脏疾病的干细胞治疗的研究。
基金资助:
2011年辽宁省第一批次科学技术计划项目(2011225021)，肾脂肪囊来源脂肪干细胞向肾脏固有细胞分化及其在肾脂肪囊和肾组织中迁徙及归巢的实验研究。

Estrogen effects on adipogenic differentiation of cryopreserved adipose-derived mesenchymal stem cells from the adipose capsule of kidney

Zhang Hui^{1, 2}, Zheng Hong-guang², Zhang De-wei², Mei Yu-ming²

1Postgraduate Culture Base, General Hospital of Shenyang Military Region, Liaoning Medical University, Shenyang 110016, Liaoning Province, China; 2Department of Nephrology, General Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110016, Liaoning Province, China

Received:2013-02-21 Revised:2013-04-15 Online:2013-07-02 Published:2013-07-02
Contact: Zheng Hong-guang, M.D., Professor, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Nephrology, General Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110016, Liaoning Province, China phd528@sohu.com
About author:Zhang Hui★, Studying for master’s degree, Postgraduate Culture Base, General Hospital of Shenyang Military Region, Liaoning Medical University, Shenyang 110016, Liaoning Province, China; Department of Nephrology, General Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110016, Liaoning Province, China
Supported by:
the Scientific and Technological Plan of Liaoning Province in 2011 (First Batch), No. 2011225021*

摘要/Abstract

摘要：

背景：雌激素对脂肪干细胞向脂肪细胞诱导分化会有负向调节作用，但对长期深低温保存的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向脂肪细胞分化的效果尚未见报道。
目的：探讨雌激素对长期深低温保存的及新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化能力的影响。
方法：将长期深低温保存后复苏的及新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞分为4组进行成脂诱导分化，新鲜+雌激素组和冻存+雌激素组诱导时添加10-7 mol/L雌激素，新鲜组和冻存组不添加。成脂诱导分化14 d进行油红O染色及成脂量定量检测。
结果与结论：长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的细胞形态和排列无差异；长期深低温保存后复苏的与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞表面抗原分子CD29、CD44均呈阳性，CD31均呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成，油红O 染色呈阳性。在成脂诱导分化14 d对各组进行成脂量比较，新鲜组与新鲜+雌激素组，冻存组与冻存+雌激素组的吸光度之间比较，差异有显著性意义，但新鲜组与冻存组之间差异无显著性意义。结果表明：小剂量雌激素可抑制长期深度低温保存后复苏的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化；长期深低温保存后复苏的与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞在成脂诱导方面无显著性差异。

关键词: 干细胞, 脂肪干细胞, 肾脂肪囊, 脂肪间充质干细胞, 长期深低温保存, 复苏, 成脂分化, 雌激素, 油红O染色, 省级基金, 干细胞图片文章

Abstract:

BACKGROUND: Estrogen exerts a negative regulatory role in adipogenic differentiation of adipose stem cells, but there is no report concerning estrogen effects on adipogenic differentiation of adipose stem cells from the adipose capsule of kidney after long-term cryopreservation.
OBJECTIVE: To explore the impact of estrogen on adipogenic differentiation of fresh adipose-derived mesenchymal stem cells from the kidney adipose capsule or those after long-term cryopreservation.
METHODS: Passage 3 long-term cryopreserved and fresh adipose-derived mesenchymal stem cells from the kidney adipose capsule were divided into four groups, all of which were induced to adipogenic cells by induced fluid: fresh cells + 10-7 mol/L estrogen, cryopreserved cells + 10-7 mol/L estrogen, fresh cells and cryopreserved cells groups. Oil red O staining and adipogenic quantitative detection were performed at 14 days after induced adipogenic differentiation.
RESULTS AND CONCLUSION: There were no differences in the morphology and arrangement between the cryopreserved and fresh cells. Both cryopreserved and fresh cells expressed CD29 and CD 44, but did not express CD31. Intracellular lipid droplets were observed after adipogenic differentiation by oil red O staining, and the cells were positive for oil red O staining. The adipogenic volume comparison among the four groups was detected on day 14 after adipogenic differentiation, and the absorbance values showed significant difference between the fresh cells and fresh cells + estrogen groups, as well as between the cryopreserved cells and cryopreserved cells + estrogen groups, but no difference between the fresh and cryopreserved cells groups. It is proved that low-dose estrogen can inhibit the adipogenic differentiation of long-term cryopreserved adipose-derived mesenchymal stem cells from the kidney adipose capsule; however, there is no significant difference between passage 3 long-term cryopreserved and fresh adipose-derived mesenchymal stem cells from the kidney adipose capsule in adipogenic differentiation.

Key words: stem cells, adipose-derived stem cells, kidney adipose capsule, adipose-derived mesenchymal stem cells, long-term cryopreservation, resuscitation, adipogenic differentiation, estrogen, oil red O staining, provincial grants-supported paper, stem cell photographs-containing paper

中图分类号:

R394.2

张慧，郑红光，张德伟，梅煜明 . 雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.009.

Zhang Hui, Zheng Hong-guang, Zhang De-wei, Mei Yu-ming. Estrogen effects on adipogenic differentiation of cryopreserved adipose-derived mesenchymal stem cells from the adipose capsule of kidney[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.27.009.

图/表（结果） 4

2.1 细胞形态学观察第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞形态学观察见图1。新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞和长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞都呈梭形、多角形，及“漩涡状”排列。

2.2 免疫荧光细胞化学检测对长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞及新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞进行免疫荧光化学检测，间充质相关抗原CD29、CD44分别呈阳性表达，而内皮细胞相关抗原CD31呈阴性表达，见图2。

2.3 肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞定向成脂分化过程图3为脂滴形成过程图，可见随着时间的推移脂滴由少到多。肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞诱导分化7 d后可见少数细胞质内有折光性较强的脂粒出现，随着培养时间延长，小脂粒逐渐聚集成较大的脂肪滴，脂肪细胞数量逐渐增多。进行油红O染色可见脂肪细胞质中有大小不等的圆形橙红色脂肪滴。在添加雌激素的冻存组及新鲜提取组，脂滴的形成过程无明显差别，仅表现为脂滴出现的时间较单纯诱导组延迟。

2.4 肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂诱导分化情况在成脂诱导分化14 d，进行油红O染色，结果见图4，新鲜+雌激素组的成脂量明显少于新鲜组，冻存+雌激素组的成脂量明显少于冻存组，说明雌激素抑制肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化。新鲜组与冻存组及新鲜+雌激素组与冻存+雌激素组的成脂量进行比较无明显差异。
在成脂诱导剂及雌激素作用14 d，油红O染色后每组选取8孔异丙醇充分溶脂后分光光度计检测4组肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞细胞成脂诱导分化情况，见图5。新鲜细胞与长期深低温保存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂诱导分化能力无差异。未添加雌激素组均获得较好的成脂诱导分化效果，添加雌激素组成脂诱导分化未获得良好分化效果，说明雌激素抑制肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化。

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引言

脂肪干细胞最早是由Zuk等^[1]于2001年从脂肪组织中分离得到的一种具有多分化潜能的成体干细胞。研究发现，脂肪干细胞在体外呈成纤维细胞样贴壁生长，其间充质细胞干细胞特性经过多次传代而无异常，并且在体外可分化为多种不同种类的成熟细胞，包括脂肪细胞、软骨细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、神经元、胰腺β细胞、肝细胞等^[2-13]，说明脂肪干细胞具有良好的多向分化潜能。不论何种干细胞，长期深低温保存对其临床医用都是非常有意义的，干细胞的长期深低温存保证了临床治疗所需要的足够的细胞数目，且可满足反复多次治疗所需的细胞量，有研究表明，人类的脂肪干细胞经长期深低温保存后仍然保持其增殖活性，并可以向成骨细胞等诱导分化[14]。
研究证实，雌激素对机体代谢具有广泛的调节作用，研究发现，其在生殖系统以及许多非生殖器官(如中枢神经系统、心血管系统及骨骼)具有重要的代谢调节影响[15-17]。近期研究表明，卵巢切除后的大鼠肾脏组织维生素D3受体mRNA表达明显减少，提示雌激素可促进卵巢切除后大鼠肾脏组织维生素D3受体mRNA的表达[18]，对机体的钙磷代谢起到调节作用。此外，雌激素尚可以调节脂肪组织的分解、分布、及合成，而雌激素的减少将会导致机体脂肪组织明显增加[19]。
近期有研究表明，雌激素对脂肪干细胞的诱导分化能起到一定的负向调节作用，但其详细机制尚不明确，目前认为，雌激素与雌激素受体结合后通过调节下游基因的转录和激活发挥生物学效应。雌激素受体包含两种亚型，即雌激素受体α和雌激素受体β。雌激素受体α与雌激素受体β在不同的组织类型具有不同的分布[20]。尽管雌激素受体α与雌激素受体β具有相似的分子学结构，但是它们具有不同的生物学功能，其中，雌激素受体α作为一种孤儿核受体，作用于成骨细胞或骨髓间充质干细胞的靶位点，能够抑制脂蛋白脂肪酶及其转录水平，部分抑制干细胞向脂肪细胞的分化[21]。因此，在实施干细胞治疗过程中如果能针对雌激素受体α进行主动性抑制将可能通过减少脂肪干细胞向脂肪细胞的分化来提高脂肪干细胞向肾脏固有细胞转化的效率。
文章拟通过在长期深低温保存及新鲜提取的大鼠肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞培养基中添加雌激素(10-7 mol/L)进行成脂诱导分化，探讨雌激素对肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞，特别是长期深低温保存后复苏肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化能力的影响，并比较添加雌激素后长期深低温保存及新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞在成脂能力方面的差异，旨在为肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向肾脏固有细胞诱导分化提供前期研究基础。

材料方法

设计：细胞学体外观察。

时间及地点：实验于2012年7月至2013年1月在解放军沈阳军区总医院肾内科干细胞实验室完成。

材料：

实验动物：清洁级SD成年雄性大鼠，体质量120- 150 g，由沈阳军区总医院医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK-(军)2007-001。取材人员编号(军动管字)第：2012011311号。

脂肪间充质干细胞实验所用主要试剂与仪器：

实验方法：

大鼠肾脂肪囊来源间充质干细胞的分离、培养及传代：雄性SD大鼠给予10%水合氯醛腹腔麻醉，无菌条件切取肾脂肪囊脂肪组织，除去肉眼可见的血管后PBS冲洗3次，至脂肪组织变白，剪碎，加入约2倍体积的Ⅰ型胶原酶消化50 min，加入含10%FBS的DMEM基础培养液终止消化，1 000 r/min离心5 min，离心半径为12.5 cm，弃上清，基础培养液重悬沉淀后接种于培养瓶中，于 37 ℃、体积分数5%CO₂的培养箱中培养，48 h后首次换液，以后每3 d换液1次，当细胞80%-90%融合时，加入0.25%的胰蛋白酶消化，待细胞回缩、变圆时加入含体积分数10%FBS的基础培养液终止消化，1 000 r/min离心5 min，离心半径为12.5 cm，基础培养液重悬，锥虫蓝染色计数，调整细胞浓度至实验所需浓度，种于培养瓶中继续培养，每3 d更换培养液1次，待细胞80%左右融合时予以传代。

免疫荧光细胞化学检测：取第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞，当细胞融合80%-90%时，0.25%胰蛋白酶消化，离心，制成单细胞悬液，锥虫蓝染色计数，以实验所需浓度接种于置有盖玻片的12孔板内，爬片。步骤：取出盖玻片，多聚甲醛固定30 min，山羊血清封闭 20 min；弃上清，分别加入FITC直标抗体 Anti Rat CD29-FITC、Anti Rat CD44-FITC(稀释浓度均为1∶50)，4 ℃孵育12 h；对照组标记抗体选用Anti Rat CD31-FITC (稀释浓度为1∶50)，处理同上；荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。

肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的冻存与复苏：取第2代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞，待细胞融合至80%-90%时，给予常规消化、1 000 r/min离心5 min，离心半径为12.5 cm，弃上清液，加入新鲜配制的细胞冻存液(DMSO∶胎牛血清∶DMEM=1∶2∶7)，锥虫蓝染色后细胞计数板计数，加入冻存液调整细胞浓度于1×10⁹-1×10¹⁰ L^-¹之间，混匀，以1 mL/支分装于冻存管内，置于4 ℃冰箱1 h后，移入-20 ℃冰箱1 h，转移入液氮上层过夜，次日置于液氮中进行长期保存。

冻存时间大于6个月后，液氮中取出冻存细胞，快速置于37 ℃水浴箱内，振荡，2 min内快速解冻，移至预先装有完全培养基的离心管后吹打均匀，1 000 r/min离心5 min，离心半径为12.5 cm，弃上清，加入基础培养液重悬细胞，锥虫蓝染色后细胞计数板计数，调整细胞浓度，以1×10⁸ L^-¹接种于培养瓶内，37 ℃孵箱内继续培养，每3 d更换培养液1次，待细胞80%左右融合时予以传代。

成脂诱导分化：将长期深低温保存后复苏的及新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞分为4组进行成脂诱导分化，新鲜组，新鲜+雌激素组，冻存组，冻存+雌激素组。具体诱导步骤如下：包含DMEM/F-12，体积分数10%FBS，1%青链双抗的完全培养基培养脂肪干细胞至第3代，第3代脂肪干细胞贴壁24 h后培养基转换为DMEM/F-12，体积分数3%FBS，1%青链双抗，培养8 d后培养基转换为含DMEM/F-12，体积分数3%FBS，1%青链双抗，33 μmol/L生物素，17 μmol/L维生素B5，1 μmol/L胰岛素，1 μmol/L地塞米松， 0.5 μmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，5 μmol/L罗格列酮的成脂诱导分化培养基继续培养，此时在新鲜+雌激素组与冻存+雌激素组中添加10^-⁷ mol/L雌激素，换液3次/周。

油红O染色及成脂后成脂量定量检测：成脂诱导分化14 d，诱导分化后细胞PBS清洗2遍，体积分数4%的甲醛固定10 min，0.5%的油红O染色10 min，染色后PBS冲洗2遍，加入异丙醇溶脂，使用分光光度计在 515 nm处检测各孔吸光度值。

主要观察指标：长期深低温保存的及新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化能力的区别，以及雌激素对其成脂分化能力的影响。

统计学分析：数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，各组数值以x(_)±s表示，两样本均数比较选用方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

干细胞技术是21世纪生命科学中最前沿技术，尽管近年来在干细胞相关基础和临床研究取得了令人瞩目的进展，但许多问题依然严重阻碍了干细胞技术在临床的应用和发展，其中，治疗用种子细胞的来源问题，长期储存及运输等问题都是需要解决的干细胞技术关键问题。

研究表明，脂肪间充质干细胞作为组织工学种子细胞之一，具有易于获得、纯度较高等诸多优点，有研究报道，脂肪干细胞增殖能力优于骨髓间充质干细胞^[22]。课题组的一项前期研究已证实：肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞在细胞增殖及细胞活力等方面较腹股沟区脂肪来源脂肪干细胞存在明显优势^[23]。自身干细胞移植用于临床治疗的前提是患者可提供足够的细胞量，但在实际临床工作中，患者的自身脂肪储备可能很难一次性提供足够的干细胞，而且，有研究证实，自体脂肪干细胞移植的成活率仅为40%-50%^[24]。因此，采取长期深低温保存干细胞有可能解决治疗细胞数量不足的问题，并为反复多次临床治疗提供保障。

能够向多种间质组织细胞如脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞诱导分化被认为是鉴定脂肪间充质干细胞是否具有多向分化潜能的有力证据^[25]。研究证实，从SD大鼠分离的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞通过采用免疫荧光检测可见间充质相关抗原CD29、CD44分别呈阳性表达，而内皮细胞相关抗原CD31呈阴性表达。此外，肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞具有向脂肪细胞分化的能力，分化获得的细胞进行油红O染色后，可见胞浆中充满红色油滴空泡，证实研究分离获得的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞具有间充质干细胞特性和多向分化能力。

研究证实，糖皮质激素、雌激素、维生素D3、雄激素受体等配体能结合在过氧化物酶增殖体激活受体上，促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化^[26-27]。此外，骨髓内的成骨细胞和脂肪细胞存在一种“此消彼长”的平衡状态^[28-30]，然而在某些病理情况下，如骨质疏松症，则会出现骨组织减少同时脂肪组织增加的现象，即成骨细胞和脂肪细胞之间出现了不平衡，但引起这种不平衡的原因是否与雌激素有关，其机制目前尚不清楚。近期研究发现，雌激素在机体脂肪组织中广泛存在^[31-32]。由于脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞在分化潜能方面具有极高的相似性，由此可以推测雌激素受体同样可能在SD大鼠来源的脂肪干细胞增殖生长以及诱导分化中起重要的作用，研究结果显示，添加雌激素的新鲜组的成脂量明显少于单纯诱导组，在冻存组与冻存+雌激素组之间也呈现类似的效果，提示雌激素对肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂诱导分化具有确切的抑制作用，而在添加雌激素的新鲜组与冻存组之间进行成脂量比较无明显差异，提示雌激素对长期深低温保存的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化具有相同的抑制作用。

细胞形态学观察显示，长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞均呈梭形、多角形，及“漩涡状”排列，无明显差异。免疫荧光检测证实，长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的间充质相关抗原CD29、CD44分别均呈阳性表达，内皮细胞相关抗原CD31呈阴性表达与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的免疫荧光表达相一致，证实长期深低温保存并未对肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的细胞标志物产生影响。课题组的另一项实验研究证实，长期深低温保存的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞生长曲线均呈S型，在细胞增殖方面无明显区别^[33]，实验证实2组细胞的成脂能力研究结果亦无明显差异，提示长期深低温保存的细胞与新鲜提取的细胞在成脂能力无明显差异。上述结果提示，长期深低温保存的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞一样，具有相同的临床应用价值。

研究采用细胞内脂滴形成作为脂肪细胞的标志，随着成脂分化程度的增加，脂滴呈明显增多的趋势^[34]。实验发现，未添加雌激素的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞加入成脂诱导液两三天后，可观察到细胞由长梭形变为多角形；诱导培养至第7天，绝大多数细胞均转变为多角形，几乎所有的细胞中均有脂滴形成，随诱导时间延长，胞质内脂滴持续增加，由小脂滴融合为大的脂滴，培养至14 d细胞核周围几乎完全被脂滴包围，进行油红O染色，细胞呈阳性表达；而诱导剂加雌激素组培养至7 d，大部分细胞仍旧为长梭形，继续培养至14 d，约50%的细胞的细胞形态发生改变，呈多边形，细胞核周围出现少量脂滴，进行油红O染色，少量细胞呈阳性表达。在单纯诱导组，即无论是长期冻存复苏的细胞还是新鲜提取的细胞，2组细胞在成脂诱导时间与阳性表达量方面无明显差异；诱导液中添加雌激素的新鲜组与冻存组之间在成脂诱导时间及阳性表达量方面亦无明显差异，说明长期冻存后复苏第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂能力方面无显著性差异；但在新鲜组与新鲜+雌激素组及冻存组与冻存+雌激素组之间，可发现较明显的差异，雌激素添加后无论是成脂诱导时间还是阳性表达量均远低于单纯诱导，充分证实雌激素对肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂诱导分化产生了抑制作用。

以上研究结果证实，肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞经过长达6个月以上的深低温保存，复苏后在细胞形态、增殖、向脂肪细胞诱导分化方面与新鲜提取肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞无显著性差异。肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化过程中给予雌激素后，成脂分化可被明显抑制。在肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向其他肾脏固有细胞的诱导分化过程中，不可避免的会产生肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向脂肪细胞的分化，因此在诱导分化试剂中添加雌激素，将有助于提高肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向肾脏固有细胞的分化效率。

雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化

Estrogen effects on adipogenic differentiation of cryopreserved adipose-derived mesenchymal stem cells from the adipose capsule of kidney

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