自体脂肪干细胞、壳聚糖/胶原蛋白支架材料及GDF-5复合物移植修复兔软骨缺损

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0955

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (25): 3969-3974.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0955

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自体脂肪干细胞、壳聚糖/胶原蛋白支架材料及GDF-5复合物移植修复兔软骨缺损

王征¹，于会¹，于尧¹，吴柏霖²

¹沈阳医学院附属中心医院手外科，辽宁省沈阳市 110024；²山东大学，山东省济南市 250100

修回日期:2018-05-19 出版日期:2018-09-08 发布日期:2018-09-08
通讯作者: 王征，沈阳医学院附属中心医院手外科，辽宁省沈阳市 110024
作者简介:王征，硕士，主治医师。
基金资助:
沈阳医学院青年基金(20142050)；沈阳市卫生和计划生育委员会科研基金

Repairing articular cartilage defects in rabbits by adipose-derived stem cells combined with chitosan/collagen scaffold and GDF-5

Wang Zheng¹, Yu Hui¹, Yu Yao¹, Wu Bo-lin²

¹Department of Hand Surgery, Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College, Shenyang 110024, Liaoning Province, China; ²Shandong University, Jinan 250100, Shandong Province, China

Revised:2018-05-19 Online:2018-09-08 Published:2018-09-08
Contact: Wang Zheng, Department of Hand Surgery, Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College, Shenyang 110024, Liaoning Province, China
About author:Wang Zheng, Master, Attending physician, Department of Hand Surgery, Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College, Shenyang 110024, Liaoning Province, China
Supported by:
the Youth Foundation of Shenyang Medical College, No. 20142050; the Fund of Shenyang Health and Family Planning Commission

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
GDF-5因子：又称为软骨形态发生蛋白1，可促进早期软骨和关节形成。
GDF-5复合物：应用紫外线交联法以1∶3比例制备构建壳聚糖/胶原蛋白复合支架载体。将标记后的兔脂肪干细胞种植到支架载体上共同培养形成复合物，再加入GDF-5滴注浓度为100 μg/L即构建脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物。

摘要
背景：GDF-5可诱导人脂肪干细胞分化为软骨样细胞，壳聚糖/胶原蛋白支架在软骨组织损伤修复中应用广泛。
目的：利用兔的自体脂肪干细胞复合壳聚糖/胶原蛋白支架材料加入GDF-5修复兔关节软骨缺损，观察其修复效果。
方法：取日本大耳兔皮下脂肪组织提取脂肪干细胞体外培养、纯化、扩增，并BrdU体外标记，应用紫外线交联法以1∶3比例构建壳聚糖/胶原蛋白复合支架载体，将标记后的兔脂肪干细胞种植到支架载体上共同培养形成复合物，以手术方式造成兔膝关节软骨直径为5 mm，深3 mm的圆柱形缺损，建立膝关节软骨缺损模型兔，随机分为4组，复合物组：脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物植入干预；支架组：单纯植入壳聚糖/胶原蛋白支架；脂肪干细胞组：单纯植入脂肪干细胞；假手术组：单纯钻孔不作处理。各组干预4，8，12周时取材，行组织学检测、软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及BrdU免疫荧光染色。
结果与结论：①术后12周，与其他3组相比，复合物组圆柱型缺损处完全被与周围正常软骨相同的乳白色透明样物质填充修复，软骨缺损区域由分化一致的透明软骨所替代修复，Wakitani评分最低(P < 0.01)；②Ⅱ型胶原免疫组化染色及BrdU免疫荧光染色：复合物组与术后4，8，12周免疫组化染色可见修复区组织Ⅱ型胶原染色胞浆内呈淡黄色阳性表达，修复区新生组织可见BrdU绿色荧光表达；③结果证实，自体脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物移植修复兔膝关节软骨缺损效果较好。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0003-2061-3210(王征)

关键词: 壳聚糖, 胶原蛋白, 支架；组织工程, 脂肪干细胞, GDF-5, 兔, 软骨缺损, 损伤修复, 自体

Abstract:

BACKGROUND: GDF-5 can induce the differentiation of human adipose-derived stem cells into chondrocyte-like cells, and chitosan/collagen scaffolds are widely used in cartilage tissue repair.
OBJECTIVE: To repair rabbit articular cartilage defects by using rabbit autologous adipose-derived stem cells combined with chitosan/collagen scaffold and GDF-5 and to observe the repair effect.
METHODS: Adipose-derived stem cells isolated from subcutaneous adipose tissues of Japanese rabbits were cultured, purified, amplified in vitro, and labeled with BrdU in vitro. The chitosan/collagen composite scaffold was prepared in a ratio of 1:3 using ultraviolet cross-linking method. Then labeled adipose-derived stem cells were seeded onto the scaffold and cultured to form complexes. A cylindrical defect (5 mm in diameter, 3 mm in depth) in the knee articular cartilage was surgically made in each rabbit, and these rabbit models were thereafter randomly divided into four groups. Composite group: adipose-derived stem cells+chitosan/collagen scaffold+GDF-5 complex implantation; stent group: simple implantation of chitosan/collagen scaffold; cell group: simple implantation of adipose-derived stem cells; and sham operation group: simple drilling without treatment. All the rabbits were intervened for 4, 8, and 12 weeks. Meanwhile, histological detection, type II collagen immunohistochemical staining and BrdU mmunofluorescence staining were performed.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) At 12 weeks after surgery, the cylindrical defect of the composite group was completely filled with the same milky white transparent substance as the surrounding normal cartilage, and the cartilage defect area was replaced by differentiated hyaline cartilage. Of all the groups, Wakitani score was the lowest in the composite group (P < 0.01). (2) Type II collagen immunohistochemical staining and BrdU immunofluorescence staining: in the composite group, the type II collagen stained cytoplasm in the repaired area was detected by immunohistochemical staining at 4, 8, and 12 weeks after surgery. The expression of BrdU in the new tissues of the repaired area was positive. These results confirm that autologous adipose-derived stem cells+chitosan/collagen scaffold+GDF-5 complex grafting has a good effect on the repair of rabbit knee cartilage defects.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Stem Cells, Tissue Engineering, Chitosan, Stents

中图分类号:

R394.2

王征，于会，于尧，吴柏霖. 自体脂肪干细胞、壳聚糖/胶原蛋白支架材料及GDF-5复合物移植修复兔软骨缺损[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(25): 3969-3974.

Wang Zheng, Yu Hui, Yu Yao, Wu Bo-lin. Repairing articular cartilage defects in rabbits by adipose-derived stem cells combined with chitosan/collagen scaffold and GDF-5[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(25): 3969-3974.

图/表（结果） 1

2.1 实验动物数量分析 共纳入日本大耳兔72只，死亡3只，补充3只，最终进入结果分析的兔72只。

2.2 壳聚糖/胶原蛋白生物支架理化性质及体内相容性 壳聚糖/胶原蛋白支架孔隙丰富，大小比较均一，且孔与孔之间相互联通构成了交通孔。支架的孔径在90-360 μm (图1A)；各组孔径经均数比较均有差异(P < 0.05)；各组支架孔隙率、吸水率等各项理化指标良好(表1)。实验将支架植入大耳兔腹部组织皮下经苏木精-伊红染色可见支架生物组织相容性较好(图1B，C)。

2.3 术后兔一般情况观察及修复后组织学评分 兔术后第1天切口处略红肿，关节略肿胀，术后3-7 d切口处无红肿及关节肿胀明显消退。复合物组术后4，8，12周Wakitani评分复合物组评分最低(P < 0.01)；支架组与脂肪干细胞组，假手术组比较差异有显著性意义(P < 0.01)，见表2。

2.4 关节软骨修复组织学及形态学变化 移植物软骨缺损修复术后，随时间延长，复合物组患肢恢复从组织学检查结果和一般观察情况明显好于支架组及脂肪干细胞组，至术后12周，复合物组：大体观察圆柱型缺损处完全被与周围正常软骨相同的乳白色透明样物质填充修复(图2A)。

组织学染色显示：软骨缺损区域由分化一致的透明软骨所替代修复(图1D)；支架组缺损处由纤维软骨所替代(图1E，2B)；脂肪干细胞组及假手术组由少量纤维组织部分填充(图1F，2C)Ⅱ型胶原免疫组织化学染色证实：复合物组与支架组4，8，12周免疫组织化学染色可见修复区组织Ⅱ型胶原染色胞浆内呈淡黄色阳性表达；脂肪干细胞组及假手术组表达呈阴性；复合物组术后4，8，12周修复区新生组织进行BrdU免疫荧光染色，可见绿色荧光表达(图3)。支架组与脂肪干细胞组及假手术组未见绿色荧光表达。

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引言

近年来，各种原因导致的关节软骨损伤疾病(创伤性关节炎、关节退行性疾病及骨肿瘤对关节软骨造成损伤等)成为临床难以解决的一项难题，随着组织工程学问世以来，组织工程为解决此难题提供了新的思路，并为临床提供新的治疗方案。随着干细胞的培养技术及组织工程技术不断成熟，很多学者对脂肪干细胞修复组织缺损进行了大量相关的可行性实验研究^[1]。

从2001年Zuk等^[2]首次发现脂肪干细胞以来，脂肪干细胞与骨髓间充质干细胞及其他组织来源干细胞相比具有不可替代的优势：①来源广泛，取材容易；②易于分离培养，获取细胞量大。有研究证实，脂肪组织经胶原酶消化后，贴壁细胞获得量是骨髓干细胞的100-500倍，且脂肪组织中脂肪间充质干细胞的获得率约为骨髓间充质干细胞的40倍；③易于被外源性基因转染，便于基因操作，能实现自体移植，减少异体移植引起的免疫排斥反应。有研究表明脂肪干细胞趋化因子受体水平高于骨髓间充质干细胞^[3]。
脂肪干细胞由于自身缺乏介导因子，因此很难转化为可供自身利用的软骨细胞，GDF-5又称为软骨形态发生蛋白1，它促进早期软骨和关节形成^[4]，有研究表明向大鼠损伤软骨内注射GDF-5可促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原蛋白和细胞外基质中GAG的积累^[5]，同时GDF-5可诱导人脂肪干细胞分化为软骨样细胞^[6]。近年来，壳聚糖/胶原蛋白支架在软骨组织损伤修复中应用广泛。

实验通过以脂肪干细胞为种子细胞加入GDF-5生长因子与壳聚糖/胶原蛋白生物支架相结合，以细胞-载体复合物形式修复软骨缺损，为临床治疗软骨缺损提供新的治疗方法。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 于2015年5月至2017年7月在沈阳医学院附属中心医院中心实验室暨沈阳医学院附属中心医院博士后流动工作站实验中心完成。

1.3 材料

实验动物：72只4月龄日本大耳白兔，普通级、雌雄不限、体质量3.0-3.5 kg，由中国医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCSK(辽)2016-007。

实验动物的操作及处置过程经沈阳医学院学术委员会审查，认为该项目操作遵循国际及国家颁布的有关生物医学及实验动物伦理要求。

1.4 实验方法

1.4.1 脂肪干细胞的培养与标记 取日本大耳兔，肌肉注射速眠新0.2 mL/kg，进行麻醉。于大耳兔腹部脂肪5 g，用HANKS液浸泡冲洗3次，使用医用剪刀将血管等组织剔除，将脂肪组织剪成泥状。加入体积分数0.1%Ⅰ型胶原酶15 mL，离心管中放入37 ℃、体积分数5%CO₂培养箱中消化90 min使其充分消化，离心后弃去上清液及离心管上脂肪细胞，加入含体积分数10%FBS的DMEM/F12培养基以1×10⁸ L^-1细胞浓度接种于培养皿中，于37 ℃、体积分数5%CO₂培养箱中培养，光学显微镜下观察细胞生长情况。结果显示脂肪干细胞贴壁生长均匀，用体积分数0.25%的胰酶和EDTA消化 3 min，用含血清的培养基终止消化，1 000 r/min，5 min离心，收集细胞1∶2传代，记作P₁，取P₃细胞，将BrdU标记物稀释后加入培养基中，配制成终质量浓度为20 mg/L的DMEM+F12的培养基，将P₃细胞消化，传代后加入含标记物培养基中进行培养，过程中注意避光，细胞浓度为6×10⁹L^-1，连续培养72 h。

1.4.2 壳聚糖/胶原蛋白(CS-CL)支架的制备 应用紫外线交联法以1∶3比例构建壳聚糖/胶原蛋白复合支架载体^[7]。先配制0.2 mol/L的冰醋酸溶液，称取一定量的壳聚糖粉末溶于冰醋酸中配制成2%的壳聚糖溶液，后依次按照一定比例加入Ⅰ型胶原蛋白。4 ℃冰箱中过夜，注入模具后放入-80 ℃的冰箱中冷冻成型，退下模具后放入冷冻干燥机中-53 ℃冻干24 h后得到“壳聚糖/胶原蛋白”复合支架，不同配比壳聚糖/胶原蛋白支架具体参数见表1。支架成型后以紫外线发生器，以500 W/m²的剂量照射3 h，三蒸水反复冲洗，二次冻干成型得到“壳聚糖/胶原蛋白” 复合支架。

1.4.3 脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物的体外构建 取P₃经BrdU标记的脂肪干细胞，将消毒备用的“壳聚糖/胶原蛋白”支架材料取出放在培养皿中，材料上先滴加10%FBS约20 mL，孵箱内静置2-4 h，用吹打管将细胞悬液吸出轻滴在材料上，滴加细胞浓度约2×10⁸ L^-1；1 h后，取出翻面后再次滴入细胞悬液同时GDF-5滴注浓度为100 μg/L；孵箱内培养1-3 d后用后续实验。

1.4.4 膝关节软骨缺损模型兔的制备及分组干预

兔膝关节软骨缺损模型的制备：72只日本大耳白兔，共72膝，随机分为4组，每组18膝。肌肉注射速眠新0.2 mL/kg麻醉动物，常规消毒铺巾，依次切开膑韧带外侧缘，充分暴露股骨下端滑车中央部，在其上做一个直径 mm，深度达3 mm的圆柱形缺损，钻穿软骨下骨。

分组干预：钻孔制备软骨缺损后，清除缺损内的血凝块后，复合物组置入脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+ GDF-5复合物；支架组植入单纯支架；脂肪干细胞组：单纯植入细胞组；假手术组：单纯钻孔不作处理，无菌生理盐水冲洗关节腔，分层缝合，每组18只。术后3 d给予青霉素80万单位肌注，单笼饲养，患肢外固定后4周去除。

1.5 主要观察指标

1.5.1 一般情况观察 术后观察动物患肢切口愈合情况，有无静止与活动时肿胀，活动的步态观察，患肢有无跛行，与健侧肢体对比有无屈曲障碍，及屈伸度检查。

1.5.2 组织学检测 兔术后4，8，12周麻醉后处死，每组每个时间点分别取6只。切开整个关节大体观察并拍照。每个样本缺损修复部位采用40 g/L多聚甲醛固定48 h，按以往文献报道的改良脱钙法对标本进行脱钙^[8]，石蜡包埋，切片做常规苏木精-伊红染色及Masson染色。对修复部位进行组织学染色分析，通过Wakitani等^[9]制定的改良评分标准进行组织学评价，每个样本用组织学尺度评分，评分包括5个种类，指标从0-14分，分值高低与修复效果成负相关。

1.5.3 软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色 石蜡切片，二甲苯脱蜡至水、高压修复抗原、体积分数3%H₂O₂消除内源性过氧化物酶，PBS清洗，滴加一抗(鼠抗兔)，4 ℃过夜，次日PBS清洗3次×2 min，滴加HRP标记二抗(羊抗鼠)，37 ℃孵育30 min，PBS洗3次每次2 min，DAB显色，中性树胶封固镜检。观察修复后软骨内Ⅱ型胶原蛋白染色。

1.5.4 BrdU标记的细胞免疫荧光染色 选取各组术后4，8，12周的软骨修复组织，常规切片脱蜡至水，高压修复抗原，体积分数3%H₂O₂消除内源性过氧化物酶，然后在滴加一抗(鼠抗兔)，4 ℃过夜；次日PBS漂洗，滴加二抗(羊抗鼠)，37 ℃孵育30 min(需避光)，中性树胶封固，荧光显微镜下镜检。观察修复后的软骨细胞来源。

1.6 统计学分析 用SPSS of Windows 17.0统计软件包进行数据分析，数据以x(_)±s表示，数值符合正态分布，计量资料多组间均数的比较采用单因素方差分析，多组均数两两间比采用q 检验，α=0.05为检验水准，P < 0.05表示差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

近年来各种原因所导致的关节软骨损伤性疾病在临床上越来越多见，临床治疗此类疾病的方法多采用软骨下钻孔、自体骨膜移植及自体软骨移植^[10-11]，严重的采用人工关节置换等方法进行治疗。综上所述普遍存在着供体受限，软骨缺乏良好血液供应，移植后容易诱发骨性关节炎等缺点^[12-13]。

有学者研究表明脂肪干细胞与骨髓和脐带来源间充质干细胞相比，其在体内和体外形成血管结构方面并维持其稳定能力方面均高于后二者^[14]，且体外定向分化能力较强^[15]，自体脂肪干细胞与异体脂肪干细胞在治疗某些疾病的比较中也同时存在较大差异^[16]。当前很多实验研究表明，应用脂肪干细胞作为种子细胞可以用来修复关节软骨缺损，有学者研究表明脂肪干细胞移植到软骨缺损区后具有成软骨化的潜能^[17-18]。

实验应用自体干细胞作为种子细胞并制备壳聚糖/胶原蛋白支架修复兔关节软骨缺损^[19]，后与兔自体脂肪干细胞形成复合物加入GDF-5对缺损部位两步法进行修复。取得了较好的修复效果，与上述脂肪干细胞优点密不可分。

组织工程中良好的生物支架是组织修复3要素中不可货缺的一部分，首先脂肪干细胞具有良好的支架生物相容性以及移植后成软骨相关表达^[20]，实验中支架材料之一胶原蛋白本身作为细胞外基质的主要成分，其降解产物可被细胞利用合成新的基质^[21]，因此应用胶原蛋白作为生物支架载体可作为生物支架的一种参考选择，但单纯应用胶原蛋白作为支架存在着支架载体缺乏立体异构及强度差等缺点，脂肪干细胞与壳聚糖有较好的生物相容性^[22-23]，同时三维支架材料的丰富的空隙，较好的强度，较高孔隙率为生长因子的传递和修复时生物支撑起到了重要的作用，将二者复合不失是一种较好的选择，实验制备的支架各组材料扫描电镜观察结果可见材料表面多孔，且广泛联通性孔径。且可见胶原交织成网状，可以为细胞联系起到桥接的作用。孔径平均在200 μm以上，支架具有高度多孔性，并且孔间联通广泛，符合细胞生长的空间条件需要。在-20 ℃的低温条件下制备的支架极易受到室温的影响，而-80 ℃的相对更容易成型。材料孔隙率总体均达到了90%以上，溶胀率方面，溶胀率越大，与吸收细胞的数量呈正相关，综合评估壳聚糖和胶原蛋白在1∶3比例制备的支架孔径较大，可为细胞提供更大的生存空间。

实验中采用紫外线交联避免了应用化学试剂如中性戊二醛等对细胞的毒性作用，所以对细胞的毒性小。壳聚糖和胶原蛋白1∶3比例的支架体外实验时在第1周降解速度较快，随后几周，逐渐基形成了匀速降解，第4周时平均降解率约28%，并且外形良好，这可为软骨形成提供良好的外部支撑环境。从实验的组织相容性的结果可以看出从各组配比的支架均反应出了较好的组织相容性。有学者提出“无细胞支架”概念^[24]，研究报道了聚丙交酯、乙交酯材料复合不同的生物活性因子在组织工程骨软骨中的应用，一方面，该模型主要通过改变修复部位的刚度对缺损部位进行修复；另一方面，该模型是想通过力学特性从骨髓中的骨髓源性髓样前体细胞在软骨缺损的范围之内中召集、增殖和分化，以诱导软骨组织有规律的形成^[25]。但在此次的实验中，通过对比组织学形态和评分结果，发现单纯的支架组无论从修复时间还是从修复效果上，都不及复合细胞组，术后8，12周，支架组大体观察修复区缺损已经由组织填充，组织学染色观察结果：填充的组织虽可见软骨细胞，但细胞形态较为幼稚，且基质区纤维排列紊乱修复结构趋向于纤维软骨。此结果在今后的生物力学方面以及远期的修复效果是不利的，所以复合细胞修复软骨缺损目前认为仍然是首选方式，分析原因可能是由于在软骨修复过程中，细胞数量少是导致软骨缺损修复困难的主要原因。

有学者应用多孔PA66/N-HA复合间充质干细胞共同修复关节软骨缺损^[26]，该实验4个月时缺损大部分由透明软骨所替代。从修复效果相对比，这与此次实验术后12周时修复效果相近，但修复周期已经显著延长。实验中壳聚糖/胶原蛋白支架材料于术后12周时已完全降解，而应用PA66/N-HA与4个月时仍可见支架结构。分析该实验修复周期较长的原因很可能由于该材料不宜降解的特性导致对修复时间起到了一定的影响。

Athanasiou等^[27]提出过“双向”载体的概念，将载体材料由双层结构组合而成，使材料既可以对软骨修复的同时对软骨下骨也进行修复。实验在动物疾病造模的过程中，同时发现软骨下骨损伤现象的出现，而且实验在缺损修复的观察中同时也发现，有的一些标本可以看到软骨与软骨下骨之间存在着较大空隙，这可能是由于骨与软骨下骨修复不同步造成的，这对实验的载体提出了更高的要求。应用实验的载体材料不应该仅仅局限于单纯修复软骨的层面上，更应该考虑到软骨下骨的修复。

GDF-5生长因子做为诱导剂在软骨缺损修复过程中也起到了至关重要的作用^[28]，单纯植入细胞或是植入细胞生长因子存在着细胞或生长因子悬液极易流失，对缺损软骨修复有限，实验中应用生长因子浓度根据文献采用质量浓度100 μg/L^[29]，同比其他生长因子成软骨细胞作用更明显，同时在实验过程中，实验发现无论是移植物植入后未出现机体免疫反应，考虑一方面脂肪干细胞来源为自体因素，另一方面有研究表明脂肪干细胞有抑制移植排斥反应作用且与细胞浓度相关^[30]，还有学者指出壳聚糖及其衍生物在体内主要依靠体内溶菌酶，降解产物主要是壳寡糖和低聚糖这些产物能被组织吸收^[31]，也降低了机体的免疫排斥反应。综合上述相关因素，作者认为该实验兔术后未出现明显免疫排斥反应与其均存在密切相关性，在接下来实验中会进一步进行相关因素研究及论证。

综上所述，应用脂肪干细胞复合壳聚糖/胶原蛋白支架材料加入GDF-5生长因子修复关节软骨缺损，为临床治疗各种原因导致的关节软骨损伤疾病，提供了前期动物实验依据，为临床治疗此类疾病提供了新思路，有望成为临床治疗的一种新手段。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

自体脂肪干细胞、壳聚糖/胶原蛋白支架材料及GDF-5复合物移植修复兔软骨缺损

Repairing articular cartilage defects in rabbits by adipose-derived stem cells combined with chitosan/collagen scaffold and GDF-5

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