2.1   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶的形貌   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶见图1A所示，含水量丰富，透明状，呈现三维结构。图1B为冻干后直径0.85 cm、厚度1 mm的水凝胶，泡沫状，用于细胞实验。图1C为磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶的扫描电镜图，呈现多孔形态，孔径在10-300 μm。



2.2   大鼠骨髓源性的巨噬细胞提取及鉴定   培养第7天巨噬细胞的形态，见图2A、2B，细胞呈椭圆状，有伪足。用F4/80染免疫荧光鉴定巨噬细胞，呈现为红色，见图2C-E，结果证实了是大鼠骨髓源性的巨噬细胞，可以用于后续实验。




2.3   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞活性的影响    见图3。



培养1，3，5 d后，3组间细胞吸光度值比较差异无显著性意义(P > 0.05)，说明磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞无明显的毒性，具有良好的细胞相容性。
2.4   磷酸肌酸壳聚糖水凝胶对巨噬细胞极化的影响   
2.4.1   Western Blot检测结果   见图4。



培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组M2型巨噬细胞表面标志物CD206蛋白表达下降(P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组CD206蛋白表达升高(P < 0.01或P < 0.05)。培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组M2型巨噬细胞表面标志物ARG1蛋白表达升高(P < 0.001)；培养3d后，与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组ARG1蛋白表达升高(P < 0.05)。
2.4.2   免疫荧光染色结果   见图5。



免疫荧光定量分析结果，见图6。培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组CD206蛋白表达降低(P < 0.01或P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组CD206蛋白表达升高(P < 0.05或P < 0.001)。 培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组ARG1蛋白表达升高(P < 0.01)；培养3 d后，与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组CD206蛋白表达升高(P < 0.05)。 
2.5   磷酸肌酸壳聚糖水凝胶对巨噬细胞炎症因子表达的影响   
2.5.1   ELISA检测结果   见图7。







结果显示，培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组白细胞介素1β蛋白表达升高(P < 0.01或P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组白细胞介素1β蛋白表达降低(P < 0.01或P < 0.001)。培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组白细胞介素6蛋白表达升高(P < 0.01或P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶白细胞介素6蛋白表达降低(P < 0.01或P < 0.001)。
2.5.2   RT-PCR检测结果   见图8。



结果显示，培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组白细胞介素1β的mRNA表达升高(P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶组白细胞介素1β 的mRNA表达降低(P < 0.001)。培养1，3 d后，与对照组比较，脂多糖组白细胞介素6的mRNA表达升高(P < 0.001)；与脂多糖组比较，壳聚糖水凝胶白细胞介素6的mRNA表达降低(P < 0.01或P < 0.001)。

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关节软骨由终末分化的软骨细胞和细胞外基质构成[1]。因为关节软骨血液供应不丰富，自我修复的能力较差，一旦发生病损，受损关节会发生不可逆的病理改变并逐步恶化，最终发展为骨关节炎，严重影响人们正常的生活和工作[2]。UTOMOL等[3]的研究表明，不同功能状态的巨噬细胞在骨关节炎滑膜炎症和关节软骨破坏过程中发挥作用。巨噬细胞是一种来源于骨髓细胞谱系高度异质的细胞群体，几乎存在于所有的组织中并呈现出巨大的解剖学和功能多样性[4-5]。国内外研究表明，巨噬细胞在组织发育、体内平衡及炎症反应等多种生理功能中起到关键作用[6-9]。当组织处于感染或受伤等病理状态下，单核细胞会从循环的血液迁移至病理组织中并分化为巨噬细胞[10]，活化的巨噬细胞可以通过参与多种促炎细胞因子(白细胞介素1β及白细胞介素6等)或抑炎细胞因子(白细胞介素10和转化生长因子β)的表达影响疾病的进展。近年来，因激活的巨噬细胞又细分为2种表型(M1极化和M2极化)且表现出完全相反的炎症分泌行为，受到广泛关注。M1 巨噬细胞由干扰素γ和脂多糖诱导，上调与病原体清除有关的基因表达，并驱动炎症以响应细胞内病原体。相比之下，由白细胞介素4和白细胞介素13诱导的 M2巨噬细胞，上调与伤口愈合、清除死亡(或垂死)的细胞和组织有关的基因表达，参与抗炎反应[6，11-13]。巨噬细胞参与调节骨关节炎等多种慢性炎性疾病的发展进程。因此，介导巨噬细胞极化可能为许多炎症相关疾病提供一种新的治疗方案。

水凝胶是一种三维网络凝胶材料，是拥有水含量丰富的亲水聚合物[14]，具备含水量高及多孔结构特点，因此，具备适合细胞黏附、长入、增殖及营养物质与代谢产物传输等优势。在水凝胶制备原材料里，天然多糖具有良好的生物相容性，因此被广泛应用。壳聚糖是一种常见的纯天然多糖，具有优异的生物相容性、低免疫原性等特性，常用于组织修复并用于水凝胶的合成原料[15-17]。壳聚糖水凝胶被广泛应用于药物传送[18]、骨及软骨组织工程等领域[19-20]。其中，壳聚糖水凝胶可通过调节免疫细胞的功能进而影响相关疾病的发展及治疗。HIGHTON等[21]研究表明，基于壳聚糖水凝胶的疫苗接种可产生特定的细胞毒性CD8+ T细胞群抵抗小鼠的黑色素瘤。此外，壳聚糖作为壳聚糖水凝胶的主要成分，可以影响多种免疫相关细胞及其炎症因子表达，然后影响疾病的发展。CARROLL等[22]发现壳聚糖能够激活树突状细胞中的Stimulator of IFN genes (STING)和cyclic-di-GMP-AMP synthase (cGAS)，然后被激活的STING-cGAS会引导1型干扰素激活树突状细胞，从而介导细胞免疫。BUETER等[23]发现壳聚糖能通过吞噬作用的方式激活NLRP3炎症小体。 CHOI等[24]发现给感染单纯疱疹病毒的小鼠口服壳聚糖，可以增加CD11c+树突状细胞、NK1.1+自然杀伤细胞、DX5+自然杀伤细胞、CD4+和CD8+细胞的产生。因此，壳聚糖水凝胶可以参与调控多种免疫细胞的活性和功能，从而影响疾病的发展。

此次实验首次采用一步冻干法制备新型水溶性良好由两步修饰获得的磷酸肌酸改性甲基丙烯酸化壳聚糖，在低毒性引发剂及紫外光照下引发丙烯酸双键聚合，制备新型磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶。将该水凝胶与脂多糖刺激后的大鼠骨髓源性巨噬细胞(M1型巨噬细胞)共培养，通过RT-PCR和ELISA法在mRNA和蛋白水平探查新型壳聚糖水凝胶对巨噬细胞炎症因子表达的影响，以Western Blot和免疫荧光方法检测新型壳聚糖水凝胶对巨噬细胞极化相关蛋白表达的影响。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1   设计   体外细胞实验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用LSD检验。
1.2   时间及地点   实验于2021-07-01/11-09在北京大学深圳医院骨科生物材料国家地方联合工程研究中心完成。
1.3   材料
1.3.1   实验动物   雌性SD大鼠1只，体质量200 g左右，购自广东省医学动物实验中心，许可证号：SCXK(粤)2018-0002)。对动物的处置获得深圳北京大学香港科技大学医学中心实验动物伦理委员会批准。
1.3.2   主要试剂   壳聚糖、N-羟基琥珀酰亚胺购自德国达姆施塔特默克集团公司；纳米氧化镁粉体购自江苏先丰纳米材料科技有限公司；磷酸肌酸钠，四水、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐、吗啉乙磺酸一水合物购自上海阿拉丁公司；甲基丙烯酸酐购自美国Sigma公司；CD206(E6T5J)、Arg1(D4E3M)和GAPDH(14C10)抗体购自美国Cell Signaling Technology公司；F4/80(A18637)购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；驴抗兔(Alexa Fluor 594)(ab150076)、山羊抗兔二抗(ab205718)和大鼠白细胞介素1β ELISA试剂盒(ab100768)购于美国Abcam公司；大鼠白细胞介素6 ELISA试剂盒(ELR-IL-6-CL)购于美国RayBiotech公司；Transfer 
Membrane(IPVH00010)购自美国密理博(milipore)公司；脂多糖(L8880)购自北京索莱宝科技有限公司；CCK-8试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司；抗荧光淬灭剂(含DAPI)购自上海碧云天生物技术有限公司；GAPDH、白细胞介素6、白细胞介素1β引物购自湖南艾科瑞公司；RNA提取试剂盒购自北京天根生物科技有限公司；胎牛血清购自美国赛默飞公司；RIMP培养基(SH30809.01)和DMEM高糖培养基(SH30243.01)购自美国Hyclone公司；Evo M-MLV反转录预混型试剂盒(含去除gDNA试剂，用于qPCR)和Pro Taq HS SYBR Green预混型qPCR试剂盒购自湖南艾科瑞公司。
1.3.3   主要仪器   离心机购自德国艾本德生命科学公司；共聚焦显微镜TCS SP8购自德国徕卡微系统有限公司；电泳仪购自伯乐生命医学产品(上海)有限公司；凝胶化学发光成像系统购自上海勤翔科学仪器有限公司；实时荧光定量PCR仪购自美国赛默飞公司；多功能酶标仪购自瑞士帝肯公司；生物安全柜购自新加坡艺思高科技有限公司；CO2培养箱购自上海力申科学仪器有限公司。
1.4   实验方法   
1.4.1   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶的合成   将3 g壳聚糖放入1%醋酸溶液300 mL 中，室温下搅拌溶解后，缓慢滴加1.1 mL甲基丙烯酸酐，室温下作用24 h。将1.17 g磷酸肌酸钠盐溶解在 0.5 mol/L吗啉乙磺酸一水合物缓冲溶液150 mL中，然后将3.51 g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和1.17 g N-羟基琥珀酰亚胺依次溶解在上述磷酸肌酸钠盐溶液中。把壳聚糖和甲基丙烯酸酐反应液缓慢滴加到上面的磷酸肌酸钠盐反应液中，室温下搅拌反应24 h。用截留分子质量为14 000 Da的透析袋将反应液在去离子水中透析5 d，每天更换2次去离子水，之后冻干得到白色絮状物。用去离子水将冻干的白色絮状物样品溶解到质量浓度为 20 g/L。待样品完全溶解后，取出一定量，在磁力搅拌器上高速旋转的同时加入20 g/L丙烯酰胺、0.4 g/L N-亚甲基双丙烯酰胺和1 g/L I2959。然后将样品吸入2.5 mL注射器中，在紫外线下照射2 h使其形成水凝胶，随后放入-20 ℃的冰箱中过夜冷冻。之后，用刀片将其切成高度约为1 mm的圆片样品(直径为2.5 mL注射器内径0.85 cm)，浸泡在去离子水中，在摇床上慢慢摇匀，浸泡2 d后取出样品(每天至少更换2次去离子水)，之后将水凝胶冻干并放置在真空干燥箱中备用。在进行细胞实验前，冻干的水凝胶在紫外下光照30 min灭菌。
1.4.2   大鼠骨髓源性巨噬细胞的提取及培养   按照WEISCHENFELDT等[25-26]的方法提取巨噬细胞。取SD大鼠，以CO2麻醉处死后，取其股骨和胫骨，放入RIPM培养基中，分离下肢骨附着的肌肉及其他软组织，剪断骨头两端，用注射器将骨髓冲出到50 mL离心管，用注射器反复吹打，用70 μm细胞过滤器过滤细胞悬液；500×g离心8 min，弃去上清液，留细胞沉淀，用RIPM完全培养基(含体积分数10%胎牛血清+1%双抗+20% L929细胞条件培养基)重悬细胞，以合适的密度接种于24孔板，分别在第3，5，6天更换新鲜的培养基。
1.4.3   巨噬细胞的鉴定   在24孔板中放入细胞爬片，将巨噬细胞接种到24孔板内；培养到第7天，取出24孔板，吸出培养基，用PBS清洗3次；40 g/L多聚甲醛固定细胞爬片30 min，封闭15 min；用特异性一抗F4/80(1∶200)4 ℃孵育过夜，然后用驴抗兔二抗(Alexa Fluor594)(1∶400)孵育1 h；用抗荧光淬灭剂封固，然后在共聚焦显微镜下照相。
1.4.4   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞细胞活性影响   采用CCK-8法评估磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶和来自大肠杆菌055:B5的脂多糖对巨噬细胞活性的影响。选用24孔板中培养至第7天的巨噬细胞，1.4×106/孔，分3组培养：对照组每孔加入600 µL细胞完全培养基，脂多糖组每孔加入600 µL含10 µg/L脂多糖的细胞完全培养基；壳聚糖水凝胶组每孔加入磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶冻干样品与600 µL含10 µg/L脂多糖的细胞完全培养基。将细胞培养至规定时间(1，3，5 d)后，去除培养基，之后向每孔中加含300 µL含10% CCK-8试剂的细胞完全培养基，在37 ℃培养箱中孵育1 h，随后每孔取100 µL CCK-8孵化液置于96孔板中，采用酶标仪在450 nm处测定吸光度值。
1.4.5   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞极化的影响   按照1.4.4分组培养巨噬细胞，放入37 ℃培养箱内培养1，3 d，检测巨噬细胞极化情况。
Western Blot检测：取3组巨噬细胞，分别加入RIPA裂解缓冲液，置于冰盒上吹打裂解10 min，采用BCA法测定蛋白浓度。根据测得的蛋白浓度取得等量的蛋白样品，从中加入5×loading buffer，混匀样品，煮沸5 min，然后置于冰上冷却。将制好的SDS-PAGE凝胶放入电泳槽中，加入电泳液后开始上样，完成后开始电泳。待样品跑到分离胶底部后，停止电泳，进行转膜。以300 mA电流转膜90 min，取出PVDF膜，用含5%脱脂奶粉的TBST溶液封闭，封闭完后，孵育特异性一抗ARG1(1∶1 000)、CD206(1∶1 000)和GAPDH(1∶1 000)，4 ℃过夜；然后用山羊抗兔二抗(1∶10 000)孵育1 h，使用凝胶化学发光成像系统检测条带。
免疫荧光染色：取出孔板，用PBS清洗3次，40 g/L多聚甲醛固定细胞爬片30 min，封闭15 min，分别用特异性一抗ARG1(1∶50)、CD206(1∶400) 4 ℃孵育过夜，然后用驴抗兔二抗(Alexa Fluor594)(1∶400)孵育1 h。用抗荧光淬灭剂封固，然后在共聚焦显微镜下拍照。
1.4.6   磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞炎症因子表达的影响   按照1.4.4分组培养巨噬细胞，放入37 ℃培养箱内培养1，3 d，检测巨噬细胞炎症因子表达情况。
RT-PCR检测：按照天根RNA提取试剂盒说明书提取各组细胞总RNA，然后检测其纯度并定量。反转录反应按照艾科瑞生物公司Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒说明，以500 ng总RNA作为模板与反应缓冲液充分混合，PCR反应37 ℃ 15 min、85 ℃ 5 s反转录成cDNA。用目的基因(白细胞介素1β、白细胞介素6)引物及内参(GAPDH)的引物行PCR扩增，扩增条件为：95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火30 s，共循环40次。根据1 µmol引物、10 ng样品、0.08 µmol ROX染料和2×SYBR Green Pro TaqHS PremixⅡ混合设置20 µL的反应体系。引物序列见表1。

ELISA检测：提取各组细胞蛋白，分别加入RIPA裂解缓冲液，置于冰盒上吹打裂解10 min，超声波裂解5 s，裂解2次；14 000 r/min离心20 min，取上清备用。按照ELISA试剂盒说明书操作，将100 µL样品加入检测孔板内，摇床缓慢摇晃，室温孵育2.5 h；以试剂盒所带清洗液清洗4次，每次2 min；然后分别加入生物素化白细胞介素1β、白细胞介素6检测抗体，室温孵育1 h；清洗4遍，加入HRP-链霉亲和素溶液室温孵育45 min；清洗液清洗4遍，加入TMB一步底物试剂，常温孵育30 min；加入50 µL终止反应液，置于多功能酶标仪上在450 nm处检测吸光度值。
1.5   主要观察指标   各组巨噬细胞M2型极化标志蛋白表达与炎症因子mRNA及蛋白表达情况。
1.6   统计学分析   计量资料以x±s形式表达，3组之间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用LSD检验。应用SPSS 26.0进行数据分析，P < 0.05为差异有显著性意义。统计学方法已经北京大学深圳医院生物统计学专家审核。

骨关节炎是一类以关节软骨退变、滑膜炎症、骨结构改变为特征的疾病。在美国，大约有2 700万人遭受着骨关节炎的折磨，造成了巨大的经济负担[27]。骨关节炎的发生与多种因素有关，目前普遍认为关节炎症在骨关节炎的发生和发展中起到核心作用[28]。炎症由多种免疫细胞调控，包括：T细胞、中性粒细胞和巨噬细胞。巨噬细胞是一种来源于骨髓细胞谱系高度异质的细胞群体，其几乎存在于所有的组织中并呈现出巨大的解剖学和功能多样性[4-5]。近年来，因激活的巨噬细胞又细分为2种表型(M1极化和M2极化)，且表现出完全相反的炎症分泌行为，受到广泛关注。M1 巨噬细胞由干扰素γ和脂多糖诱导，上调与病原体清除有关基因的表达，并驱动炎症以响应细胞内病原体。相比之下，由白细胞介素4和白细胞介素13诱导的 M2 巨噬细胞，上调与伤口愈合有关的基因表达，并参与抗炎反应[11-14]。这种促炎和抗炎巨噬细胞的功能失调可能会导致慢性炎症，在包括骨关节炎在内的慢性炎症疾病中起到重要作用。

壳聚糖是自然界普遍存在的线性多糖，因其极好的组织相容性、可降解性及低毒性，已经应用在肿瘤等医学领域[29-31]。近年来多个实验室的研究数据显示，壳聚糖及其衍生物也显示出较好的抗菌、抗氧化应激、抗炎和免疫调节特性[17，32-35]。壳聚糖及其衍生物对细菌感染、慢性炎症引起的疾病可能有一定的预防和治疗效果。虽然，壳聚糖展现出多项生物学效应并可能为多领域疾病的防治提供潜在的治疗方案，但是它单独使用时存在成药性差的问题，因此，构建一种新的载送系统将为壳聚糖的应用提供更大的空间。由水溶性高分子交联而成的水凝胶遇水时也能保持良好的稳定性，其生物结构类似于细胞外基质并与活体组织相近，可被广泛应用于药物递送系统。然而，天然的壳聚糖水溶性较差，难以利用简单温和的方法直接制备成水凝胶。通过化学方法在壳聚糖上接枝其他活性官能团、分子或成分，如羟基、羧基、甲基丙烯酸酐化、磷酸等可提高壳聚糖的水溶性，赋予壳聚糖功能性并在一定条件下形成水凝胶。甲基丙烯酸酐化壳聚糖可在低毒性引发剂及紫外光照下引发聚合制成水凝胶。课题组通过紫外交联法合成了磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶，其在平衡盐溶液中表现出较好的稳定性。磷酸肌酸是一种高能量磷酸，是人体中常见的能量载体，具有良好的生物安全性。此次实验结果显示，磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶与巨噬细胞共培养时，并未对巨噬细胞的活性产生明显影响，可见磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶具有较好的生物相容性。

壳聚糖作为一种天然黏性多糖参与调控多种免疫细胞的活性和分泌行为。有动物实验数据显示，给感染单纯疱疹病毒的小鼠口服壳聚糖，可明显改善动物体内的病毒数量，同时增加多种免疫细胞的数量(CD11c+树突状细胞、NK1.1+自然杀伤细胞、DX5+自然杀伤细胞、CD4+及CD8+细胞)[24]。另有研究证实，壳聚糖可降低多种肥大细胞产生的多种炎症因子(肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β)的表达，从而降低过敏反应。课题组发现壳聚糖可影响骨髓来源巨噬细胞的极化。作者及同行的数据表明，壳聚糖几乎可以影响所有种类免疫细胞的行为，这些数据可能为壳聚糖在免疫系统疾病的广泛应用提供了重要基础[22，24，36]。值得注意的是，蛋白免疫印迹和免疫荧光数据显示，磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶可促进巨噬细胞的ARG1和CD206的表达，上述数据表明改性的壳聚糖水凝胶可促进巨噬细胞M2极化。JI等[37]的研究发现磷酸肌酸可促进巨噬细胞M2型极化，并同时抑制巨噬细胞M1型极化，表现出抗炎的功能。因此，作者推测磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶中的磷酸肌酸和壳聚糖成分，可能会协同促进巨噬细胞M2极化。在免疫或炎症调节过程中，M2型巨噬细胞具有抗炎作用，可促进受损组织愈合。此次实验中，磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶表现出促进巨噬细胞M2型极化，因此该水凝胶在抑制骨关节炎症进一步发生及发展与促进受损软骨的修复方面可能产生积极作用。M1型极化的巨噬细胞可产生多种促炎细胞因子(如：白细胞介素1β和白细胞介素6)。在关节滑膜处，高水平的促炎因子(白细胞介素1β、白细胞介素6等)表达将进一步激化炎症反应，刺激软骨细胞产生更多细胞外基质降解酶，加重软骨基质破坏。此次实验结果显示，磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶与脂多糖刺激的巨噬细胞共培养后，可明显降低两种关键促炎细胞因子(白细胞介素6、白细胞介素1β)的mRNA和蛋白水平表达。巨噬细胞极化及其参与调控炎症因子的表达，可介导自身免疫性疾病[38]、慢性炎症性疾病等疾病的发生发展[39]。因此，作者推断新合成的磷酸肌酸改性壳聚糖作为一种新的生物医学材料，将来可能为骨关节炎等诸多无菌性炎症疾病提供一种新的治疗方案。

此次实验选择大鼠的骨髓原代巨噬细胞来研究改性壳聚糖水凝胶对巨噬细胞极化的影响，比RAW264.7等细胞系更贴近原始组织的遗传和表型。然后，通过蛋白质印迹法和免疫荧光在蛋白层面上双层验证材料对巨噬细胞极化的作用，通过qPCR法在mRNA水平上研究材料对巨噬细胞极化相关因子表达的影响。当然，实验也有一定的局限性，只在细胞层面研究了该水凝胶的抗炎作用，未来会补充一些动物实验，研究磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶在动物体内对巨噬细胞极化及其介导炎症反应的影响。

综上所述，此次实验通过磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶与脂多糖刺激下的大鼠骨髓源性巨噬细胞共培养发现，磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶促进了巨噬细胞的M2型极化、抑制了促炎因子的表达，为磷酸肌酸改性的壳聚糖水凝胶这种生物活性材料在组织工程和炎症相关疾病中的进一步应用打下了基础。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文题释义：
水凝胶：是由水含量丰富的亲水聚合物组成的三维网络结构凝胶材料，有含水量高及具备多孔结构特点，利于细胞的黏附、增殖及营养物质与代谢产物的传输。
壳聚糖：通常从甲壳类动物的壳上提取而来，是一种线性天然多糖，在结构上与糖胺聚糖相似，具有良好的生物相容性、生物安全性、低毒性和低免疫刺激性，常用于骨/软骨组织工程支架的基质材料，如常用于水凝胶的合成。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文章对壳聚糖依次进行甲基丙烯酸酐及磷酸肌酸修饰，采用一步冻干法得到水溶性良好的新型磷酸肌酸改性壳聚糖；用紫外交联法合成磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶；将大鼠骨髓源性巨噬细胞与磷酸肌酸改性壳聚糖水凝胶进行共培养，从mRNA基因水平和蛋白表达层面研究该新型水凝胶对大鼠骨髓源性的巨噬细胞极化和炎症因子表达的影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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