miR-15家族促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0897

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (21): 3316-3321.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0897

• 肿瘤干细胞 cancer stem cells • 上一篇下一篇

miR-15家族促进CD133⁺胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭

蔡尚党¹，蔡满地²，娄宁³，郭艳萍⁴，殷涛⁵

¹河南省中医院肛肠科，河南省郑州市 450002；²河南大学医学院临床医学系，河南省开封市 475000；³中山大学附属肿瘤医院ICU，广东省广州市 510000；⁴河南省人民医院病理科，河南省郑州市 450008；⁵华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺病研究所，湖北省武汉市 430022

修回日期:2018-02-24 出版日期:2018-07-28 发布日期:2018-07-28
作者简介:蔡尚党，男，1969年生，河南省兰考县人，汉族，2016年郑州大学医学院毕业，硕士，副主任医师，主要从事肛肠外科方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81372665)

miR-15 family promotes the migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells

Cai Shang-dang¹, Cai Man-di², Lou Ning³, Guo Yan-ping⁴, Yin Tao⁵

¹Department of Anorectal, Henan Traditional Chinese Medicine Hospital, Zhengzhou 450002, Henan Province, China; ²Department of Clinical Medicine, Medical College of Henan University, Kaifeng 475000, Henan Province, China; ³ICU, Sun Yat-sen University Cancer Center, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China; ⁴Department of Pathology, Henan Provincial People’s Hospital, Zhengzhou 450008, Henan Province, China; ⁵Pancreatic Disease Research Institute, Wuhan Union Hospital of Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, Hubei Province, China

Revised:2018-02-24 Online:2018-07-28 Published:2018-07-28
About author:Cai Shang-dang, Master, Associate chief physician, Department of Anorectal, Henan Traditional Chinese Medicine Hospital, Zhengzhou 450002, Henan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81372665

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
CD133：是一个分子质量为120 ku的五次跨膜糖蛋白，最初发现其在造血干细胞及祖细胞上表达。一些研究表明，CD133是包括胰腺癌在内的多种肿瘤细胞的干细胞标记，与癌症的预后不良有关。
肿瘤干细胞的分离培养方法：主要有2种，一种是利用流式细胞仪或免疫磁珠对细胞表面表达的特定抗原分子等阳性细胞进行富集，得到含量较高的肿瘤干细胞；另一种方法是使用无血清培养基培养，通过非干细胞凋亡而干细胞成球的特性筛选出肿瘤干细胞。

摘要
背景：一些研究表明，CD133是包括胰腺癌在内的多种肿瘤细胞的干细胞标记，与癌症的预后不良有关。miR-15家族参与凋亡、细胞分化与周期调控、应激等重要细胞功能活动的调节，具有潜在的干预价值。
目的：探讨miR-15家族对CD133⁺胰腺癌干样细胞迁移和侵袭的影响。
方法：首先构建高迁移性胰腺癌细胞亚系CD133⁺Capan-1M9，经鉴定具有干样细胞特征，在此基础上通过慢病毒转导的方式构建过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的CD133⁺Capan-1M9细胞系，同时将稳定转染NC-miRNA的细胞系作为阴性对照组。qRT-PCR检测过表达细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达情况及上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA表达；MTT法检测过表达细胞系增殖能力和吉西他滨抗性；球体形成实验检测过表达细胞系自我更新能力；细胞迁移和侵袭实验检测过表达细胞系的迁移和侵袭能力；Western blot检测过表达细胞系中上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素表达。
结果与结论：①与阴性对照组相比，过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达量分别升高了8.3，10，9.5倍，而纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA和蛋白表达也显著升高(P < 0.05)；②过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系增殖能力与阴性对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05)，而对吉西他滨的抗性显著增强(P < 0.05)；③与阴性对照组相比，过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系的球体数量和体积没有显著变化(P > 0.05)；④与阴性对照组相比，过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系的细胞迁移和侵袭能力显著增强(P < 0.05)；⑤miR-15家族能够调控上皮-间质转化进而促进CD133⁺胰腺癌干样细胞的迁移与侵袭。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID:0000-0002-8276-8624(蔡尚党)

关键词: 胰腺癌, miR-15, 肿瘤干细胞, CD133, 细胞迁移, 细胞侵袭, 干细胞, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Some studies have shown that CD133 is a stem cell marker for a variety of tumor cells, such as pancreatic cancer, which is associated with a poor prognosis in cancer patients. miR-15 family is involved in cell apoptosis, differentiation, cycle regulation and stress, and has potential value as an intervention.
OBJECTIVE: To investigate the effects of miR-15 family on the migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells.
METHODS: First, a highly migrating pancreatic cancer cell line, Capan-1M9, was constructed, and then CD133⁺Capan-1M9 cell lines that overexpressed miR-15a, miR-15b and miR-15c were constructed by lentivirus transduction. NC-miRNA cell lines were taken as negative controls. Expression of miR-15a, miR-15b and miR-15c in the recombinant cell lines and epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related proteins, fibronectin, vimentin and N-cadherin mRNA were determined by qRT-PCR. MTT assay was used to detect the proliferation and gemcitabine resistance of recombinant cell lines. Spheroid formation test was used to detect the self-renewal ability of recombinant cell lines. Migration and invasion ability of the recombinant cell lines were detected by cell migration and invasion assay. EMT-related proteins fibronectin, vimentin and N-cadherin were detected by western blot.
RESULTS AND CONCLUSION: qPCR results showed that the expression of miR-15a, miR-15b and miR-15c in the CD133⁺ Capan-1M9 cell lines increased by 8.3, 10 and 9.5 times compared with the negative control group, and the expression of fibronectin, vimentin and N-cadherin mRNA was also significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in cell proliferation between the recombinant cell lines and the negative control group (P > 0.05), but the gemcitabine resistance was significantly increased in the recombinant cell lines as detected by the MTT (P < 0.05). The number and volume of spheres in the recombinant cell lines did not change significantly compared with the negative control group (P > 0.05). The cell migration and invasion abilities of the recombinant cell line were significantly enhanced compared with the negative control group (P < 0.05). Our experimental findings suggest that the miR-15 family can promote migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells via EMT regulation.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Pancreatic Neoplasms, MicroRNAs, Neoplastic Stem Cells, Cell Movement, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

蔡尚党，蔡满地，娄宁，郭艳萍，殷涛. miR-15家族促进CD133⁺胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(21): 3316-3321.

Cai Shang-dang, Cai Man-di, Lou Ning, Guo Yan-ping, Yin Tao. miR-15 family promotes the migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(21): 3316-3321.

图/表（结果） 2

2.1 过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的细胞系 通过慢病毒转导的方式建立过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的CD133⁺Capan-1M9细胞系，同时转导随机序列的细胞系作为对照，使用FACSAria分析GFP表达阳性的CD133⁺Capan-1M9细胞比例，GFP阳性细胞比例超过90%(图1A)，qPCR检测结果表明，构建的3种细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c的表达量显著升高(图1B)。

2.2 过表达miR-15不影响CD133⁺Capan-1M9细胞增殖和球体形成 为检测过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c对CD133⁺Capan-1M9细胞增殖的影响，使用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明，与对照组细胞相比，过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c不影响细胞增殖(图2A)。

通过球体形成实验检测肿瘤干细胞的自我更新能力，结果表明，与对照组相比，miR-15a、miR-15b和miR-15c过表达细胞中球体数量和大小没有显著差异(图2B和D)，表明miR-15a、miR-15b和miR-15c对CD133⁺Capan-1M9的球体形成没有显著影响。

检测miR-15a、miR-15b和miR-15c对细胞吉西他滨化疗抗性的影响。结果表明，miR-15a、miR-15b和miR-15c过表达细胞系均对吉西他滨产生抗性(图2C)。miR-15a、miR-15b和miR-15c能够促进CD133⁺Capan-1M9细胞的吉西他滨抗性。

2.3 miR-15a、miR-15b和miR-15c促进CD133⁺Capan-1M9细胞迁移和侵袭 过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c均显著促进了CD133⁺Capan-1M9细胞的迁移和侵袭(图3A和B)。

2.4 miR-15家族促进间充质标记表达 荧光定量RT-PCR检测结果表明，miR-15a、miR-15b和miR-15c过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系中，间质标记纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA表达均显著增加(图4A)。Western blot检测结果表明，miR-15a、miR-15b和miR-15c过表达CD133⁺Capan-1M9细胞系中纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素表达量均增加(图4B)。上述结果表明，miR-15a、miR-15b和miR-15c促进CD133⁺ Capan-1M9细胞迁移和侵袭与间质表型之间有相关性。

参考文献

[1] Siegel R, Ma J, Zou Z, et al. Cancer statistics, 2014. CA Cancer J Clin. 2014;64(1):9-29.

[2] O'Brien CA, Pollett A, Gallinger S, et al. A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice. Nature. 2007;445(7123):106-110.

[3] Hsieh CC, Liao WY, Chen CL, et al. Identification of metastatic subsets of pancreatic cancer stem cells possessing metabolic features of pluripotent stem cells. Cancer Research. 2015; 75(15 Supplement) :1511.

[4] Hasegawa S, Ishii H, Nishikawa S, et al. Identification of microRNA networks in pancreatic cancer stem cells. Cancer Research. 2013; 73 (8 Supplement):4897.

[5] Vorvis C, Poultsides GA, Norton JA, et al. Identification and Whole Transcriptome Characterization of Pancreatic Cancer Stem Cells. Gastroenterology. 2012; 142(5) :S50-S51.

[6] Abdullah LN, Chow EK. Mechanisms of chemoresistance in cancer stem cells. Clin Transl Med. 2013;2(1):3.

[7] Yin AH, Miraglia S, Zanjani ED, et al. AC133, a novel marker for human hematopoietic stem and progenitor cells. Blood. 1997;90(12):5002-5012.

[8] Ding Q, Yoshimitsu M, Kuwahata T, et al. Establishment of a highly migratory subclone reveals that CD133 contributes to migration and invasion through epithelial-mesenchymal transition in pancreatic cancer. Hum Cell. 2012;25(1):1-8.

[9] Ma S. Biology and clinical implications of CD133(+) liver cancer stem cells. Exp Cell Res. 2013;319(2):126-132.

[10] Maeda S, Shinchi H, Kurahara H, et al. CD133 expression is correlated with lymph node metastasis and vascular endothelial growth factor-C expression in pancreatic cancer. Br J Cancer. 2008;98(8):1389-1397.

[11] Zhou F, Mu YD, Liang J, et al. Expression and prognostic value of tumor stem cell markers ALDH1 and CD133 in colorectal carcinoma. Oncol Lett. 2014;7(2):507-512.

[12] Wen L, Chen XZ, Yang K, et al. Prognostic value of cancer stem cell marker CD133 expression in gastric cancer: a systematic review. PLoS One. 2013;8(3):e59154.

[13] Bartel DP. MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 2004;116(2):281-297.

[14] Miranda RC, Tsai PC. Mechanisms of microRNA function in fetal neural stem cells: implications for ethanol teratology. Neurotoxicology & Teratology. 2014;43(5):82.

[15] Chen K, Rajewsky N. The evolution of gene regulation by transcription factors and microRNAs. Nat Rev Genet. 2007;8(2):93-103.

[16] Xue Y, Abou Tayoun AN, Abo KM, et al. MicroRNAs as diagnostic markers for pancreatic ductal adenocarcinoma and its precursor, pancreatic intraepithelial neoplasm. Cancer Genet. 2013;206(6):217-221.

[17] Papaconstantinou IG, Manta A, Gazouli M, et al. Expression of microRNAs in patients with pancreatic cancer and its prognostic significance. Pancreas. 2013;42(1):67-71.

[18] Bloomston M, Frankel WL, Petrocca F, et al. MicroRNA expression patterns to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis. JAMA. 2007;297(17):1901-1908.

[19] Konrad CV, Murali R, Varghese BA, et al. The role of cancer stem cells in tumor heterogeneity and resistance to therapy. Can J Physiol Pharmacol. 2017;95(1):1-15.

[20] Hermann PC, Huber SL, Herrler T, et al. Distinct populations of cancer stem cells determine tumor growth and metastatic activity in human pancreatic cancer. Cell Stem Cell. 2007;1(3): 313-323.

[21] Thiery JP, Acloque H, Huang RY, et al. Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease. Cell. 2009;139(5):871-890.

[22] Brunetti O, Russo A, Scarpa A, et al. MicroRNA in pancreatic adenocarcinoma: predictive/prognostic biomarkers or therapeutic targets. Oncotarget. 2015;6(27):23323-23341.

[23] Xia Y, Chen Q, Zhong Z, et al. Down-regulation of miR-30c promotes the invasion of non-small cell lung cancer by targeting MTA1. Cell Physiol Biochem. 2013;32(2):476-485.

[24] Zhong K, Chen K, Han L, et al. MicroRNA-30b/c inhibits non-small cell lung cancer cell proliferation by targeting Rab18. BMC Cancer. 2014;14:703.

[25] Ichikawa T, Sato F, Terasawa K, et al. Trastuzumab produces therapeutic actions by upregulating miR-26a and miR-30b in breast cancer cells. PLoS One. 2012;7(2):e31422.

[26] Zhao H, Xu Z, Qin H, et al. miR-30b regulates migration and invasion of human colorectal cancer via SIX1. Biochem J. 2014;460(1):117-125.

[27] Quintavalle C, Donnarumma E, Iaboni M, et al. Effect of miR-21 and miR-30b/c on TRAIL-induced apoptosis in glioma cells. Oncogene. 2013;32(34):4001-4008.

引言

材料方法

1.1 设计 细胞学实验分析。

1.2 时间及地点 2015年5月至2016年5月在河南省中医院病理实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验细胞 人胰腺癌细胞系Capan-1购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。根据以前文献所描述的方法在Capan1基础上建立高迁移性胰腺癌细胞亚系CD133⁺Capan-1M9，经鉴定具有干样细胞特征^[9]。细胞用含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的DMEM/F12培养基培养于37 ℃，体积分数为5%CO₂的饱和湿度培养箱中。

1.3.2 实验试剂及仪器 DMEM/F12培养基、胎牛血清(Gibco，美国)；反转录试剂盒、RNAiso plus(TaKaRa，大连)；SYBR Premix Ex Taq^TM Ⅱ(Roche，德国)；青霉素和链霉素(Sigma，美国)；兔抗人纤维连接蛋白抗体(Cell Signaling Technology，美国)；鼠抗人波形蛋白及α-tubulin单克隆抗体(Sigma，美国)；兔抗人N-神经钙黏素单克隆抗体(Santa Cruz，美国)；HRP-标记羊抗鼠/兔IgG(Abcam，英国)；人重组表皮生长因子和人重组碱性成纤维细胞生长因子(BD，美国)；重组慢病毒质粒(碧云天生物技术研究所，中国)；吉西他滨(Sigma，美国)；MTT试剂盒(碧云天生物技术研究所，中国)；荧光定量PCR仪(Applied Biosystems，美国)；增强型化学发光显色系统(Amersham Life Science，美国)；FACSAria Ⅱ流式细胞仪(BD，瑞士)；倒置荧光显微镜(OLYMPUS，日本)；Transwell小室(Corning，美国)。

1.4 实验方法

1.4.1 建立慢病毒介导的过表达miR-15的细胞系 根据说明书的要求，在凝聚胺存在的条件下用介导miR-15a、miR-15b和miR-15c过表达的重组慢病毒感染CD133⁺ Capan-1M9细胞，然后用含嘌呤霉素的培养基加压筛选5 d，使用FACSAria系统检测GFP阳性细胞。

1.4.2 细胞增殖检测 根据说明书的要求，使用MTT法检测细胞增殖活性。简述如下：将2.0×10³个稳定转染miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞铺于96孔细胞培养板内，每孔100 μL。铺板后1，2，3，4 d，分别向96孔细胞培养板中加入MTT，每孔20 μL，MTT的终质量浓度为5 g/L，然后将细胞培养板置于37 ℃，体积分数为5%CO₂细胞培养箱中孵育4 h。每孔加入200 μL二甲基亚砜，振荡10 min使结晶物充分溶解，使用微孔板分析仪测定样品在570 nm处的吸光度值。所有的实验数据代表至少6个孔的平均值。以转染NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞作为阴性对照。对照组的细胞活性设定为100%。

1.4.3 球体形成检测 取过表达miR-15a、miR-15b和miR-15c的CD133⁺Capan-1M9细胞，使用含20 μg/L重组人表皮生长因子、10 μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、2%B27、100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的无血清DMEM/F12培养基制备细胞悬液，然后用FACSAria Ⅱ系统将单个细胞接种于96孔poly-HEMA包被培养板中。细胞接种后3周，显微镜下检测含有球体的培养孔数目及球体体积。

1.4.4 细胞毒性检测 将转染不同miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞悬液以5×10³/孔的密度铺于96孔细胞培养板中，每孔100 μL，37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱内培养24 h。然后，细胞经不同质量浓度(0，1，10 μg/L)吉西他滨处理48 h，MTT法检测吉西他滨的细胞毒性作用。

1.4.5 细胞迁移和侵袭检测 24孔Transwell培养板用于体外检测细胞迁移和侵袭能力。①对于迁移能力检测，转染不同miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞以5×10⁴ /孔的密度铺于上层腔室，内含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养基，小室内衬有未包被的膜，然后将小室置于24孔培养板的孔中并用无血清培养基于37 ℃孵育24 h，观察记录相对细胞迁移比例；②对于侵袭能力检测，转染不同miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞用无血清的培养基以8×10⁴/孔的密度铺于上层腔室，然后将含体积分数为20%胎牛血清的培养基加入下层腔室，孵育24 h后，用棉签将非侵袭细胞从上层腔室移走，而侵袭的细胞也从下层腔室移走，从上层和下层得到的细胞均用0.1%结晶紫在37 ℃染色30 min，PBS洗涤，被染色的细胞在33%的冰浴乙酸中振荡孵育10 min。通过读取样品在570 nm处的吸光度值计算相对细胞侵袭比例，每个实验进行3次独立重复的实验。

1.4.6 荧光定量RT-PCR检测 根据说明书的要求使用Trizol试剂提取转染不同miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞中总RNA，按反转录试剂盒说明配制反转录试剂，反转录合成cDNA，将合成的cDNA稀释10倍，荧光定量RT-PCR(qPCR)进一步检测纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏蛋白mRNA在不同转染细胞中的相对表达量，每个样品3个复孔；qPCR反应条件：95 ℃ 10 s预变性；然后95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40个循环，采用GAPDH作为mRNA检测的内参基因。纤维连接蛋白基因检测引物序列F：5’-ACA CGA GGG TAA GAT CCA ACA ATA G-3’；R：5’-CAT ACA AGC GCG GCG AAT TT-3’；波形蛋白基因检测引物序列F：5’ -CTG GCA TTC CGC GCA CA-3’，R：5’-AAC TCA GCT GTA TTG ACC GT-3’；N-神经钙黏素基因检测引物序列：F：5’-GAA CA C ACG ACA GAT AAT GTA CGA G-3’；R：5’-CCA ACG ATT AGC ATG GAG CT-3’；采用2^-ΔΔCt方法计算目的基因mRNA相对表达量。

1.4.7 Western blot检测 消化收集转染不同miRNA或NC-miRNA的CD133⁺Capan-1M9细胞于1.5 mL离心管中，PBS洗涤1次，每管加入200 μL 1×SDS loading buffer，反复吹打重悬细胞，95℃煮沸10 min，12 000×g离心10 min，收集上清总蛋白，顺序加样跑SDS-PAGE，采用湿转法将蛋白转移至PVDF膜上，2.5%脱脂奶粉室温封闭1 h，PBST充分洗膜后加特异性一抗，一抗稀释比例为纤维连接蛋白(1∶1 000)、波形蛋白(1∶2 000)，N-神经钙黏素(1∶500)，α-tubulin(1∶5 000)，4 ℃过夜孵育，PBST充分洗膜后，用HRP标记的二抗(1∶2 000)室温孵育2 h，PBST充分洗膜后加ECL发光液显影，α-tubulin为上样内参蛋白。

1.5 主要观察指标 ①qRT-PCR检测过表达细胞系中miR-15a、miR-15b和miR-15c表达情况及上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素mRNA表达；②MTT法检测过表达细胞系增殖能力和吉西他滨抗性；③球体形成实验检测过表达细胞系自我更新能力；④细胞迁移和侵袭实验检测过表达细胞系的迁移和侵袭能力；⑤Western blot检测过表达细胞系中上皮-间充质转化相关蛋白纤维连接蛋白、波形蛋白和N-神经钙黏素表达。

1.6 统计学分析 用SPSS 13.0对实验数据进行统计分析，数据以x(_)±s表示，所有数据用student’s t 检验或ANOVA进行统计分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

肿瘤干细胞作为癌症发育和进化的一种模型受到了研究人员越来越多的关注。肿瘤组织能维持一小部分细胞的干细胞特性，如自我更新、多系分化能力和致肿瘤性^[19]。CD133已经被证明是胰腺癌肿瘤干细胞标记之一^[20]，以前的报道表明CD133在胰腺癌细胞中通过促进上皮-间质转化而在细胞迁移和侵袭过程中发挥重要作用^[8]。上皮-间质转化是促进细胞迁移和侵袭的机制之一，其在肿瘤进展和转移过程中发挥重要作用^[21]，这表明CD133通过上皮-间质转化调控而在肿瘤干细胞功能中发挥至关重要的作用。

一些研究通过对比正常组织和胰腺癌组织探讨了miRNA的表达谱，miR-34和miR-155在胰腺癌组织中上调表达，而miR-615和miR-124在胰腺癌组织中下调表达^[22]，表明了miRNA的差异化表达。实验探讨了胰腺癌中miR-15家族的表达情况及其对胰腺癌肿瘤干细胞增殖和侵袭的影响。当前的研究结果证明CD133能调控miR-15家族表达，miR-15a、miR-15b和miR-15c能促进CD133⁺胰腺癌肿瘤干细胞迁移、侵袭和化疗抗性。

以前有报道表明miR-30家族能在包括非小细胞肺癌^[23-24]、乳腺癌和结肠癌在内的癌症中作为肿瘤抑制因子发挥作用^[25-26]。然而，也有一些研究表明该miRNA家族能促进胶质瘤的发育^[27]。这说明同一microRNA家族在不同的肿瘤中发挥的作用是不同的。该研究中，miR-15家族在胰腺癌中表现出了促肿瘤特性。结果表明，miR-15能促进N-神经钙黏素、波形蛋白表达，miRNAs通过结合于靶基因的互补序列发挥功能，一种miRNA可能调控多种靶基因的表达，并且靶基因的表达不仅仅依赖于一种miRNA的调控。因此，miRNA的功能可能依赖于不同细胞内的表达谱的差异。

总之，实验证明了miR-15家族能促进CD133⁺胰腺癌干样细胞迁移和侵袭，证明了miR-15家族在胰腺癌中发挥作用，这些发现表明靶向miR-15家族有助于针对CD133⁺胰腺癌干样细胞的新型治疗手段的开发，然而，miR-15家族在胰腺癌肿瘤干细胞中的作用还需要进一步的深入研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

miR-15家族促进CD133⁺胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭

miR-15 family promotes the migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 2

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[2]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[5]	汪显耀, 关亚琳, 刘忠山. 提高间充质干细胞治疗难愈性创面的策略[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1081-1087.
[6]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[7]	廖成成, 安家兴, 谭张雪, 王倩, 刘建国. 口腔鳞状细胞癌干细胞的治疗靶点及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1096-1103.
[8]	谢文佳, 夏天娇, 周卿云, 刘羽佳, 顾小萍. 小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1109-1115.
[9]	李珊珊, 郭笑霄, 尤冉, 杨秀芬, 赵露, 陈曦, 王艳玲. 感光细胞替代治疗视网膜变性疾病[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1116-1121.
[10]	焦慧, 张一宁, 宋雨晴, 林宇, 王秀丽. 乳腺癌类器官研究进展及临床应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1122-1128.
[11]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[12]	曾燕华, 郝延磊. 许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1135-1141.
[13]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕飞, 张舒涵, 张晓琳, 马隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[14]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[15]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.

miR-15家族促进CD133+胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭

miR-15 family promotes the migration and invasion of CD133+ pancreatic cancer stem-like cells

PDF

可视化

引用本文

使用本文

miR-15家族促进CD133⁺胰腺癌干样细胞的迁移和侵袭

miR-15 family promotes the migration and invasion of CD133⁺ pancreatic cancer stem-like cells