大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

doi:10.12307/2025.097

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (23): 4965-4974.doi: 10.12307/2025.097

• 干细胞因子及调控因子 stem cell factors and regulatory factors • 上一篇下一篇

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

王联1，2，谢娜2，赵珮伶1，2，陈浩1，2，李芏酉1，2，王豫萍1，2

1贵州医科大学附属医院临床检验中心，贵州省贵阳市 550003；2贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室，贵州省贵阳市 550004

收稿日期:2024-03-06 接受日期:2024-05-22 出版日期:2025-08-18 发布日期:2024-09-30
通讯作者: 王豫萍，教授，博士生导师，贵州医科大学附属医院临床检验中心，贵州省贵阳市 550003；贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室，贵州省贵阳市 550004
作者简介:王联，女，1996 年生，贵州省毕节市人，汉族，贵州医科大学在读硕士，主要从事肝纤维化的防治研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81860118)，项目负责人：王豫萍；贵州省卫健委科学技术基金项目 (gzwkj2021-119)，项目负责人：王豫萍

Effects of cannabidiol on hepatic stellate cell activation and hepatic fibrosis induced by transforming growth factor beta1

Wang Lian1, 2, Xie Na2, Zhao Peiling1, 2, Chen Hao1, 2, Li Duyou1, 2, Wang Yuping1, 2

1Clinical Laboratory Center, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550003, Guizhou Province, China; 2Department of Clinical Microbiology and Immunology, School of Clinical Laboratory Science, Guizhou Medical University, Guiyang 550004, Guizhou Province, China

Received:2024-03-06 Accepted:2024-05-22 Online:2025-08-18 Published:2024-09-30
Contact: Wang Yuping, Professor, Doctoral supervisor, Clinical Laboratory Center, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550003, Guizhou Province, China; Department of Clinical Microbiology and Immunology, School of Clinical Laboratory Science, Guizhou Medical University, Guiyang 550004, Guizhou Province, China
About author:Wang Lian, Master candidate, Clinical Laboratory Center, Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, Guiyang 550003, Guizhou Province, China; Department of Clinical Microbiology and Immunology, School of Clinical Laboratory Science, Guizhou Medical University, Guiyang 550004, Guizhou Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 81860118 (to WYP); Guizhou Provincial Health Commission Science and Technology Foundation, No. gzwkj2021-119 (to WYP)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
大麻二酚：是一种不具有精神活性的天然大麻素，提取自植物大麻，因具有镇痛、抗炎、抗氧化、抗纤维化等药理学作用而受到广泛关注，在心血管系统疾病、神经退行性疾病、自身免疫性疾病、癌症和代谢性疾病中具有重要的研究意义。

肝星状细胞：是一种位于肝脏窦周间隙的非实质细胞，参与调节肝脏生长、免疫和炎症等功能。肝星状细胞受不利因素刺激可活化成为肌成纤维细胞，过度合成并分泌细胞外基质，沉积形成纤维瘢痕，是肝纤维化发生发展过程中的关键环节。

摘要
背景：大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用，并且不具有精神活性，在肝脏疾病中的研究日渐增加，但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。
目的：探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响，研究其抗肝纤维化的可能机制。
方法：①体外实验：选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)，分6组培养：对照组常规培养24 h，单纯药物组加入大麻二酚培养24 h，造模组加入转化生长因子β1培养24 h，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1，5 μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后，检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。②动物体内实验：将C57BL/6J小鼠随机分为5组，每组8只：假手术组不造模，造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型，造模3周后分别腹腔注射4，8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素，1次/d，连续给药7 d。给药结束后，检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。
结果与结论：①体外实验：与对照组比较，造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P < 0.05)，Smad7蛋白表达降低(P < 0.05)；两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化，并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显；②体内实验：与假手术组比较，模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P < 0.05)，肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P < 0.05)，转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活，α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P < 0.05)；两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化，并且以造模+高剂量药物组效果更明显；③结果表明，大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

https://orcid.org/0009-0008-4095-1333 (王联)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 大麻二酚, 肝星状细胞, 肝纤维化, 信号转导通路, 转化生长因子β1/Smad, HSC-T6细胞

Abstract: BACKGROUND: Cannabidiol has anti-inflammatory, antioxidant, and other pharmacological effects, and has no mental activity, so the research in liver disease is increasing day by day, but its effect on transforming growth factor-β1/Smad signal transduction pathway in hepatic stellate cells is not clear.
OBJECTIVE: To investigate the effect of cannabidiol on transforming growth factor-β1/Smad signal transduction pathway in hepatic stellate cells and its possible mechanism of anti-hepatic fibrosis.
METHODS: (1) In vitro experiment: Rat hepatic stellate cell line (HSC-T6) was selected and cultured in six groups. The control group was routinely cultured for 24 hours. The simple drug group was cultured with cannabidiol for 24 hours. The modeling group was cultured with transforming growth factor β1 for 24 hours. The modeling + low-dose drug group, the modeling + high-dose drug group, and the modeling + positive control group were cultured with transforming growth factor β1 for 24 hours, 1, 5 μmol/L cannabidiol and silymarin were cultured for 24 hours. After culture, the mRNA expression of α-smooth muscle actin and type I collagen, the levels of interleukin 1β and tumor necrosis factor α, and the protein expression of type I collagen and transforming growth factor β1/Smad signal transduction pathway were detected in each group. (2) In vivo experiments: C57BL/6J mice were randomly divided into five groups with eight mice in each group. Models were not established in the sham operation group. The liver fibrosis models were established by biliary ligation in the modeling group, the modeling+low-dose drug group, the modeling+high-dose drug group, and the modeling+positive control group. At 3 weeks after the modeling, 4, 8 mg/kg cannabidiol or silymarin were injected intraperitoneally, once a day, for 7 consecutive days. After administration, the liver function, liver pathological morphology, expression levels of α-smooth muscle actin, type I collagen, and transforming growth factor β1/Smad signal transduction pathway related protein were detected in each group.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) In vitro experiment: Compared with the control group, mRNA expression of α-smooth muscle actin and type I collagen, interleukin 1β and tumor necrosis factor α, and protein expression of type I collagen, transforming growth factor β1 and p-Smad2/3 in HSC-T6 cells were increased (P < 0.05), while Smad7 protein expression was decreased (P < 0.05) in the modeling group. Two doses of cannabidiol could improve the above changes in HSC-T6 cells induced by transforming growth factor β1, and the improvement was more obvious in the modeling+high-dose drug group. (2) In vivo experiment: Compared with sham operation group, the activities of serum alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase were increased (P < 0.05), inflammatory cell infiltration and collagen content in liver tissue were increased (P < 0.05), and the transforming growth factor β1/Smad signal transduction pathway was activated; α-smooth muscle actin and type I collagen expression levels were increased (P < 0.05) in the modeling group. Two doses of cannabidiol could reduce the changes of the above indexes in the modeling mice, and the effect was more obvious in the modeling+high-dose drug group. (3) It is indicated that cannabidiol inhibits hepatic fibrosis by suppressing the activation of transforming growth factor-β1/Smad signal transduction pathway in hepatic stellate cells.

Key words: cannabidiol, hepatic stellate cell, hepatic fibrosis, signal transduction pathway, transforming growth factor-β1/Smad, HSC-T6 cell

中图分类号:

王联, 谢娜, 赵珮伶, 陈浩, 李芏酉, 王豫萍. 大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(23): 4965-4974.

Wang Lian, Xie Na, Zhao Peiling, Chen Hao, Li Duyou, Wang Yuping. Effects of cannabidiol on hepatic stellate cell activation and hepatic fibrosis induced by transforming growth factor beta1[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(23): 4965-4974.

图/表（结果） 4

2.1 体外实验结果
2.1.1 转化生长因子β1对HSC-T6细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白表达的影响 α-平滑肌肌动蛋白是HSC-T6细胞活化的标志物，其表达水平升高提示HSC-T6细胞受到刺激发生了活化，活化后会向肌成纤维细胞转变。与对照组比较，造模组HSC-T6细胞活化分子标志物α-平滑肌肌动蛋白表达明显升高(P < 0.001)，见图1，提示在转化生长因子β1诱导下，HSC-T6细胞发生活化，表达大量的α平滑肌肌动蛋白。
2.1.2 大麻二酚对HSC-T6细胞活力的影响 通过CCK-8实验筛选大麻二酚作用浓度，结果显示：随着培养基中大麻二酚浓度的升高，HSC-T6细胞活力逐渐下降，见图2A。为避免高浓度大麻二酚对HSC-T6细胞产生毒性，因此选择低剂量 1 μmol/L和高剂量5 μmol/L的大麻二酚用作后续细胞实验。如图2B所示，与对照组比较，造模组HSC-T6细胞经转化生长因子β1刺激后细胞活力增强(P < 0.001)，经大麻二酚或水飞蓟素处理后HSC-T6细胞活力明显降低(P < 0.05或P < 0.001)，并且大麻二酚对HSC-T6细胞活性的抑制作用呈现浓度依赖性。

2.1.3 各组HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原mRNA表达 与对照组比较，单纯药物组HSC-T6细胞中纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原mRNA表达无明显变化(P > 0.05)，造模组HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原与α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达显著升高(P < 0.001)，说明转化生长因子β1能诱导HSC-T6细胞发生纤维化；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原mRNA表达均降低(P < 0.001)；与造模+高剂量药物组比较，造模+低剂量药物组HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原mRNA表达降低(P < 0.05)，造模+阳性对照组HSC-T6细胞中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原mRNA表达无明显变化(P > 0.05)，见图3。结果表明，大麻二酚对转化生长因子β1诱导的HSC-T6 细胞活化和纤维化基因的表达有抑制作用。
2.1.4 各组HSC-T6细胞中炎症因子表达的影响 与对照组比较，单纯药物组HSC-T6细胞中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平无明显变化(P > 0.05)，造模组HSC-T6细胞中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平显著升高(P < 0.001)；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组HSC-T6细胞中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平降低(P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001)；与造模+高剂量药物组比较，造模+低剂量药物组HSC-T6细胞中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平升高(P < 0.05)，造模+阳性对照组HSC-T6细胞中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平无明显变化(P > 0.05)，见图4。结果表明，大麻二酚对活化HSC-T6细胞的炎症反应具有抑制作用。
2.1.5 各组HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原及转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白的表达 与对照组相比，单纯药物组HSC-T6 细胞中Ⅰ型胶原及转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达水平无明显变化(P > 0.05)，造模组HSC-T6 细胞中Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3 蛋白表达显著升高(P < 0.01或P < 0.001)，Smad7蛋白表达显著减少(P < 0.001)；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3 蛋白表达显著降低(P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001)，Smad7蛋白表达升高(P < 0.05或P < 0.01或P < 0.001)；与造模+高剂量药物组比较，造模+低剂量药物组除Smad7外其余蛋白表达有明显变化(P < 0.05)，造模+阳性对照组除了Ⅰ型胶原与Smad7外其余蛋白表达有明显变化(P < 0.05)，见图5。这些结果表明，大麻二酚能抑制活化HSC-T6细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路。

2.2 动物体内实验结果
2.2.1 实验动物数量分析 40只C57BL/6J小鼠全部进入结果分析。
2.2.2 各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性 与假手术组比较，造模组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性显著升高(P < 0.001)，提示小鼠肝细胞发生损伤；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性均降低(P < 0.001)；与造模+高剂量药物组比较，造模+低剂量药物组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性均升高(P < 0.05)，造模+阳性对照组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性无明显改变(P > 0.05)，见图6。结果表明，大麻二酚能显著改善肝纤维化小鼠的肝细胞损伤，有一定的肝损伤保护作用。
2.2.3 各组小鼠肝脏病理形态变化
苏木精-伊红染色：假手术组小鼠肝细胞形态完整，肝小叶结构清晰；造模组小鼠肝脏出现大面积坏死，肝小叶结构明显破坏，较多炎症细胞浸润；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组小鼠肝组织坏死程度显著减弱，肝小叶结构可见，炎症细胞浸润减轻，见图7。
马松染色：假手术组小鼠肝脏胶原含量较少；造模组小鼠肝脏胶原呈条索状，胶原含量显著增加；造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组小鼠肝脏胶原含量少于造模组，见图7。

结果表明，大麻二酚能减轻肝纤维化小鼠肝脏组织炎症细胞浸润、减少组织中胶原含量，改善肝纤维化程度。
2.4.4 各组小鼠α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原及转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白的表达 与假手术组相比，造模组小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的蛋白表达显著升高(P < 0.001)，转化生长因子β1、p-Smad2/3 的蛋白表达升高(P < 0.001，P < 0.05)，Smad7蛋白表达降低(P < 0.001)；与造模组比较，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3 蛋白表达均降低(P < 0.01或P < 0.001)，Smad7蛋白表达升高(P < 0.05或P < 0.001)；与造模+高剂量药物组比较，造模+低剂量药物组α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原及转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白的表达均有明显变化(P < 0.05)，造模+阳性对照组上述指标均无明显变化(P > 0.05)，见图8。
结果表明，大麻二酚不仅能抑制胆管结扎致小鼠肝纤维化中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的激活，而且能抑制肝星状细胞的活化，从而改善小鼠肝纤维化程度。

参考文献

[1] KISSELEVA T, BRENNER D. Molecular and cellular mechanisms of liver fibrosis and its regression. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2021; 18(3):151-166.
[2] CAI X, WANG J, WANG J, et al. Intercellular crosstalk of hepatic stellate cells in liver fibrosis: New insights into therapy. Pharmacol Res. 2020; 155:104720.
[3] LI Y, WANG L, ZHANG Q, et al. Blueberry Juice Attenuates Pulmonary Fibrosis via Blocking the TGF-β1/Smad Signaling Pathway. Front Pharmacol. 2022;13:825915.
[4] DEWIDAR B, MEYER C, DOOLEY S, at al. TGF-β in Hepatic Stellate Cell Activation and Liver Fibrogenesis-Updated 2019. Cells. 2019; 8(11):1419.
[5] 周林华,陈晓.栀子苷通过TGF-β1/Smad信号通路抑制肝纤维化和肝星状细胞活化[J].生理学报,2022,74(2):217-224.
[6] LIU W, WU J, CAO H, et al. Human-Induced Hepatocytes-Derived Extracellular Vesicles Ameliorated Liver Fibrosis in Mice Via Suppression of TGF-β1/Smad Signaling and Activation of Nrf2/HO-1 Signaling. Stem Cells Dev. 2023;32(19-20):638-651.
[7] HUANG Y, WAN T, PANG N, et al. Cannabidiol protects livers against nonalcoholic steatohepatitis induced by high-fat high cholesterol diet via regulating NF-κB and NLRP3 inflammasome pathway. J Cell Physiol. 2019;234(11):21224-21234.
[8] SURYAVANSHI SV, ZAIACHUK M, PRYIMAK N, et al. Cannabinoids Alleviate the LPS-Induced Cytokine Storm via Attenuating NLRP3 Inflammasome Signaling and TYK2-Mediated STAT3 Signaling Pathways In Vitro. Cells. 2022;11(9):1391.
[9] CHU FX, WANG X, LI B, et al. The NLRP3 inflammasome: a vital player in inflammation and mediating the anti-inflammatory effect of CBD. Inflamm Res. 2024;73(2):227-242.
[10] 马润,舒远辉,谢娜,等.大麻二酚对小鼠肝纤维化抗氧化作用[J].中国公共卫生,2022,38(2):181-185.
[11] 吴雅锋,龙翠珍,舒远辉,等.大麻素受体- 2激动剂AM1241对急性肝损伤小鼠肝组织炎性体NLRP3影响[J].中国公共卫生,2019, 35(5):571-573
[12] 龙翠珍,舒远辉,何萍,等.大麻素受体2激动剂AM1241对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖、活化及凋亡的影响[J].天津医药,2020, 48(7): 606-610.
[13] XIE N, MA R, WANG L, et al. Cannabidiol regulates the activation of hepatic stellate cells by modulating the NOX4 and NF-κB pathways. Food Chem Toxicol. 2024;186:114517.
[14] 杨建华,杨秀娟,赵耀,等.护肝布祖热对CCl4诱导人肝星状细胞LX-2活化的作用及机制研究[J].中药新药与临床药理,2022,33(10): 1315-1321.
[15] ZHANG K, ZHANG MX, MENG XX, et al. Targeting GPR65 alleviates hepatic inflammation and fibrosis by suppressing the JNK and NF-κB pathways. Mil Med Res. 2023;10(1):56.
[16] BERUMEN J, BAGLIERI J, KISSELEVA T, et al. Liver fibrosis: Pathophysiology and clinical implications. WIREs Mech Dis. 2021; 13(1):e1499.
[17] BAI YM, YANG F, LUO P, et al. Single-cell transcriptomic dissection of the cellular and molecular events underlying the triclosan-induced liver fibrosis in mice. Mil Med Res. 2023;10(1):7.
[18] 王浩,莫缓椰,孙联康,等.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73对肝纤维化的治疗作用及相关机制研究[J].中华肝胆外科杂志, 2023,29(4):278-284.
[19] HAMMERICH L, TACKE F. Hepatic inflammatory responses in liver fibrosis. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2023;20(10):633-646.
[20] RHO H, TERRY AR, CHRONIS C, et al. Hexokinase 2-mediated gene expression via histone lactylation is required for hepatic stellate cell activation and liver fibrosis. Cell Metab. 2023;35(8):1406-1423.
[21] SILVESTRI C, PARIS D, MARTELLA A, et al. Two non-psychoactive cannabinoids reduce intracellular lipid levels and inhibit hepatosteatosis. J Hepatol. 2015;62(6):1382-1390.
[22] JIANG X, GU Y, HUANG Y, et al. CBD Alleviates Liver Injuries in Alcoholics With High-Fat High-Cholesterol Diet Through Regulating NLRP3 Inflammasome-Pyroptosis Pathway. Front Pharmacol. 2021; 12:724747.
[23] YANG L, ROZENFELD R, WU D, et al. Cannabidiol protects liver from binge alcohol-induced steatosis by mechanisms including inhibition of oxidative stress and increase in autophagy. Free Radic Biol Med. 2014;68:260-267.
[24] 曹力波,李兵,李佐军,等.水飞蓟素对肝纤维化小鼠的保护作用及机制探讨[J].中国药理学通报,2009,25(6):794-796.
[25] BALTA C, HERMAN H, BOLDURA OM, et al. Chrysin attenuates liver fibrosis and hepatic stellate cell activation through TGF-β/Smad signaling pathway. Chem Biol Interact. 2015;240:94-101.
[26] YANG CH, TING WJ, SHEN CY, et al. SHSST-cyclodextrin complex inhibits TGF-β/Smad3/CTGF to a greater extent than silymarin in a rat model of carbon tetrachloride-induced liver injury. Mol Med Rep. 2015;12(4):6053-6059.
[27] TSUCHIDA T, FRIEDMAN SL. Mechanisms of hepatic stellate cell activation. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2017;14(7):397-411.
[28] 吴朕,马微,臧成昊,等.三七皂苷R1保护四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的作用[J].中国组织工程研究,2020,24(26):4213-4217.
[29] ZHAO YQ, DENG XW, XU GQ, et al. Mechanical homeostasis imbalance in hepatic stellate cells activation and hepatic fibrosis. Front Mol Biosci. 2023;10:1183808.
[30] 应勤丽,黄月碧,杨秀翠,等.圣草酚通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾纤维化[J].中国免疫学杂志,2023,39(4): 693-697.
[31] 岳杉杉,彭安康,马泽江,等.柚皮素通过调控TGF-β1/smad通路抑制肝纤维化[J].中国药理学通报, 2022,38(2): 248-254.
[32] 吉家兴,马俊,李博,等.黄芩素通过Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化[J].中南医学科杂志,2020,48(3):250-252+256.
[33] WU H, CHEN C, ZIANI S, et al. Fibrotic Events in the Progression of Cholestatic Liver Disease. Cells. 2021;10(5):1107.

引言

肝纤维化是由诸多不利因素引起的慢性肝损伤反应[1]。肝损伤发生时，静息的肝星状细胞受到刺激会转分化为具有增殖、收缩特性的肌成纤维细胞，合成大量α-平滑肌肌动蛋白并分泌大量胶原(例如Ⅰ型胶原蛋白)，同时也释放促炎症细胞因子，而胶原蛋白过度沉积造成肝结缔组织异常增生，影响肝脏正常功能[2-3]。研究表明肝纤维化是一个可逆的病理过程，但是这一过程如果长期持续发展就会进展为肝硬化、肝癌甚至死亡[4]。转化生长因子β1不仅是肝星状细胞转化和增殖最有效的细胞因子之一，而且能激活转化生长因子β1/Smad信号传导途径，促进Smad2与Smad3 的磷酸化[5-6]。因此，研究能抑制转化生长因子β1/Smad信号转导通路的药物来防治肝纤维化，具有极其重要的临床意义。
大麻二酚是从大麻中提取的一种化学成分，为非精神活性药物，近年来因具有镇痛、抗炎、抗氧化、抗纤维化等药理学作用而受到广泛关注。在肝脏疾病方面，大麻二酚能抑制核因子κB核转位及炎症小体的激活，进而改善非酒精性脂肪性肝炎[7]，在体外通过减弱TYK2介导的STAT3信号转导通路来缓解脂多糖诱导的细胞因子风暴[8]，通过阻断NLRP3信号转导通路抑制炎症[9]；同时结合课题组前期研究发现，大麻二酚可通过抑制氧化应激和炎症反应改善酒精性脂肪肝和减轻CCl4诱导的小鼠肝损伤[10-13]，然而，目前关于大麻二酚抗肝纤维化的可能作用机制尚不明确。此次实验旨在通过探讨大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和抗肝纤维化可能的作用机制，为安全有效的药物得以应用于临床肝纤维化的防治提供可靠依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 体外细胞学实验，体内动物学实验，进行t检验或单因素方差分析。
1.2 时间及地点 实验于2022年5月至 2023年11月在贵州医科大学医学检验学院临床诊断实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 细胞及动物 大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)购自武汉Procell公司；40只雄性C57BL/6J小鼠，SPF级，6-8周龄，体质量(18±22) g，购自贵州医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(贵)2023-0002。小鼠喂养在恒温恒湿、12 h光暗交替循环的标准环境中，自由获取小鼠饲料和饮用水。
动物实验方案已通过贵州医科大学伦理委员会批准(1800363)。
1.3.2 药物与试剂 大麻二酚与水飞蓟素购自美国 Sigma 公司；重组人转化生长因子β1蛋白购自美国 Peprotech公司；苏木精-伊红染色及马松染色试剂盒、快速高效RIPA裂解液、BCA法蛋白定量试剂盒、苯甲基磺酰氟蛋白酶抑制剂均购自北京索莱宝生物科技有限公司；α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、GAPDH引物由上海生工生物技术有限公司设计合成；抗转化生长因子β1、抗α-平滑肌肌动蛋白、抗Ⅰ型胶原抗体购自美国CST公司；抗Smad2/3、抗p-Smad2/3、抗Smad7抗体购自中国万类生物科技公司；抗GAPDH抗体购自华安生物技术有限公司；辣根过氧化物酶标记的二抗购自南京巴傲得生物科技有限公司；白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α试剂盒均购自上海酶联生物有限公司；丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶生化试剂盒均购自南京建成生物研究所；胎牛血清购自以色列 BI公司；胰蛋白酶、高糖DMEM培养基购自美国Gibco公司；聚偏二氟乙烯膜购自美国Merck Millipore公司。
1.4 方法
1.4.1 体外细胞实验
筛选大麻二酚实验浓度：将100 μL HSC-T6细胞悬液接种于96孔板中，细胞密度7×103/孔，分别加入不同浓度的大麻二酚(0，1，2.5，5，10，15 μmol/L)培养24 h，吸去培养液后用PBS润洗2遍，每孔加入含体积分数10%CCK-8试剂的高糖DMEM液体培养基100 μL，继续培养2 h，于酶标仪450 nm波长处测定吸光度值，计算细胞活力，进而筛选适宜浓度的大麻二酚进行后续细胞实验。
大麻二酚对转化生长因子β1诱导HSC-T6细胞活力的影响：将100 μL HSC-T6细胞悬液接种于96孔板中，细胞密度7×103/孔，分5组培养：对照组不加入任何药物，常规培养24 h；造模组加入5 ng/mL转化生长因子β1培养24 h；造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入5 ng/mL转化生长因子β1培养24 h，然后分别加入1，5 μmol/L大麻二酚或10 μg/mL水飞蓟素培养24 h[14]。各组细胞培养结束后，吸去培养液后用PBS润洗2遍，每孔加入含体积分数10%CCK-8试剂的高糖DMEM液体培养基100 μL，继续培养2 h，于酶标仪450 nm波长处测定吸光度值，计算细胞活力。
细胞培养及分组：将HSC-T6细胞水平放置在环境为37 ℃、体积分数5%CO2、湿度适宜的培养箱中，加入含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养。将处于对数生长期的HSC-T6细胞接种于6孔板中，细胞密度5×105/孔，每孔加入2 mL培养基后分6组培养：对照组不加入任何药物，常规培养24 h；单纯药物组加入5 μmol/L大麻二酚的培养液培养24 h；造模组加入5 ng/mL转化生长因子β1培养24 h；造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组首先加入5 ng/mL转化生长因子β1培养24 h，然后分别加入1，5 μmol/L大麻二酚或10 μg/mL水飞蓟素培养24 h[14]。

RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达：各组细胞培养结束后弃上清，用预冷的PBS洗涤2遍，严格按提取总RNA试剂盒说明书对各组细胞进行提取、定量及RT-PCR反应，变性95 ℃30 s，退火95 ℃5 s；延伸60 ℃30 s，共40个循环，所用RT-PCR引物序列见表1，以GAPDH为内源性对照，以2-ΔΔCt法计算目的基因相对表达量的变化。

ELISA法检测白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平：各组细胞培养结束后，收集上清液，于4 ℃下3 000 r/min离心20 min，吸取上清液于无菌离心管内保存。于标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL，样本孔依次加入稀释液40 μL及样本10 μL，上述各孔再分别加入酶标试剂100 μL，空白孔除外。用封板膜封板后37 ℃孵育1 h，揭掉封板膜甩干后用洗涤液洗板5次，再加入A、B显色液各50 μL，混匀后37 ℃避光显色15 min，加入终止液50 μL终止反应，在450 nm波长处测量吸光度值，根据标准曲线计算白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平。
Western blot检测相关蛋白表达：各组细胞培养结束后，检测对照组与造模组α-平滑肌肌动蛋白的表达，检测各组细胞Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白及Smad7蛋白的表达。弃去上清，用预冷的PBS轻轻洗涤2遍，加入含1%苯甲基磺酰氟的RIPA裂解液80 μL冰上裂解30 min，在输出功率为25%超声仪上超声5 s停止10 s，进行4个循环后充分破碎细胞；将细胞裂解液于4 ℃下12 000×g离心20 min，吸取上清液，用BCA法测定样品蛋白浓度；加入上样缓冲液涡旋混匀后置于金属浴中100 ℃变性10 min，再保存于-20 ℃ 冰箱；根据试剂盒配制不同浓度SDS-PAGE凝胶，电泳时先80 V恒压30 min，再120 V继续分离蛋白并转印至聚偏二氟乙烯膜上，使用5%脱脂牛奶封闭2 h，将目的蛋白膜分别放入转化生长因子β1、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7抗体中(抗体稀释比为1∶1 000)，内参GAPDH抗体稀释比为1∶10 000， 4 ℃孵育过夜；次日用预先配制好的1×TBST洗涤3次，10 min/次，于室温孵育对应的二抗1.5 h，3次漂洗后进行化学发光，使用凝胶成像系统曝光膜条，通过Image J分析软件进行灰度值量化。
1.4.2 动物体内实验
小鼠分组及给药：小鼠适应性喂养1周后，采用随机数字法分为5组：假手术组、造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组，每组8只。术前腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液20mg/kg麻醉小鼠，备皮后固定小鼠四肢，以体积分数75%乙醇消毒手术区域，依次剪开皮及肌肉层，将撑开器放入腹腔暴露肝脏，用沾有生理盐水的棉签拨开肝叶并暴露胆管，镊子钝性游离0.5 cm胆总管，假手术组将手术线穿过胆总管但不结扎，其余4组用6-0手术缝线结扎胆总管上下两端建立肝纤维化模型，用生理盐水冲洗腹腔3遍后用棉球吸干，最后逐层关腹，全程无菌操作。造模3周后，通过肝脏切片苏木精-伊红染色及马松染色证实肝纤维化造模成功。造模3周后，假手术组及造模组小鼠腹腔注射等量生理盐水10 mL/kg，造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组小鼠分别腹腔注射大麻二酚4，8mg/(kg·d)[10]，造模+阳性对照组小鼠腹腔注射水飞蓟素50 mg/(kg·d)，连续给药7 d。末次给药24 h后再次麻醉小鼠，收集眼球血液1 mL及肝组织，将肝左叶置于40 g/L多聚甲醛溶液中固定用于病理组织学观察，其余肝组织置于-80 ℃中保存用于后续实验。
微板法检测肝功能指标：血液室温凝固30 min，5 000 r/min离心10 min，取上清液备用。微孔板中加入预温基质液试剂20 μL、样本5 μL，混匀后37 ℃反应30 min，加入试剂二20 μL 37 ℃反应20 min，加入试剂三200 μL室温反应15 min，测量510 nm处的吸光度值，根据制作的标准曲线计算出丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶的活性。
肝组织病理形态检测：取小鼠肝左叶用40 g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片。苏木精-伊红染色根据试剂盒说明书进行，切片脱蜡，苏木精染细胞核5 min以固定组织，流水冲洗，酸性乙醇脱水发蓝后流水冲洗，伊红染色2 min，再脱水封固镜检。按照试剂盒标准步骤进行马松染色，脱蜡至水→媒染→分化→复染→分化→甲苯胺蓝复染5 min→快速脱水→中性树脂封固→镜检采集图片，分析肝组织胶原面积百分比。
Western blot检测相关蛋白表达：称取30 mg肝组织，加入300 μL裂解液冰上裂解1 h，在输出功率为35%超声仪上超声5 s停止10 s，进行4个循环后充分破碎组织；将肝组织裂解液于4 ℃下12 000×g离心20 min，吸取上清液，后续操作步骤同上，检测α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白及Smad7蛋白的表达。
1.5 主要观察指标 各组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达，各组C57BL/6J小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。

1.6 统计学分析 用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析，对符合正态分布的计量资料以x±s表示，组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析，以P < 0.05表示差异有显著性意义。该文统计学方法已经贵州医科大学生物统计学专家审核。

讨论

肝纤维化是一种主要的慢性肝脏病理过程，由细胞外基质的过度沉积、炎症和肝损伤发展而来[15-16]。肝纤维化是由胆道梗阻、乙型/丙型肝炎病毒感染和酗酒等多种病因引起的，持续性肝损伤和损伤修复反应引起的肝细胞、炎症细胞和肝肌成纤维细胞之间的相互作用会导致肝纤维化[17-19]。不加干预的肝纤维化可进一步恶化为肝硬化，危及患者生命安全[20]。虽然根据肝纤维化的病因、分期和进展已经开发出了几类药物，但目前没有标准的治疗方法，因此研发出安全可靠有效的药物具有重大的临床意义。
大麻二酚作为一种植物提取物无神经依赖性，具有抗炎、抗氧化等多种药理学功效，近年来在肝脏疾病中的研究热度不断增加。对于非酒精性脂肪性肝病，SILVESTRI等[21]已经证明大麻二酚具有抗肝脏脂肪变性的作用，能在人类肝细胞系的体外模型以及肥胖小鼠中减少脂质积累，并且呈剂量依赖性和时间依赖性。在高脂肪饮食喂养的小鼠中，大麻二酚通过抑制枯否细胞中NLRP3炎症小体通路的激活，减少核因子κB的激活，抑制焦磷酸反应，从而减少高脂饮食诱导的肝脏炎症[22]。此外，大麻二酚通过抑制氧化应激抑制p38/JNK/MAPK活性和肝中性粒细胞的渗透，并且增加自噬来进一步防止小鼠免受酒精诱导的脂肪变性影响[23]。虽然大麻二酚在抗脂肪变性中的研究颇多，但其在胆管结扎诱导小鼠肝纤维化中的作用机制研究较少，因此，此次研究通过体内外实验来探讨大麻二酚抗纤维化的潜在机制。水飞蓟素作为一种临床应用很广泛的护肝药物，具有清除活性氧、抗脂质过氧化、抗炎等功效，通过抑制核因子κB信号转导通路的激活减轻炎症反应，抑制肝星状细胞的增殖，下调α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达及胶原生成，进而发挥抗肝纤维化作用[24]。此外有研究表明，水飞蓟素可通过调节转化生长因子β1/Smad信号转导通路抑制肝纤维化[25-26]。由于水飞蓟素抗肝纤维化的明确疗效，在此次实验中作为阳性对照药物，以验证实验方法的有效性并排除假阴性结果。此次实验结果表明，大麻二酚能抑制肝星状细胞活化和小鼠肝纤维化，可能机制是通过调节转化生长因子β1/Smad 信号转导通路实现的。
肝星状细胞正常状态下位于肝内Disse间隙，参与维生素A的代谢，表现为不增殖的静止表型[27]，经过刺激因素作用后转变为活化状态，合成分泌大量的胶原及细胞外基质，破坏肝脏生理结构。肝星状细胞是肝纤维化发生发展的重要核心环节，阻断肝星状细胞活化或使其失活是潜在的抗肝纤维化的靶点[28]。转化生长因子β1作为一种强促纤维化因子能诱导肝星状细胞活化，使细胞高表达α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原，持续促进肝纤维化[29]。此次实验以5 ng/mL转化生长因子β1刺激HSC-T6细胞建立体外肝纤维化模型，诱导后的HSC-T6细胞活力加强，Ⅰ型胶原及促纤维化因子转化生长因子β1的蛋白表达显著增加，同时纤维化基因α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原mRNA高表达；大麻二酚处理可显著抑制转化生长因子β1刺激后的HSC-T6细胞活力，下调Ⅰ型胶原及转化生长因子β1蛋白表达，并且α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达水平显著降低，表明大麻二酚在体外抑制肝星状细胞活化，对促纤维化相关因子具有抑制作用。实验结果还显示，大麻二酚能显著降低活化HSC-T6细胞中炎症细胞因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α的高表达，发挥抗炎作用。
转化生长因子β1/Smad信号转导通路在多种病理条件下的肝纤维化发展中起着核心作用[30]。活化的转化生长因子β1通过与细胞膜上的Ⅰ型和Ⅱ型受体结合进而介导信号传导，促进Smad2/3磷酸化，之后与Smad4形成复合物转定位于细胞核，通过与靶基因启动子中存在的 Smad 结合元件结合而调控下游促纤维化基因转录[31-32]。而Smad 7属于抑制性Smad蛋白，扮演一个负调节因子作用。为了进一步研究大麻二酚的抗纤维化作用是否与调控转化生长因子β1/Smad信号转导通路有关，检测了活化HSC-T6细胞中p-Smad2/3和Smad7的蛋白表达情况，结果发现：大麻二酚能抑制Smad2/3的磷酸化并阻止其入细胞核，阻断对下游基因的调控转录作用，增加抑制性蛋白Smad7的表达，抑制肝星状细胞活化，发挥抗肝纤维化作用。体内实验通过胆管结扎构建小鼠肝纤维化模型，胆管结扎手术引起肝纤维化小鼠的肝细胞损伤[33]，释放至血清中的丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶大量增加，经大麻二酚治疗后可部分逆转肝细胞损伤，降低丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶活性。苏木精-伊红染色镜下观察到造模组小鼠肝脏炎性细胞浸润增加，肝小叶结构紊乱，肝组织存在大量液化性坏死；经过大麻二酚治疗后造模组小鼠肝脏结构较规整，组织坏死程度也明显减轻，炎症细胞浸润降低，提示大麻二酚具有一定的保肝作用。马松染色结果显示，造模组小鼠肝组织中蓝色胶原含量明显增加，通过大麻二酚治疗后造模组小鼠肝组织中的胶原含量显著减少，提示大麻二酚能减少胶原沉积，有效缓解肝纤维化。此外，大麻二酚能抑制胆管结扎肝纤维化小鼠中促纤维化因子转化生长因子β1的蛋白表达，抑制转化生长因子β1/Smad信号转导通路的激活，增加抑制性蛋白Smad7的表达，阻断对下游纤维化基因的调控作用；降低α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达，抑制肝星状细胞活化，抑制肝纤维化的发展。体内外实验结果显示，大麻二酚在多个抗纤维化指标中呈现出显著的剂量依赖性疗效，较高剂量的大麻二酚展现出更为显著的抗纤维化效果，并且高剂量[8 mg/(kg·d)]大麻二酚的治疗效果与水飞蓟素[50 mg/(kg·d)]相当，表明在相对剂量较低的情况下大麻二酚也能取得不错的治疗效果，具有重要的临床转化潜力。此外，大麻二酚不会引起神经依赖，且不良反应相对较小，这些特征为其在临床上的应用提供了有力的数据支持。
综上所述，大麻二酚在体内体外均能抑制肝星状细胞的纤维化反应，作用机制可能是通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的激活并增加抗炎能力实现的，为大麻二酚应用于临床治疗肝纤维化提供了一定的实验依据，其更多的抗纤维化分子机制是下一步研究方向。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

Effects of cannabidiol on hepatic stellate cell activation and hepatic fibrosis induced by transforming growth factor beta1

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[1]	徐岩, 王雪淞, 周林, 周晓磊, 金煜, 叶俊松. 不同策略提高间充质干细胞治疗肝纤维化：效果与潜在风险分析[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(23): 5002-5012.
[2]	黄朝露, 黄毅, 吴昌燕, 李芳菲, 李海燕. 有氧运动调节转化生长因子β/Smad通路缓解db/db糖尿病小鼠的肝脏纤维化[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(14): 2951-2957.
[3]	朱文宁, 孙莉莉, 彭丽娜, 司俊成, 臧万里, 殷伟东, 李孟琪. 大麻二酚干预下力竭运动大鼠骨骼肌炎症相关基因的挖掘与验证[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(11): 2347-2356.
[4]	刘珂, 徐卫东, 周恒宇, 白硕, 张振, 葛瑞东. 活性氧在肌腱病中的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(11): 1780-1788.
[5]	陶柏楠, 王咏兰, 江露, 张宗星, 刘道忠, 万星, 黄德斌, 袁林. 柔肝降酶方含药血清抑制人肝星状细胞的活化及自噬[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(33): 5334-5341.
[6]	谢娜, 马润, 王联, 舒远辉, 何萍, 周艳, 项一宁, 王豫萍. 芒柄花素对葡萄糖氧化酶诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(33): 5309-5313.
[7]	马刚, 郑小红, 王敬博, 韩英. 间充质干细胞移植不同的途径可影响肝纤维化治疗效果[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(19): 3099-3107.
[8]	徐静, 严永敏, 蔡梦洁. miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(5): 756-761.
[9]	李熙恒, 李欣悦, 毛天娇, 杨婉琪, 唐亮, 李江. 大麻二酚促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(30): 4867-4872.
[10]	刘亚, 刘霞, 邓鹏辉, 季威, 李建平. 运动对糖尿病心肌纤维化大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及血管紧张素Ⅱ/ 转化生长因子β1/Smad2通路的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(26): 4173-4179.
[11]	郝晓娜, 张英杰, 李玉云, 许涛. 过表达脯氨酰寡肽酶的骨髓间充质干细胞修复肝纤维化模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3988-3993.
[12]	李璇, 鲁敏, 李明星, 敖梦, 唐琳梅, 曾祯, 胡经纬, 黄志强, 宣吉晴. 磁性靶向纳米粒体外多模态成像及对肝星状细胞的靶向作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(4): 566-571.
[13]	吴朕, 马微, 臧成昊, 刘矿嫔, 刘伟, 刘洁, 梁宇, 李春艳, 陈志明, 茹金, 樊楚明, 杨金伟, 郭建辉, 李力燕. 三七皂苷R1保护四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(26): 4213-4217.
[14]	李洪超, 王皙, 李莉, 李震宇, 臧祖盛, 周桁, 王晓今, 陈成伟, 程明亮, 吴君, 金银鹏, 傅青春. 人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的治疗作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(13): 1996-2004.
[15]	程钢，黄邓高，梁颖. 诱导多功能干细胞来源肝样细胞体内抗肝纤维化[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(9): 1384-1389.